6種透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響

楊柳，王愛武，苗杰，霍然，徐廣琪（1.山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院藥劑科，濟(jì)南250021；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355；3.山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院燒傷整形科，濟(jì)南 250021；4.山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南250012）

鹽酸普萘洛爾為非選擇性競爭抑制腎上腺素β受體阻滯藥，臨床上可用于治療心絞痛、心律失常、高血壓等疾病[1]。自2008年，法國Bordeaux兒童醫(yī)院的Léauté-Labrèze C等[2]發(fā)現(xiàn)鹽酸普萘洛爾可用于血管瘤的治療后，大量臨床研究表明鹽酸普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤有效，能夠促進(jìn)瘤體萎縮變薄[3]。目前國內(nèi)常用的有片劑和注射劑兩種劑型。但口服鹽酸普萘洛爾有可能導(dǎo)致低血糖、低血壓等不良反應(yīng)，同時(shí)其大部分通過肝臟時(shí)被代謝，生物利用度差[4-5]；而外用制劑具有不受肝臟首關(guān)效應(yīng)和腸胃道破壞影響、可直達(dá)病灶的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。筆者在前期臨床研究[6]已證實(shí)鹽酸普萘洛爾外用對(duì)血管瘤有較好的療效。為了進(jìn)一步優(yōu)化鹽酸普萘洛爾乳膏的處方和工藝，本試驗(yàn)考察了氮酮、油酸、丙二醇、氮酮+油酸、氮酮+丙二醇、油酸+丙二醇6種透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響，為其處方優(yōu)化提供參考。

1 材料

1.1 儀器

ZTY智能透皮試驗(yàn)儀（河南省鞏義市科瑞儀器有限公司）；LC-2010AHT液相色譜儀（北京普析通用儀器有限公司）；BSA223S電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸普萘洛爾原料藥（湖北興銀河化工有限公司，批號(hào)：20110712，純度：≥99%）；鹽酸普萘洛爾對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100783-200401，純度：≥98%）；硬脂酸（山東金達(dá)雙鵬集團(tuán)有限公司）；白凡士林（南昌白云藥業(yè)有限公司）；單硬脂酸甘油酯（杭州油脂化工有限公司）；聚山梨酯80（天津市紅巖化學(xué)試劑廠）；甘油（湖南爾康制藥有限公司）；羥苯乙酯（臺(tái)山市新寧制藥有限公司）；氮酮（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；油酸、丙二醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；甲醇 為色譜純，庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀均為分析純，水為生理鹽水。

1.3 動(dòng)物

健康Wistar大鼠60只，♀♂各半，SPF級(jí)，體質(zhì)量175～225g，購于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（魯）2009000101。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品的制備

油相：110g硬脂酸，75g單硬脂酸甘油酯，100g白凡士林，20g透皮吸收促進(jìn)劑；水相：30g聚山梨酯80，150g甘油，1g羥苯乙酯，20g鹽酸普萘洛爾原料藥，蒸餾水適量。將上述處方中的油相和水相分別加熱至（75±2）℃，將油相緩緩倒入水相中，邊加邊攪拌，分別制成含有2%氮酮、2%油酸、2%丙二醇、2%氮酮+2%油酸、2%氮酮+2%丙二醇、2%油酸+2%丙二醇的鹽酸普萘洛爾乳膏。同法制備不含透皮吸收促進(jìn)劑的鹽酸普萘洛爾乳膏和不含鹽酸普萘洛爾原料藥的空白基質(zhì)。

2.2 離體皮膚的制備

將大鼠腹部脫毛，用濕紗布擦拭干凈，飼養(yǎng)1d，保證脫毛部位皮膚無損傷。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠頸椎脫臼處死，剪下脫毛處皮膚，小心剝離皮下脂肪及黏液組織，選取完整皮膚，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干，4℃冰箱短期保存，備用。

2.3 擴(kuò)散裝置與接收介質(zhì)的選擇

采用ZTY智能透皮試驗(yàn)儀進(jìn)行體外透皮吸收試驗(yàn)。擴(kuò)散池由2個(gè)玻璃組件組成，鼠皮夾在中間形成上下室，上室是供給池，下室是接收池，放入（32±0.5）℃恒溫水浴中。擴(kuò)散池的有效擴(kuò)散直徑為25mm，接收池容積為25ml。在透皮釋放介質(zhì)的選擇上，通過比較鹽酸普萘洛爾在生理鹽水及不同pH磷酸鹽緩沖液中的溶解度，發(fā)現(xiàn)在不損害皮膚組織結(jié)構(gòu)的條件下，以生理鹽水為接收介質(zhì)最佳。

2.4 色譜條件

色譜柱：Shimadzu Shim-pack VP-ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（57∶43），流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長：290nm；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：室溫。在上述色譜條件下，鹽酸普萘洛爾對(duì)照品、供試品及空白基質(zhì)的色譜見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸普萘洛爾對(duì)照品5mg，置于10ml量瓶中，用生理鹽水稀釋定容至刻度。精密量取上述溶液1ml，置于10ml量瓶中，用生理鹽水稀釋定容至刻度，配制成50μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00ml，分別置于10ml量瓶中，加生理鹽水稀釋定容至刻度，搖勻，制得5.00、10.00、15.00、20.00、25.00、30.00、35.00μg/ml的系列溶液，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜過濾后進(jìn)樣測(cè)定。以鹽酸普萘洛爾的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為y＝0.022c－0.0036（r＝0.9999）。結(jié)果表明，鹽酸普萘洛爾檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為5.00～35.00μg/ml。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.空白基質(zhì)；1.鹽酸普萘洛爾Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test samples；C.blank matrix；1.propranolol hydrochloride

2.6 精密度試驗(yàn)

用生理鹽水溶解適量的鹽酸普萘洛爾對(duì)照品，過濾后按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝1.14%，表明該檢測(cè)方法精密度良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

將鹽酸普萘洛爾對(duì)照品溶液，加入已知含量的透皮吸收溶液（2%油酸、2%氮酮）中，配制成樣品溶液，另以空白基質(zhì)為對(duì)照，各3份，過濾后按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1Results of recovery tests（n＝3）

2.8 體外透皮試驗(yàn)

用濾紙吸干鼠皮表面水分，角質(zhì)層向上夾于擴(kuò)散池中，在鼠皮上均勻涂上空白基質(zhì)、含有不同透皮吸收促進(jìn)劑的鹽酸普萘洛爾乳膏和不含透皮吸收促進(jìn)劑的鹽酸普萘洛爾乳膏，涂藥量約為0.25g/cm2。供給池上口用保鮮膜封住，接受池加滿生理鹽水并加入磁子。將擴(kuò)散池置于（32±0.5）℃的恒溫水浴槽中，攪拌速度恒定，分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12h取出接收液15ml，同時(shí)補(bǔ)充同體積且等溫的生理鹽水。將各時(shí)段的接收液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，采用高效液相色譜法測(cè)定接收液中鹽酸普萘洛爾的峰面積。以鹽酸普萘洛爾吸收峰面積A＝A樣品－A空白，按外標(biāo)法計(jì)算接收液中鹽酸普萘洛爾的含量，并計(jì)算單位面積累積透過量（Q）＝[cn·V+∑（ci×V1）]/s。式中，Q為藥物單位面積經(jīng)皮累積滲透量，s為有效皮膚滲透面積，V為接收池中接收液體積，ci為第1次至上次取樣時(shí)接收液中藥物濃度，cn為該次取樣時(shí)接收液中藥物濃度，V1為所取接收液的體積。對(duì)藥物滲透曲線（Q-t）的穩(wěn)態(tài)部分作切線，切線的斜率即為藥物經(jīng)皮滲透速率（J）。對(duì)加入透皮吸收促進(jìn)劑的鹽酸普萘洛爾乳膏的經(jīng)皮滲透參數(shù)與無促進(jìn)劑乳膏的經(jīng)皮滲透參數(shù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。促滲性能即按下列公式計(jì)算：QEF＝Q12h（促進(jìn)劑）/Q12h（無促進(jìn)劑），JEF＝J12h（促進(jìn)劑）/J12h（無促進(jìn)劑）。不同透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響見表2。

表2 不同透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響（n＝3）Tab 2 Effects of different penetration enhancers on percutaneous enhancers absorption of Propranolol hydrochloride cream（n＝3）

由表2結(jié)果表明，6種透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾乳膏均有促透作用，促透作用依次為：油酸＞氮酮＞油酸+丙二醇＞丙二醇＞氮酮+油酸＞氮酮+丙二醇＞無促進(jìn)劑。其中油酸對(duì)鹽酸普萘洛爾的促透作用最好，其Q約為2552.01μg/cm2，是無促進(jìn)劑乳膏的2.48倍；J約為30.28μg/（cm2·h），是無促進(jìn)劑乳膏的2.27倍。

3 討論

透皮吸收制劑是一種新型藥物劑型，具有可維持穩(wěn)定的血藥濃度、避免胃腸道酶解作用和肝臟的首關(guān)效應(yīng)、降低藥物的毒副作用、給藥方便等優(yōu)點(diǎn)。而皮膚表皮的角質(zhì)層對(duì)大多數(shù)外用藥物形成一道難以滲透的生理屏障，添加適宜的透皮吸收促進(jìn)劑是通過改變皮膚角質(zhì)層扁平細(xì)胞的有序疊集結(jié)構(gòu)，增大角質(zhì)層細(xì)胞間隙的空隙，使藥物迅速進(jìn)入皮內(nèi)而被吸收[7]。透皮吸收中常用的促進(jìn)劑有氮酮、油酸、丙二醇及其組合物等。氮酮是目前常用的化學(xué)促滲劑之一，其滲入皮膚中能影響表皮角質(zhì)層中扁平角化細(xì)胞的有序疊集結(jié)構(gòu)，也作用于細(xì)胞類脂質(zhì)雙分子層，增加雙分子層的流動(dòng)性，降低相變溫度，從而增加藥物的滲透性。丙二醇能滲入角質(zhì)層并在其中形成蓄積，增加藥物在角質(zhì)層中的溶解性質(zhì)和分配性質(zhì)[8]，特別適合于在丙二醇中有較大溶解度的藥物。油酸為含有不飽和雙鍵的長鏈脂肪酸，與皮膚中的脂肪酸有相似的結(jié)構(gòu)，但由于雙鍵的存在而形成不對(duì)稱空間結(jié)構(gòu)，兩者相互作用使角質(zhì)細(xì)胞間形成空隙，細(xì)胞間類脂分子排列發(fā)生變化，增加了類脂的流動(dòng)性，這些腔隙成為藥物分子穿過角質(zhì)層的通道，減小了擴(kuò)散阻力，使皮膚的滲透性增大[8]。另外，鹽酸普萘洛爾為陽離子型藥物，油酸對(duì)陽離子藥物有獨(dú)特的促進(jìn)效果，油酸與陽離子藥物形成離子對(duì)而提高了脂溶性，對(duì)角質(zhì)層具有較好的滲透性。

有關(guān)透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)鹽酸普萘洛爾透皮吸收性能的影響，孫群[9]曾以鹽酸普萘洛爾原料藥作為供試液進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示氮酮為其最佳促進(jìn)劑。筆者以鹽酸普萘洛爾乳膏為研究對(duì)象，探討了不同透皮吸收促進(jìn)劑對(duì)其透皮吸收性能的影響。結(jié)果表明鹽酸普萘洛爾乳膏加入透皮吸收促進(jìn)劑的滲透效果優(yōu)于不加促進(jìn)劑，單用油酸優(yōu)于與氮酮、丙二醇等合用的促透效果。其原因可能是，氮酮與乳膏基質(zhì)中的凡士林等有較強(qiáng)的親和力，降低了向角質(zhì)層的分配比例，從而影響了其促透效果[10]；丙二醇具有較大黏度，油酸與丙二醇合用后黏度增加，抑制了皮膚的水合作用，使水溶性藥物經(jīng)皮滲透性降低。

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