奶牛產生β-內酰胺酶原因分析

文/許紅巖

（內蒙古伊利實業集團股份有限公司）

β-內酰胺是抗生素的一種。β-內酰胺酶則是由多種酶組成的酶家族，能水解β-內酰胺類抗生素。但主要成分為β-內酰胺酶的“生鮮牛乳抗生素分解劑”是國家明令禁止添加的非食用物質。資料表明，β-內酰胺類獸藥在養殖環節中的廣泛使用和致病菌的變遷是導致細菌產生內源性β-內酰胺酶的原因。如何區分β-內酰胺酶是細菌內源性代謝產生，還是非法添加行為，至今尚無定論。目前生鮮乳中β-內酰胺酶的檢出無強制性國家標準，缺乏成熟的標準檢測方法，致使β-內酰胺酶成為生鮮乳監管中的一個盲點和隱患。

為進一步證實奶牛是否能夠產生內源性β-內酰胺酶，個體奶樣中是否能夠檢測出β-內酰胺酶，特在3 家牧場47 頭奶牛中進行了試驗，取得了一定量的試驗數據，現將試驗結果進行統計和分析，以供參考。

1 試驗判定依據

衛生部下發的杯碟法檢測β-內酰胺酶的方法（試行）。

1.1 檢測原理

杯碟法采用青霉素類藥物絕對敏感的標準菌株，利用舒巴坦特異性抑制β-內酰胺酶的活性，并加入青霉素作為對照，通過對比加入β-內酰胺酶抑制劑與未加入β-內酰胺酶抑制劑的樣品所產生的抑制圈的大小間接測定樣品中是否含有β-內酰胺酶類藥物。

1.2 判定標準

抑菌圈大小差異＞3 mm，判定為內酰胺酶陽性（圖1）。圖1中，A圈-B圈＞3，判定內酰胺酶陽性；C、D圈為對照試驗組。

圖1 杯碟法對β-內酰胺酶的檢測結果

1.3 檢測方法的影響因素

1.3.1 由于細菌會產生內源性β-內酰胺酶，所以奶樣被細菌污染后，β-內酰胺酶檢測陽性概率較大。結果顯示，有23 份奶樣β-內酰胺酶呈陽性。酒精試驗結果顯示，奶樣全部酸敗。

1.3.2 獸藥的成分。如果藥品中人為加入β-內酰胺酶，藥物在機體中的代謝產物會對檢測結果有影響。

2 方法

2.1 患病奶牛使用“無抗藥品”試驗

2.1.1 選取16 頭患有乳房炎的奶牛，其中15 頭為隱性乳房炎，1 頭為臨床型乳房炎。

2.1.2 對患病奶牛使用6 種無抗藥品，具體如表1所示。

2.1.3 對所選取的患病奶牛，采用購買的無抗藥品進行治療，用藥8～12 h后對奶牛進行采樣，檢測牛奶是否含抗生素和β-內酰胺酶。表2為用藥后β-內酰胺酶的檢測結果。

2.1.4 將6 種藥物直接加到牛奶中檢測β-內酰胺酶，其中2 種藥品β-內酰胺酶檢測呈現陽性,藥物本身對檢測結果有影響（表3）。

2.1.5 試驗結果表明，使用標注無抗藥品后，牛奶能夠產生β-內酰胺酶，檢出率為43%。試驗過程中發現，奶牛的個體差異、胎次與β-內酰胺酶的產生有直接關系。奶牛停止用藥1～5 天后，牛奶中β-內酰胺酶檢測結果合格，沒有規律可循，這與機體對藥物吸收有直接關系。

表1 試驗中使用的6 種無抗藥品

表2 用藥后β-內酰胺酶抑菌圈的檢測結果 單位：mm

表3 6 種藥物直接加到牛奶中后的β-內酰胺酶檢測結果

2.2 奶牛使用抗生素藥物，在停藥期內的試驗

2.2.1 試驗方法

選取28 頭用過抗生素藥物的奶牛，對奶牛用抗生素藥物，在停藥期內，奶牛機體中無抗生素殘留，檢測牛奶中是否含有β-內酰胺酶。

2.2.2 試驗結果

試驗結果表明，奶牛使用抗生素后，當機體中無殘留時，牛奶不會產生β-內酰胺酶。但經常使用抗生素治療的奶牛，機體產生抗藥性后，在用藥過程中就容易產生β-內酰胺酶。因為抗生素的生化機制特點為：機體內能夠產生使抗生素結構改變的酶（即鈍化酶，包括β-內酰胺酶），機體產生酶后直接與藥物作用，致使藥物失效，這也是導致抗生素藥物出現耐藥性的根本原因之一。這可以解釋在日常檢測過程中，出現抗生素牛奶中還存在抗生素分解酶的原因。

2.3 健康奶牛飼喂霉變飼料試驗

2.3.1 試驗方法

選取3 頭健康奶牛，飼喂霉變飼料，檢測牛奶中β-內酰胺酶的變化情況，試驗周期為1 周。

2.3.2 試驗結果

試驗結果表明，飼喂霉變的秸稈，奶牛會產生黃曲霉毒素，黃曲霉毒素與青霉素根本不發生任何作用，所以牛奶不會產生β-內酰胺酶。但長期飼喂霉變的飼料，對奶牛的直接影響是：機體營養不均衡，奶牛出現酒精陽性乳，抵抗力降低，稍微受到外界環境因素影響，奶牛極易發生乳房炎。飼養方面導致的酒精陽性乳與細菌污染導致的酒精陽性乳有本質區別，前者不會導致β-內酰胺酶陽性，而后者很容易導致β-內酰胺酶陽性。乳房炎牛奶本身的微生物就超標，所以會出現β-內酰胺酶陽性，而腐敗的飼料短期不會導致牛奶中出現β-內酰胺酶。

3 小結

奶牛用藥后能夠在機體中產生內源性β-內酰胺酶，如何區分β-內酰胺酶是由內源性代謝產生的，還是非法添加的，目前還無法判別。