雙黃花顆粒抗炎解熱藥理作用的實驗研究*

劉 林 莫韋皓 鄧東方 孟 盼 楊 蕙 王宇紅△

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208）

雙黃花顆粒抗炎解熱藥理作用的實驗研究*

劉 林1莫韋皓1鄧東方1孟 盼2楊 蕙2王宇紅2△

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208）

目的 觀察雙黃花顆粒的抗炎、解熱的藥理作用。方法 采用足腫脹、耳腫脹及毛細血管通透性實驗來觀察該制劑抗炎作用；采用酵母致大鼠發熱實驗來觀察該制劑解熱作用。結果 在足腫脹實驗中，雙黃花高、中劑量組在藥后2、4 h均顯著抑制角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹。此外雙黃花高劑量組能顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹的腫脹度及小鼠腹腔毛細血管通透性的增加。在酵母致熱實驗中，雙黃花高劑量組大鼠藥后不同時間點體溫值顯著降低，雙黃花中劑量組給藥后2 h體溫值顯著降低。結論 雙黃花顆粒具有較好的抗炎、解熱作用，為其臨床應用提供了理論基礎。

雙黃花顆粒 急性上呼吸道感染 抗炎 解熱

△通信作者

雙黃花顆粒是由黃芪、黃芩、金銀花組成中藥復方顆粒制劑，具有清宣肺衛、解毒益氣、平衡陰陽之效。臨床上用于治療風熱阻肺（衛）兼氣虛證急性上呼吸道感染療效顯著，能明顯改善急性上呼吸道感染患者的臨床癥狀，降低體溫、縮短發熱患者的解熱時間［1］。實驗研究表明雙黃花對急性上呼吸道感染患者有一定的抗病毒作用，且無不良反應［2］。為進一步探討其作用機制，從理論上為其臨床使用提供依據，本研究通過采用足腫脹、耳腫脹及毛細血管通透性實驗來觀察該制劑抗炎作用，采用酵母致大鼠發熱實驗來觀察該制劑解熱作用。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物雙黃花顆粒，由湖南中醫藥研究院提供，批號20110611；阿司匹林，阿斯利康制藥有限公司生產，批號：1101083；蓮花清瘟膠囊，石家莊以嶺藥業股份有限公司生產，批號：110222；布洛芬緩釋膠囊，中美天津史克制藥有限公司，批號：11080517；醋酸潑尼松片，浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：110340。

1.2 動物SPF級SD大鼠150只，雄性；SPF級ICR小鼠130只，雌雄各半。均購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，生產許可證號：SCXK（湘）2009-0004。

1.3 試劑與儀器干酵母片，安徽宏業藥業有限公司生產，批號：110909；氯化鈉注射液，湖南科倫制藥有限公司，批號：D110907G；角叉菜膠，sigma公司；水合氯醛，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：2011030。AY-120電子分析天平，日本島津；DT-1000A電子天平，江蘇常熟市意歐儀器儀表有限公司；YLS-7B足趾容積測定儀，山東省醫學科學院設備；CW100型溫度換能器，北京新航興業科貿有限公司；BL-420F生物機能實驗系統，成都泰盟科技有限公司；TG16-WS臺式高速離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；UV-1800紫外分光光度計，日本島津。

1.4 大鼠足腫脹實驗［3］取雄性SPF級SD大鼠60只，體質量180～200 g。按體質量隨機分為6組：模型對照組（予蒸餾水），阿司匹林組（0.162 g/kg），蓮花清瘟組（0.756 g/kg）、雙黃花高劑量組（10.368 g/kg）、雙黃花中劑量組（5.184 g/kg）、雙黃花低劑量組（2.592 g/kg），每組10只。灌胃給藥3 d，灌胃體積為10 mL/kg，模型對照組給予等劑量的生理鹽水。末次給藥前測定大鼠右后足足趾容積為致炎前容積，末次給藥1 h后，大鼠右后足趾中部皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL致炎，于致炎后1、2、4、6 h各測右后足足趾容積1次。計算腫脹率：腫脹率=（致炎后足趾容積-致炎前足趾容積）／致炎前足趾容積×100%。

1.5 小鼠耳腫脹實驗［3］取70只SPF級ICR小鼠，雌雄各半，體質量18～22 g。適應性飼養3 d，按性別、體質量分層隨機分為模型對照組（蒸餾水），阿司匹林組（195 mg/kg），連花清瘟組（1.092 g/kg），雙黃花高劑量組（14.976 g/kg），雙黃花中劑量組（7.488 g/kg），雙黃花低劑量組（3.744 g/kg），每組10只。所有動物灌胃給藥，灌胃體積20 mL/kg，除模型對照組給予等體積蒸餾水外，其余各組給予相應藥物，每日1次，共7 d。末次灌胃1 h后，各組均于右耳正反面各均勻涂抹25 μL二甲苯致炎，致炎后60 min后處死動物，用8 mm打孔器打取左右耳同一部位圓片，稱重，按下式計算腫脹度和腫脹率。腫脹度=右耳片質量-左耳片質量。耳腫脹抑制率 =［（模型對照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）／模型對照組耳腫脹度］×100%。

1.6 小鼠毛細血管通透性實驗［3］取60只SPF級ICR小鼠，雌雄各半，體質量18～22 g。適應性飼養3 d，根據體質量隨機分為模型對照組、醋酸潑尼松組（7.8mg/kg）、蓮花清瘟組（1.092 g/kg）、雙黃花高（14.976 g/kg）、中（7.488 g/kg）、低（3.744 g/kg）劑量組，每組 10 只。 每日灌胃給藥1次，灌胃體積為20 mL/kg，模型對照組給予等劑量蒸餾水，連續給藥7 d。第7日末次給藥前禁食不禁水12 h，給藥30 min后，尾靜脈注射0.5%伊文氏藍生理鹽水溶液（10 mL/kg），同時各組立即腹腔注射0.8%醋酸生理鹽水溶液10 mL/kg。20 min后斷頸處死小鼠，腹腔注射5 mL生理鹽水，輕揉腹部1 min，剪開腹部用采集管吸取腹腔溶液，離心（3000 r/min，15 min），取上清液，于紫外分光光度計590 nm處測定吸收度值（A）。

1.7 啤酒酵母致大鼠發熱實驗 ［3］取雄性SPF級SD大鼠90只，體質量130～160 g。適應性飼養2 d，實驗前預測體溫3次，剔除不在正常體溫范圍及體溫波動＞0.3℃的動物。剩下的動物按體質量分層隨機分組，分為模型對照組（蒸餾水）、布洛芬組（0.054 g/kg）、蓮花清瘟組（0.7 g/kg）、雙黃花高劑量組（10.368 g/kg）、雙黃花中劑量組（5.184 g/kg）、雙黃花低劑量組（2.592 g/kg）。灌胃給藥，體積20 mL/kg，連續給藥3 d，末次給藥前先預測動物基礎體溫1次，然后背部皮下注射10%酵母液 2 mL/100 g，6 h后灌胃相應藥物。測量給藥后 1、2、3、4、5 h體溫各1次，共5次，記錄各時間點各組體溫值。

1.8 統計學處理應用SPSS16.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，采用 t檢驗。 P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 雙黃花對大鼠足腫脹實驗的影響見表1。與模型對照組比較，雙黃花高、中劑量組在觀察2、4 h時間點均能顯著抑制角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹 （P＜0.05），低劑量未顯示較好的抑制腫脹作用（P＞0.05）。

表1 各組大鼠足腫脹情況比較（%，±s）

表1 各組大鼠足腫脹情況比較（%，±s）

與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組 別 n模型對照組 10阿司匹林組 10蓮花清瘟組 10 1 h 2 h 4 h 6 h 39.59±9.58 47.80±10.97 53.71±9.98 48.69±9.19 24.21±10.85**22.69±9.07** 38.79±9.68**39.11±10.20*32.88±9.05 35.42±7.49** 41.68±9.64*43.22±8.75雙黃花高劑量組 10 31.9±10.26 35.41±8.93* 41.29±10.51*43.23±10.28雙黃花中劑量組 10 35.31±9.55 38.02±9.37* 44.12±7.97*45.78±9.80雙黃花低劑量組 10 37.56±10.13 40.31±8.60 45.81±6.25 46.37±8.02

2.2 雙黃花對二甲苯致小鼠耳腫脹實驗的影響見表2。與模型對照組比較，雙黃花高劑量組能顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹的腫脹度（P＜0.05）；中、低劑量未顯示較好的抑制腫脹作用（P＞0.05），但具有一定抑制腫脹趨勢。

表2 各組小鼠耳腫脹情況比較（±s）

表2 各組小鼠耳腫脹情況比較（±s）

組 別 n模型對照組 10阿司匹林組 10蓮花清瘟組 10腫脹度（mg） 抑制率（%）14.24±5.20 —7.73±3.16** 45.7 9.30±6.04* 34.7雙黃花高劑量組 10 9.52±4.53* 33.1雙黃花中劑量組 10 10.77±6.69 24.4雙黃花低劑量組 10 11.04±5.37 22.5

2.3 雙黃花對小鼠毛細血管通透性實驗的影響見表3。與模型對照組比較，雙黃花高劑量組對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的增加有顯著抑制作用（P＜0.05）；中、低劑量未顯示較好的抑制作用（P＞0.05），但具有一定抑制腫脹趨勢。

表3 各組小鼠毛細血管通透性比較（±s）

表3 各組小鼠毛細血管通透性比較（±s）

組 別 n模型對照組 10醋酸潑尼松組 10蓮花清瘟組 10吸收度（A）0.563±0.132 0.324±0.127**0.393±0.169*雙黃花高劑量組 10 0.385±0.213*雙黃花中劑量組 10 0.436±0.203雙黃花低劑量組 10 0.483±0.225

2.4 雙黃花對酵母致大鼠發熱實驗的影響見表4。與模型對照組比較，雙黃花高劑量組大鼠藥后不同時間點體溫值顯著降低（P＜0.05）；雙黃花中劑量組大鼠藥后各小時亦有降溫作用，藥后2 h作用顯著 （P＜0.05）。

表4 各組大鼠用藥前后體溫比較（℃，±s）

表4 各組大鼠用藥前后體溫比較（℃，±s）

組 別 n 基礎體溫用藥后體溫1h 2h 3h 4h 5h模型對照組 10布洛芬組 10蓮花清瘟組 10 37.07±0.16 38.79±0.37 38.62±0.47 37.13±0.17 38.09±0.54**37.89±0.45**36.94±0.14 38.42±0.36*38.21±0.31*雙黃花高劑量組 10 37.05±0.17 38.38±0.37*38.20±0.25*雙黃花中劑量組 10 37.08±0.20 38.47±0.45 38.23±0.28*雙黃花低劑量組 10 37.05±0.17 38.56±0.61 38.35±0.45 38.39±0.52 37.71±0.56**38.05±0.29 38.01±0.21*38.22±0.35 38.25±0.44 38.25±0.4138.21±0.39 37.51±0.52**37.52±0.38**37.85±0.34*37.91±0.47 37.88±0.25*37.89±0.28*38.14±0.3138.13±0.51 38.16±0.2838.14±0.36

3 討 論

雙黃花顆粒由黃芩、黃芪、金銀花等經現代工藝加工制備而成，具有清宣肺衛、解毒益氣、平衡陰陽之效，臨床上常用于治療急性上呼吸道感染患者，能明顯改善患者癥狀，療效甚為滿意。金銀花富含揮發油、黃酮類、有機酸、三萜皂苷類等化學成分，具有解熱、抗炎、抗菌、抗病毒、調節免疫等藥理作用。其水煎液、口服液及注射液對鹿角菜膠、三連菌苗致熱有不同程度的退熱作用，對蛋青、鹿角菜膠、二甲苯所致水腫有不同程度的抑制作用［4］。黃芩主要有效成分為黃芩素、黃芩苷，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用，其抗炎機制可能與其藥用成分黃芩苷可顯著抑制白細胞內白三烯B4、白三烯C4的生物合成，促進細胞內環磷腺苷水平提高有關［5］。黃酮類成分是黃芪中主要活性成分，具有增強機體免疫功能、廣泛的抗菌作用等藥理作用［6］。本研究中雙黃花顆粒可顯著抑制角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹，抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，對醋酸所致的毛細血管通透性增加有顯著性抑制，對酵母所致的大鼠發熱亦有抑制作用。表明雙黃花顆粒具有較好的抗炎，解熱作用。

綜上所述，雙黃花顆粒通過其抗炎、解熱等多種作用，縮短退熱時間、緩解患者癥狀，促進疾病的恢復。雙黃花顆粒具有較好的抗炎，解熱作用是其治療急性上呼吸道感染的作用機理之一。至于其抗炎、解熱作用物質基礎還有待進一步研究。

［1］賀海霞，胡學軍，蔡光先，等.雙黃花顆粒治療急性上呼吸道感染臨床觀察［J］.中國中醫急癥，2011，20（10）：1551.

［2］蔡光先，賀海霞，伍參榮，等.雙黃花顆粒對急性上呼吸道感染患者血清病毒含量的影響［J］.中華中醫藥學刊，2012，30（4）：684-685.

［3］魏偉，李希美，李元健.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2010：738，742-746，769-770.

［4］孫立娟.金銀花的成分及藥理學研究［J］.中國實用醫藥，2011，6（30）：239-340.

［5］宋琳莉，孟慶剛.黃芩的藥理作用研究進展［J］.中華中醫藥學刊，2008，26（8）：1676-1678.

［6］顏培宇，于曉紅，張德山，等.黃芪總黃酮對免疫功能低下小鼠T細胞極化的影響［J］.浙江中醫藥大學學報，2008，32（2）：163-164.

Experimental Study of Shuanghuanghua Granule on the Pharmacological Action of Anti-inflammatory

and Antipyretic

LIU Lin，MO Wei-hao，DENG Dong-fang，et al. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Hunan，Changsha 410007，China

Objective:To study the pharmacologial action and antipyretic effects of Shuanghuanghua Granule with anti-inflammatory.Methods:The anti-inflammatory effects were observed by the rat metatarsal swelling，the mouse auricular swelling and the acetic acid-induced capillary permeability in abdominal cavity in mice experiments.Meanwhile，the antipyretic effect was detected by the fever rat models established by subcutaneous injection of yeast.Results:High and middle does group of Shuanghuanghua Granule significantly reduced the rate of swelling in hind paw after drug 2 and 4 hours.The high does group of Shuanghuanghua Granule obviously decreased mouse ear swelling induced by dimethyl benzene and capillary permeability in abdominal cavity induced by acetic acid-induced.Also，this group of Shuanghuanghua Granule remarkably decreased the body temperature of rats all time.The middle does groups of Shuanghuanghua Granule can significantly decrease the body temperature of rats after drug 2 hours.Conclusion:Shuanghuanghua Granule has obvious anti-inflamation and antipyretic effects.

Shuanghuanghua Granule；Acute upper respiratory infection；Anti-inflammatory；Antipyretic

R285.5

A

1004-745X（2013）06-0887-03

湖南省教育廳科研項目（09C751）；湖南省中醫藥管理局科研項目（2009030）

2013-02-04）