復方中草藥添加劑對刺參免疫酶活性的影響

遼寧醫學院畜牧獸醫學院 王維新 白 燕 王 宏 蘇 暢 楊鳳影

刺參是低等無脊椎動物，沒有特異性免疫機制，但具有較完善的非特異性免疫系統，有對抗病原的吞噬細胞和免疫因子 （簡紀常和吳灶和，2002）。免疫增強劑具有廣譜性，對疾病有一定程度的預防作用，因此開發免疫增強劑，通過提高非特異性免疫機能來增強刺參的抗病能力具有重要意義。中草藥含有的免疫活性物質主要有多糖、甙類、有機酸、生物堿、萜類及醇類等揮發性成分。

本試驗利用中醫理論將多種中草藥配伍，粉碎后直接添加到刺參飼料中，測定與免疫力有關酶的活性，以期為刺參免疫增強劑的篩選提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 健康刺參購于遼寧省錦州市金域刺參良種場，體長（4.0±0.35）cm，單體質量（3.0±0.45）g。將刺參飼養于塑料水箱中， 水溫 （17±1）℃，pH（8.1±0.2），海水鹽度為（29±2）‰，日投喂 1 次（16∶00）飼料，虹吸法去除殘餌及糞便并換水30%。暫養1周后用于試驗。

中草藥配方：黃芪10份、黨參10份、防風5份、白術5份、金銀花2份、連翹2份、維生素C 1份。所用中草藥均購自錦州方圓藥店，粉碎后過200目篩。將粉碎后的中草藥分別以質量分數為1%、2%、3%、4%的比例添加到基礎飼料中。

1.2 試驗設計 試驗分5組，分別為對照組（投喂基礎飼料）、1%（質量百分比）中草藥組、2%中草藥組、3%中草藥組和4%中草藥組，每組3個重復，每個重復飼養刺參20頭。共投喂24 d。投喂期間每天監測氨氮、亞硝酸鹽、溶氧、pH等水質指標并觀察刺參生長及健康狀況。

1.3 指標測定 于投喂后第 7、10、14、18、24天測定刺參各種免疫指標。每次從各重復組中隨機取出刺參2頭，解剖取出腸道及呼吸樹，去除腸道中的糞便，混合稱重，玻璃勻漿器充分研磨后離心（10000 r／min，4 ℃，5 min），取上清液，4 ℃保存待用。 酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和超氧化物歧化酶（SOD）活性測定使用南京建成試劑盒完成。

1.4 統計分析 數據用SPSS13.0軟件進行單素方差分析（One-way AN0VA），結果以“平均值±標準差”表示，試驗組與對照組做差異顯著性分析，P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 對刺參NOS活性的影響 由表1可見，各試驗組在投喂后24 d內NOS活性呈現先升高后降低的趨勢。各試驗組第10～24天，NOS活性均與對照組差異顯著 （P＜0.05），口服第18天后，2%復方中草藥組NOS活性最高，為（17.21±1.05）U/mg prot，是對照組的8.56倍。

表1 刺參內臟組織一氧化氮合酶活性測定U/mg prot

2.2 對刺參AKP活性的影響 由表2可見，在飼喂后24 d內AKP活性隨時間延長呈先升高后降低的趨勢，各試驗組第10～18天，AKP活性均與對照組差異顯著（P＜0.05），第10天，2%復方中草藥組AKP活性最高，為33.07 U/g prot，是對照組的3.03倍。

2.3 對刺參ACP活性的影響 由表3可見，飼喂后24 d內ACP活性呈先升高后降低的趨勢，各試驗組第10～18天，AKP活性均與對照組差異顯著（P＜0.05）。其中第14天，2% 復方中草藥組 ACP活性達到最高值， 為（36.24±1.87）U/g prot，是對照組的6.14倍。

表2 刺參內臟組織堿性磷酸酶活性測定U/g prot

表3 刺參內臟組織酸性磷酸酶活性測定U/g prot

2.4 對刺參SOD活性的影響 由表4可見，飼喂后24 d內刺參體腔液中SOD活性呈先升高后降低的趨勢，各試驗組第10～24天，NOS活性均與對照組差異顯著（P＜0.05）。在口服第18天，3%中草藥組SOD活性最高， 為 （102.15±2.31）U/mg prot，是對照組的2.27倍。

表4 刺參內臟組織超氧化物歧化酶活性測定U/mg prot

3 討論

研究表明，NOS能以L-精氨酸為底物在體內合成多種與免疫活性有關的內源性NO，從而改變機體的免疫機能，并可通過阻止DNA、蛋白質和脂質合成而具有抗菌和抗病毒活性。在本試驗中，中草藥添加劑提高了刺參體腔細胞NOS活性，這與劉紅柏等（2006）和 Karupiah 等（1993）試驗結論一致。

AKP普遍存在于生物細胞內，催化磷酸單脂水解生成乙醇和磷酸的代謝反應，并與一些營養物質的消化吸收有關。本研究結果表明，添加不同水平中草藥添加劑后，各試驗組刺參內臟組織AKP活性均得到提高，且第10、14、18天顯著高于對照組（P＜0.05）。 艾春香等（2002）研究認為，維生素C、維生素E作為免疫增強劑可使河蟹AKP活性顯著升高。

ACP是生物體巨噬細胞內最有代表性的水解酶，巨噬細胞吞噬異物顆粒形成吞噬體，然后利用包括ACP在內的溶解酶消化異物顆粒。ACP活性可反映吞噬細胞清除異物的能力，也就是非特異性免疫能力。本試驗結果表明，飼喂含不同水平復方中草藥添加劑日糧一段時間后，刺參內臟組織ACP活性均有不同程度提高，且第10、14、18天與對照組相比差異顯著，這與免疫增強劑在對蝦上應用結論吻合，即顯著提高了ACP活性（江曉路等，1999）。

SOD是重要的抗氧化酶之一，作為活性氧清除劑參與清除體內自由基，在防機體衰老及防生物分子損傷等方面具有極為重要的作用。有研究報道，SOD活性與生物體的免疫水平密切相關，其對于增強吞噬細胞的防御能力和整個機體的免疫功能有重要的作用。本試驗中添加不同水平復方中草藥提高了刺參內臟組織中的SOD活性，增強了抗氧化能力，這可能與中草藥成分中的黃酮和皂甙消除氧自由基的作用有關。

4 結論

本研究結果表明，通過投喂途徑，復方中草藥添加劑能一定程度增強刺參內臟組織中免疫相關酶ACP、AKP、NOS及SOD的活性。結合添加量及飼喂時間綜合考慮，飼料中添加2%～3%中草藥添加劑，投喂14～18d可使刺參免疫相關酶的活力得到較大提高。

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