注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉細菌內毒素檢查方法研究

梁永紅 趙飛 阿達來提·依迪熱斯

注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉細菌內毒素檢查方法研究

梁永紅 趙飛 阿達來提·依迪熱斯

目的 研究用細菌內毒素檢查方法替代鱟試劑法。 方法 對藥廠生產的注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉采用試劑檢查細菌內毒素。結果 細菌內毒素檢查的方法比鱟試劑動物檢查的方法更安全、靈敏。 結論 用該方法使結果更安全、準確。

格拉斯瓊氯化鈉;細菌內毒素;動物實驗

1 一般資料

注射用鹽酸格拉司瓊氯化鈉, (新疆制藥廠生產, 批號：06120621、06120631、06121641), (熱源檢查均符合規定), 規格：50ml/瓶 ：注射用鹽酸格拉司瓊(以 C18H24N4O計)3mg與氯化鈉。鱟試劑(湛江安度斯生物有限公司, 批號：06120521、06120621、06120631, 規格：0.1ml/支, 靈敏度：0.25EU/ml。)細菌內毒素標準品：由中國藥品生物制品檢定所,批號：2006-10, 效價：160EU/A, 細菌內毒素檢查用水(BET水):湛江博康海洋生物有限公司生產, 批號：0603182, 規格50ml/瓶。

2 方法與結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核, 按《中國藥典》［1］2005年版細菌內毒素檢查方法的要求：結果,鱟試劑的靈敏度復核規定均在(0.5~2.0)λ之間符合規定。表1 鱟試劑靈敏度復核試驗結果。由表1 可見3批鱟試劑均在(0.5~2.0)λ之間, 由此鱟試劑靈敏度均符合規定, 可見于細菌內毒素檢查, 標示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度。

2.2 供試品內毒素限值(L)的確定, 《中國藥典》［1］2005版二部附錄采用細菌內毒素檢查方法, 根據公式 L=K/M 確定供試品的內毒素限值。式中L為供試品的細菌內毒素的限值,以EU/ml考慮到合并用藥因素, 供試品細菌內毒素限值 L為0.25EU/ml。

2.3 供試品最大有效稀釋倍數的確定, 采用公式 MVD=CL/ λ確定供試品最大不干擾濃度。根據公式MVD=CL/λ, 選用市售鱟試劑靈敏度標示值為0.25 EU/ml。來確定供試品注射用格拉斯瓊氯化鈉的最大不干擾濃度MVD=CL/λ=2 。

2.4 干擾預試驗, 細菌內毒素檢查用水對供試品2倍的稀釋, 取供試品(原液)及1：2稀釋的供試品溶液, 將細菌內毒素工作標準品逐一稀釋, 稀釋的倍數是1倍、2倍、4倍、8倍、把結果設立陰性和陽性的對照, 并且做陰、陽性對照(各2管), 表明原液對鱟試劑有干擾, 供試品稀釋后對鱟試劑試驗無任何干擾。見表2。

2.5 供試品干擾試驗,用兩個廠家的靈敏度為0.25EU/mg,制成細菌內毒素標準品分別含內毒素(2.0、 1.0、 0.5、0.25) λ濃度的溶液。分別平行做4管, 并且做細菌內毒素檢查用水和供試品的溶液為(1：2)分別做2管比較, 并計算以樣品稀釋液配制的細菌內毒素溶液反應到終點濃度幾何均值(Et)觀察結果, 表明ES在(0.5~2.0)λ之間, Et在(0.5 s~2.0) Es之間, 表明該注射液的2倍稀釋液對鱟試劑試驗沒有產生干擾作用。供試品的細菌內毒素取三批注射用鹽酸格拉斯瓊依次加入細菌內毒素檢查用水制成每1ml中含格拉斯瓊30μg的溶液, 按《中國藥典》2005年版檢查法進檢查, 每1ml中含內毒素的量應(>0.25EU)。見表3。表3供試品干擾試驗結果。

表1 鱟試劑靈敏度復核實驗結果

表2 供實品干擾實驗結果

表3 供試品干擾實驗

3 討論

本文主要通過干擾試驗預試驗, 取3批注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉溶液2倍稀釋液對細菌內毒素檢查無干擾。用細菌內毒素檢查法代替熱原檢查法是合理的, 表明用細菌內毒素檢查方法控制內毒素的方法是可行的。

［1］ 國家要點委員.中華人民共和國藥典(二部).2005年版、北京:化學工業出版社, 2005.

830011 新疆醫科大學附屬腫瘤醫院藥劑科 (梁永紅趙飛)；新疆喀什莎車縣人民醫院院部(阿達來提·依迪熱斯)

阿達來提?依迪熱斯