HPLC 測(cè)定夏桑菊顆粒中迷迭香酸含量

黃依玲

廣西壯族自治區(qū)南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001

夏桑菊顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十五冊(cè)，由夏枯草、桑葉、菊花等3味藥材組成，具有清肝明目，疏風(fēng)散熱，除濕痹，解瘡毒的功效，臨床用于治療風(fēng)熱感冒，目赤頭痛，高血壓，頭暈耳鳴，咽喉腫痛，疔瘡腫毒等癥。方中夏枯草為君藥，具有清肝瀉火，明目，散結(jié)消腫的功效。該制劑標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目[1]，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)選用處方中君藥夏枯草中主要成分迷迭香酸作為指標(biāo)性成分，參照《中國(guó)藥典》2010年版一部夏枯草項(xiàng)下迷迭香酸的測(cè)定方法[2]，建立高效液相色譜法測(cè)定本品中迷迭香酸的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent 1200高效液相色譜儀;KQ－300型超聲波清洗器;迷迭香酸對(duì)照品 (批號(hào):111871－201102，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，);不同廠家不同批號(hào)的夏桑菊顆粒均購(gòu)自南寧市各零售藥店;乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.1%磷酸 (20∶80);檢測(cè)波長(zhǎng):330 nm;流速:1.0 ml/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μl，在此條件下，迷迭香酸峰與鄰峰基線分離。取除夏枯草外的其他幾味藥材同法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法同法制成陰性樣品溶液，陰性樣品溶液無(wú)干擾 (見(jiàn)圖1)。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的迷迭香酸對(duì)照品10.18mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.2036mg/ml對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml置15ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，避光保存。

2.3 供試品溶液的制備 取夏桑菊顆粒適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇15ml，稱定重量，超聲處理30min(功率300W，頻率40kHz)，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，用微孔濾膜 (0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5、1、2、4、6、8、10ml，分別置 15ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。分取上述不同濃度對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積的積分?jǐn)?shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程:Y=2139X－37.8，r=0.9998(n=6)，說(shuō)明迷迭香酸進(jìn)樣量在0.068～1.357μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定迷迭香酸的峰面積，其RSD為1.08%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)20120210的供試品溶液，按供試品測(cè)定方法分別在0、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果8次進(jìn)樣迷迭香酸峰面積的RSD=1.27%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取廣州G藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20120210的夏桑菊顆粒，精密稱取6份，制備供試品溶液，并依法測(cè)定迷迭香酸峰面積，計(jì)算其平均含量為0.53 mg/g，RSD為0.87%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批供試品 (批號(hào):20120210)9份，每份精密稱取1g，分別精密加入一定量的迷迭香酸對(duì)照品，照“2.3”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。迷迭香酸平均回收率為99.15%，RSD=1.4%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.9 樣品含量測(cè)定 將夏桑菊顆粒的不同批號(hào)樣品，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算迷迭香酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 夏桑菊顆粒含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

生產(chǎn)廠家 批號(hào) 含量 (mg·g－1)RSD(%)20110925 0.16 0.96廣州G藥業(yè)股份有限公司 20120210 0.53 0.87 20120315 0.54 0.88南寧市H制藥有限公司 120215 0.17 0.98 120408 0.17 1.13廣西I藥業(yè)有限公司 120105 0.08 1.25 120212 0.09 0.69廣西J制藥有限公司 110903 0.07 0.87 111021 0.07 1.06

3 討論

3.1 夏桑菊顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目，對(duì)夏桑菊顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，分別有測(cè)定熊果酸、綠原酸、蒙花苷的含量[3～5]，但對(duì)迷迭香酸的含量測(cè)定未見(jiàn)有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定迷迭香酸的含量[6～8]，結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確可靠，可為夏桑菊顆粒進(jìn)一步制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

3.2 迷迭香酸對(duì)照品溶液在自然光下穩(wěn)定性較差，易產(chǎn)生分解，因此操作中應(yīng)注意閉光，選擇采用棕色量瓶。

3.3 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部的方法進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相甲醇－0.1%三氟乙酸溶液 (42:58)并不適合夏桑菊顆粒。另考察了多個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)，如甲醇－0.2%甲酸 (40:60)、甲醇－0.1%磷酸 (40:60)、乙腈－0.1%磷酸 (20:80)等，最后選擇乙腈－0.1%磷酸 (20:80)作為流動(dòng)相，出峰時(shí)間適當(dāng)。同時(shí)還考察不同色譜柱，如phenomenex Gemini C18(4.6mm×250 mm，5μm)、Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm)、Diamonsil C18(4.6mm×250 mm，5μm)等，最后選擇Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm)作為色譜柱，結(jié)果迷迭香酸色譜峰的對(duì)稱性和分離度均較好。

3.4 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用稀乙醇、甲醇、50%甲醇溶液和70%甲醇溶液同法處理樣品，結(jié)果表明50%甲醇溶液提取迷迭香酸的含量最高。同時(shí)考察超聲處理及回流提取法，結(jié)果表明，兩種提取方法迷迭香酸的含量差異性不大，考慮到實(shí)驗(yàn)上操作方便，故采用超聲法處理樣品。

3.5 實(shí)驗(yàn)測(cè)定了不同廠家不同批號(hào)的夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的夏桑菊顆粒，迷迭香酸的含量相差較大，建議通過(guò)測(cè)定迷迭香酸的含量來(lái)控制夏桑菊顆粒的質(zhì)量。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第15冊(cè) [S].1997:164.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部) [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:263.

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