HPLC 測(cè)定玉郎傘中芒柄花素的含量

陸 暉 陸瑞勇

廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司，廣西 柳州 545007

玉郎傘為豆科植物疏葉崖豆Millettia pulchra(Benth.)Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的根，又名小牛力、單刀根、大羅傘等[1]，為廣西壯、瑤族傳統(tǒng)習(xí)用民族藥，也是花紅藥業(yè)獨(dú)家品種消腫止痛酊主藥之一，具有散瘀，消腫，止痛，寧神功效，用于治療小兒疳積、跌打腫痛、骨折等癥[2]。為了更好的控制藥材質(zhì)量，對(duì)玉郎傘中芒柄花素的HPLC測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 材料

1.1 儀器 1200高效液相色譜儀 (美國(guó)安捷倫);G1311A四元泵;G1314B可變波長(zhǎng)檢測(cè)器;G1316A高性能自動(dòng)進(jìn)樣器;AL104型電子分析天平 (梅特勒－托利多儀器有限公司);SB4200DT型超聲波清洗機(jī) (寧波新芝生物科技股份有限公司);HK－08型搖擺式粉碎機(jī) (廣州旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 芒柄花素 (由上海源葉生物科技有限公司提供，經(jīng)HPLC檢查純度＞99%)，乙腈、磷酸為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水。5批玉郎傘樣品均由廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為為豆科植物疏葉崖豆Millettia pulchra(Benth.)Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的根，藥材來(lái)源見表2。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax XDB－C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm);以乙腈 －0.5%磷酸 (35:65)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng):250nm;柱溫:30℃;流速:1.0ml/min;進(jìn)樣量 10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芒柄花素對(duì)照品5.1mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液 (芒柄花素濃度為0.255mg/ml)，精密量取貯備液1ml，置于25ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，即得芒柄花素濃度為0.0102mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取玉郎傘粉末 (過三號(hào)篩)約1g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入50ml甲醇，密塞，稱定重量，超聲處理30min，取出，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取芒柄花素對(duì)照品溶液 (C=0.0102mg/ml)2、5、10、15、20、2μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以峰面積A對(duì)進(jìn)樣量 (μg)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為:A=1.571×104X－10.681，R=0.9999。芒柄花素在0.0204～0.255μg，與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取芒柄花素對(duì)照品溶液 (C=0.0102mg/ml)10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測(cè)定，芒柄花素的RSD為0.07%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液 (5號(hào)樣品)，分別于0、4、8、24h進(jìn)樣 10μl，測(cè)定，芒柄花素面積值 RSD為0.5%，表明供試品溶液在24h有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一批玉郎傘藥材 (5號(hào)樣品)平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算其芒柄花素含量，其RSD為2.1%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批玉郎傘藥材粉末(5號(hào)樣品，含芒柄花素0.2469mg/g)5份，各取約1g，每份等量加入芒柄花素貯備液 (C=0.255mg/ml)1.0ml，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行樣品制備并測(cè)定，計(jì)算回收率。芒柄花素的平均回收率為98.27%，RSD為0.8%，結(jié)果見表1。

表1 芒柄花素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=5)

2.9 樣品測(cè)定 按“2.3”項(xiàng)，對(duì)5批玉郎傘藥材進(jìn)行測(cè)定，每批平行測(cè)定兩份，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 藥材來(lái)源及樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=5)

3 討論

玉郎傘作為為廣西壯、瑤族傳統(tǒng)習(xí)用民族藥，具有廣泛的使用基礎(chǔ)。但其含量測(cè)定的文獻(xiàn)很少，其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，本文建立了玉郎傘藥材中芒柄花素的含量測(cè)定方法，并測(cè)定了不同產(chǎn)地的玉郎傘，可為玉郎傘藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

[1]廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(第一卷)[S].南寧:廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2008:72.

[2]廣西衛(wèi)生廳.廣西中藥志 (第二輯) [M].南寧:廣西人民出版社，1963:74.