阿歸養血糖漿主要藥物的鑒別和含量測定

徐澤鶴 明少蘭

湖北省鄂州市中醫醫院，湖北 鄂州 436000

阿歸養血糖漿由當歸、白芍、黃芪、甘草 (蜜炙)、川芎等九味中藥組成，具有益氣補血的作用，用于氣血虧虛，面色萎黃、眩暈乏力、肌肉消瘦、經閉、赤白帶下。近年研究發現本品可抑制黑色素合成、清除自由基、促進膠原蛋白合成和改善血液流變學及微循環[1]。該藥收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十二分冊，為更加有效地控制阿歸養血糖漿的產品質量，實驗采用TCL法對阿歸養血糖漿中的當歸、黃芪進行鑒別，利用HPLC法對阿歸養血糖漿中的白芍進行含量測定。本實驗所采用的鑒別和含量測定方法簡便易操作，所得結果令人滿意，可考慮作為該藥品的質量控制方法。

1 儀器與試藥

島津SPD－10Avp∕10AVvp;島津LC－10ATvp;島津2010色譜數據工作站;BS124S型電子天平。硅膠G(青島海洋化工廠)，乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。芍藥苷 (批號:110736－200933)、黃芪甲苷 (批號:110781－200611)對照品和當歸對照藥材 (批號:120927－200812)均由中國藥品生物制品檢定所提供;阿歸養血糖漿由湖北東信惠濟堂藥業有限公司提供 (批號:20090517、20091104、20100326，規格:200mL)，各陰性對照品均由本院制劑室 (具備制劑GMP生產許可證)根據生產工藝和制備方法進行生產。

2 成分鑒別

2.1 當歸的鑒別 取本品10mL，加乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液;按處方取各藥材 (不含當歸藥材)，照本品工藝及上述方法制成陰性對照品溶液;另取當歸對照藥材0.5g，加乙醚15mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[2]試驗，吸取上述三種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯 (9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。通過對供試品色譜檢測，在供試產品中與對照產品色譜相對應的位置上，顯示出了與對照產品相同顏色的熒光主斑點。陰性對照組顯示無干擾。

2.2 黃芪的鑒別 取阿歸養血糖漿20mL以水飽和正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇，以1%氨水洗滌2次，棄去氨水，正丁醇蒸干，殘渣加甲醇0.5mL使溶解，作為供試品溶液;按處方取各藥材 (不含黃芪藥材)，照本品工藝及上述方法制成陰性對照品溶液;另取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗，吸取供試品溶液10μL、對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－水(13:6:2)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。產品放置在105℃加熱，直至斑點顯色清晰為止。結果顯示，供試品在與對照品色譜相應的位置上，顯示出相同顏色的斑點，陰性對照組顯示無干擾。

3 含量測定

3.1 色譜條件和系統適用性實驗 色譜柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)柱;流動相:乙腈 －水 (15:85);流速 1.0mL/min;檢測波長 230nm[3－4];柱溫:30℃;進樣量20μL，陰性對照品無干擾。理論塔板數如按照芍藥苷峰計算，其數據不低于2000。

3.2 溶液制備 對照品溶液制備:按照要求稱取干燥至恒重的芍藥苷6.1mg置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至所需刻度，充分搖勻，即可得到61μg/mL的芍藥苷溶液。供試品溶液制備:稱量5g阿歸養血糖漿，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至所需刻度，充分搖勻，利用0.45μm濾膜過濾溶液，即得。陰性對照組溶液制備:按照要求稱取白芍，參照上述供試品的制備方法，制備陰性對照組。

3.3 標準曲線制備 按照要求吸取芍藥苷對照品溶液2、4、8、12、16、20μL，分別注入色譜儀中，按照上述的色譜條件進行檢測。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作回歸方程分別為:Y=1028.596X+39.48，r=0.9996(n=6)，且在0.122～1.22μg范圍內呈現良好的線性關系。

3.4 精密度試驗 吸取對照品芍藥苷溶液10μL，并且重復進樣6次，按照上述的色譜條件測定峰面積，RSD=1.67%，顯示精密度良好。

3.5 重復性試驗 吸取同一批號的阿歸養血糖漿6份，按上述方法制備供試品溶液并進行測定，芍藥苷的RSD=1.35%。結果表明，本試驗所采取的方法重復性良好。

3.6 穩定性實驗 吸取同一批的供試品阿歸養血糖漿溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12h進樣20μL，按上述色譜條件進行測定，RSD=1.78%。結果表明，本試驗設計的供試品溶液在12h內穩定。

3.7 專屬性試驗 取上述的陰性對照組溶液10μL，按照上述條件進行測定。結果表明，陰性對照組樣品無干擾(見圖1)。

3.8 加樣回收試驗 精取已測知含量 (含芍藥苷0.1628mg/mL)的同一批號的阿歸養血糖漿2.5g，共6份，再分別精確加入含0.1316mg/mL的芍藥苷對照品溶液3.0mL，按上述方法制成供試品溶液。按上述色譜條件進行測定，結果見表1。

圖1 HPLC色譜圖

表1 芍藥苷加樣回收試驗 (N=6)

3.9 樣品的測定 分別稱取3批樣品 (批號:20090517、20091104、20100326)，按上述方法制備供試品溶液。吸取20μL供試品阿歸養血糖漿溶液與對照品芍藥苷溶液10μL，分別依次注入色譜儀中，按照上述的色譜條件進行測定峰面積并計算。結果標明，阿歸養血糖漿中的芍藥苷含量分別為0.1628、0.1732、0.1563mg/mL.

4 討論

阿歸養血糖漿是屬于滋補性藥品，近年來又發現其具有美容功效[1]，是深受女性喜愛的OTC藥品之一，而其原有的質量標準不能滿足其質量控制，有必要對其質量標準進行提高。

在當歸的薄層鑒別中，參照中國藥典 (2010版)四物合劑，陰性的制備應同時去除川芎，考慮到本品中當歸投料量 (257g)數十倍于川芎投料量 (8g)，在實驗中沒有出現干擾現象，可能是在本品中，川芎的檢出限不以干擾當歸的鑒別。所以，在陰性的制備中沒有去除川芎。

在白芍的含量測定中，樣品曾先用飽和的正丁醇溶液萃取。濃縮，蒸干，再加甲醇溶解，測定計算。結果表明，采用本方法的測量值更高，且操作方法簡單，所以樣品的處理本實驗方法。

[1]徐曉月，張廣偉，李展，等.阿歸養血糖漿美容作用的實驗分析[J].河南大學學報，2009，28(1):13－16.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部) [M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:649－650、附錄34－35.