頂空毛細管氣相色譜法測定福爾可定原料藥中5種有機溶劑的殘留量

劉勝春，趙學剛，馮雅慧，康海霞，滑千里，王乃浩（1.河北省中醫院，石家莊050011；.河北奧星集團藥業有限公司，石家莊 050700）

福爾可定是中樞性鎮咳藥，與磷酸可待因具有相似的中樞性鎮咳作用，也有鎮靜和鎮痛作用，但成癮性較磷酸可待因弱，常用于劇烈干咳和中度疼痛。臨床上已有的制劑有福爾可定片、復方福爾可定糖漿、復方福爾可定口服溶液。新生兒和兒童易于耐受此藥，不會引起便秘和消化紊亂[1]。根據河北奧星集團藥業有限公司提供的福爾可定及其合成起始原料的工藝路線得知，福爾可定原料藥在合成過程中使用了甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯5種有機溶劑，這些溶劑對人體健康和環境可造成危害。為了保證藥品的安全，筆者建立了福爾可定原料藥中5種有機溶劑殘留量的檢查方法。筆者根據2010年版《中國藥典》（二部）[2]的相關規定和人用藥品注冊技術規范的國際協調會（ICH）指導原則[3]，同時參考文獻[4]方法以0.25mol/L硫酸溶液為介質，采用頂空毛細管氣相色譜法，同時測定上述5種有機溶劑的殘留量。結果表明，建立的方法快速、靈敏、準確，可用于福爾可定原料藥中有機溶劑殘留量的測定。

1 材料

1.1 儀器

6890N氣相色譜儀、7694E頂空進樣器（美國Agilent公司）；CPA225D電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

福爾可定原料藥（河北奧星集團藥業有限公司，批號：061101、061102、061103，純度：99.87%、99.88%、99.87%）；甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯均為分析純（含量：均＞99%），水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30m×530μm，3μm）；柱溫：80℃維持7min，以15℃/min的速率升至120℃，維持10min；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID），檢測器溫度：250℃；分流進樣，分流比：1∶1；進樣口溫度：200℃；載氣：氮氣，流速：3.0ml/min；頂空進樣，平衡溫度：85℃，平衡時間：30min，頂空瓶加壓時間：0.2min，進樣時間：1min，定量環體積：1ml，定量環溫度：95℃，傳輸線溫度：105℃。

2.2 專屬性試驗

分別取甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）制備成單獨的對照品溶液和“2.3.2”項下的對照品混合溶液，分別按“2.1”項下條件頂空進樣，記錄色譜圖。結果，出峰順序依次為甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯、DMF；取福爾可定原料藥約0.5g，精密稱定，置于20ml頂空瓶中，精密加入0.25 mol/L硫酸溶液5ml，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液。頂空進樣，記錄色譜圖。結果各有機溶劑間的分離良好，專屬性良好。6種有機溶劑的色譜圖見圖1A，混合溶液色譜圖見圖1B，供試品溶液色譜圖見圖1C。

圖1 專屬性試驗氣相色譜圖A.溶劑對照品溶液；B.對照品混合溶液；C.供試品溶液；1.甲醇；2.乙醇；3.苯；4.丁醇；5.甲苯；6.DMFFig 1 GC chromatograms of specificity testA.control solutions；B.mixed control solutions；C.test samples solution；1.methanol；2.ethanol；3.benzene； 4.butanol；5.toluene；6.DMF

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品混合貯備液。精密稱取甲醇3000mg、乙醇5000mg、丁醇5000mg、苯2mg、甲苯890mg，置于同一100ml量瓶中，加入體積分數50%的DMF水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5ml，置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 對照品混合溶液。精密量取對照品混合貯備液5ml，置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系考察

精密量取對照品混合貯備液1、2、4、5、6、7ml，分別置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。進樣分析，以峰面積（y）為縱坐標、樣品質量濃度（x）為橫坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 各溶劑線性關系Tab 1 Linear relationship of each solvents

2.5 精密度試驗

精密量取對照品混合溶液5ml，置于20ml頂空瓶中，共6份，密封；進樣分析，計算甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的峰面積的RSD值分別為4.59%、4.01%、3.49%、3.57%、4.01%，均小于10%，表明精密度良好。

2.6 回收率試驗

取樣品約0.5g，精密稱定，置于20ml頂空瓶中，共9份；分別精密量取對照品混合貯備液0.8、1.0、1.2ml，各3份，置于10ml量瓶中，再用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取9份溶液各5ml，分別置于上述20ml頂空瓶中，密封，分析、測定。結果表明，測定方法準確可靠，詳見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝3）Tab 2Results of recovery tests（n＝3）

2.7 穩定性試驗

精密量取對照品混合溶液5ml，分別置于20ml頂空瓶中，密封，于室溫下放置0、1、4、8、12h，進樣分析，記錄色譜圖。結果，甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯在12h測定的峰面積的RSD分別為1.43%、1.36%、3.29%、1.21%、2.69%，表明溶液均在12h內穩定。

2.8 定量限試驗

取對照品混合溶液逐步稀釋，然后頂空進樣，以峰高為基線噪聲的10倍計算，結果甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的定量限分別為0.5、0.5、0.02、0.08、0.5μg/ml。

2.9 耐用性試驗

將對照品混合溶液按照改變柱溫起始溫度（±5℃）、載氣柱流速（±1.0ml/min），分別頂空進樣分析，記錄色譜圖，分別考察甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯在不同條件下的分離度。結果表明分離度均符合方法學要求，耐用性良好。

2.10 樣品有機溶劑殘留量測定及限度的確定

取3批樣品制備成供試品溶液，按外標法計算5種有機溶劑的含量。結果3批樣品中甲醇的殘留量均為0.02%，乙醇的殘留量均為0.05%，苯、丁醇、甲苯均未檢出。

根據ICH指導原則和2010年版《中國藥典》（二部）殘留溶劑限度和樣品的實測結果，將甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的檢查均納入質量標準之中，限度分別為0.3%、0.5%、0.0002%、0.5%、0.089%。

3 討論

3.1 進樣方法的選擇

筆者根據殘留溶劑測定的推薦方法，首選毛細管色譜柱-頂空進樣系統，首先因為頂空分析法操作簡單，只取氣相部分進行分析，因此大大減少了樣品基質對分析的干擾；其次，頂空分析有不同模式，可以通過優化操作參數而適合于各種樣品；第三，頂空分析的靈敏度能滿足方法學的要求；最后，頂空氣相色譜完全能夠進行準確的定量分析。

3.2 介質的選擇

因為福爾可定略溶于水，為了使樣品完全溶解，筆者選用了無揮發性的硫酸溶液為介質（頂空進樣中不能使用揮發性的酸，對色譜柱有損害）；并且對硫酸溶液的濃度進行篩選，確定最低濃度為0.25mol/L。

3.3 色譜柱的選擇

筆者先后考察了HP-5、FFAP、DB-624等不同極性的色譜柱，結果以在DB-624色譜柱上的峰形和分離度最佳，因此最終選擇DB-624色譜柱作為本次試驗的色譜柱。

3.4 頂空溫度的選擇

參照2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧP殘留溶劑測定法項下內容[2]，并參考ICH指導原則，考察了不同的頂空平衡溫度對樣品測定的影響，結果詳見表3。

表3結果表明，隨著溫度的升高，苯和甲苯的峰面積減少，甲醇、乙醇、丁醇峰面積則增大。為了提高檢測靈敏度，同時考慮到甲苯的響應值過大也會影響到檢測的準確性，因此選擇85℃作為頂空平衡溫度。

表3 平衡溫度考察結果Tab 3 Results of equilibrium temperature inspection

[1] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學[M].17版.北京：人民衛生出版社，2007：427.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：1092、附錄61-65.

[3] 周海鈞.藥品注冊的國際技術要求：質量部分[M].北京：人民衛生出版社，2007：126.

[4] 陳寧，陳朝艷.頂空氣相色譜法測定頭孢替坦二鈉中的殘留溶劑[J].中國抗生素雜志，2010，36（11）：849.