四產地黃精中多糖含量及抗氧化活性比較

張 靜，張艷貞，陳 文，姜程曦

（1.北京聯合大學應用文理學院，北京 100191；2.溫州醫學院藥學院，浙江溫州 325000；3.九華山黃精研究所，安徽九華山 242811）

黃精（Polygonatum sibiricum Delar.ex Redoute）是多年生的百合科草本植物，現代藥理研究表明，多糖（Polysaccharide）具有抗腫瘤、調節血糖血脂、調節免疫等生理功能。作為黃精主要藥用成分之一的黃精多糖，由黃精根莖（Rhizoma Polygonati）提取的乙醇提取物（Solomonseal Rhizome P.E.）與其他多糖一樣具有抗腫瘤、抗衰老、免疫調節作用以及抗氧化損傷等作用，還證明了黃精多糖具有抑菌、抗動脈粥樣硬化等功能[1]。通過黃趙剛等[2]對不同產地黃精多糖的檢測，結果表明，各地黃精中多糖含量差別明顯，以葡聚糖（Dextran）計，其含量從高到低依次為安徽九華山、貴州、河南周口、云南、河北、湖南、河南濟源，其中安徽九華山產地的黃精多糖含量最高，為17.79%。本實驗為了解不同產地黃精多糖的抗氧化能力（Antioxidant capacity），通過測定不同產地黃精多糖含量以及抗氧化能力，分析多糖含量與抗氧化能力的關系。實驗中選用九華山黃精、浙江溫州黃精、浙江大盤山黃精和貴州遵義黃精進行多糖含量及抗氧化量效關系的比較研究。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

多花黃精 產地分別為安徽九華山、浙江溫州、貴州遵義、浙江大盤山，實驗中選用多花黃精的地下莖，清洗后烘干、脫脂，打碎機打碎后備用。

UV-2000型紫外可見分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司；AE-100型電子分析天平 梅特勒－拖利多儀器公司；KQ-500DE型數控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；HH SY21-NI型電熱恒溫水浴鍋 北京市長風儀器儀表有限公司；FW-100型高速萬能粉碎機 天津市泰斯特儀器有限公司；DHG-9023A型電熱恒溫鼓風干燥箱 上海一恒科技有限公司；3K15型高速冷凍離心機 德國sigma；L530型臺式離心機 湖南長沙湘儀檢測設備有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 多糖提取 分別取四產地的黃精粉50g，無水乙醇脫脂后70℃烘干，加入400mL去離子水，100Hz功率超聲提取1h，分離濾液，濾液中加入等體積無水乙醇靜置過夜沉淀多糖。粗多糖產率計算公式見式（1）：

1.2.2 多糖脫色[3]由于產地為浙江溫州、貴州遵義、浙江大盤山的黃精提取的多糖提取物顏色較深，故在提取結束后，在濾液中加入2%的顆粒狀活性炭，振蕩過夜，離心取清液加入無水乙醇沉淀多糖以達到脫色的效果。脫色后粗多糖產率計算公式見式（2）。

1.2.3 脫還原糖 在提取得到的多糖沉淀中加入95%的乙醇，振蕩過夜，離心，收集沉淀待測[4]。脫還原糖后粗多糖產率計算公式見式（3）。

1.2.4 含量測定 以葡萄糖為標準，硫酸苯酚法測定多糖含量[5]。

1.2.5 體外抗氧化活性測定

1.2.5.1 鄰苯三酚法檢測黃精多糖對超氧陰離子的影響[6]在試管中加入pH8.2的0.05mol/L Tris－HCl緩沖液2.5mL，加入濃度為10mg/mL樣品（對照用蒸餾水代替）1mL。于25℃保溫10min，加入同樣預溫的30mmol/L鄰苯三酚溶液0.5mL，迅速搖勻倒入比色皿，在325nm下，每隔30s測一次吸光值。反應時間為4min，滯后30s。計算每分鐘吸光值的增值，此即為自氧化速率（ΔOD）。

1.2.5.2 丙二醛法檢測黃精多糖對有羥自由基引起的脂質過氧化的影響[7]向試管中依次加入小鼠肝勻漿液100μL，6mmol/mL硫酸亞鐵溶液50μL，濃度為12.5mg/mL黃精多糖提取物50μL，對照管加入測定樣品相同量的蒸餾水，所有測定管加入10mmol/mL雙氧水50μL，于37℃溫浴1h。通過黃精多糖粗提物參與上述體系中的反應，抑制體系中MDA生成，使用MDA試劑盒測定MDA含量，以黃精多糖對MDA的生成抑制率（式4），進行不同產地黃精抗氧化活性的比較。

2 結果與討論

2.1 四產地黃精中多糖含量的比較

表1 黃精中多糖含量（n=4）Table 1 The content of Polygonatum polysaccharide（n=4）

由表1可見，九華山黃精的多糖含量顯著高于其他三產地的黃精，且所含雜質更少。

從檢測出的黃精多糖含量數據看出，實際檢測的多糖含量與文獻報道的含量接近，尤其是在進一步純化后。九華山黃精中多糖的含量高于其他產地的黃精，而且其多糖粗提物中的雜質相對更少，提取比例較高。由于本實驗用此方法多次重復所測出的多糖含量比較穩定，提取液可用于抗氧化值的檢測。

2.2 四產地黃精多糖對超氧陰離子的抑制

表2 黃精多糖對鄰苯三酚自氧化速率的影響（n=4）Table 2 The effects on The inhibition rate of pyrogallol self-oxidationcontent of Polygonatum polysaccharide（n=4）

由表2可見，四產地的黃精多糖提取物（10mg/mL）對鄰苯三酚自氧化產生超氧陰離子的速率均有明顯的降低作用（p＜0.01），其中九華山黃精多糖的效果更好，與其他各產地產黃精相比有顯著差異（p＜0.05）。

2.3 四產地黃精多糖對羥自由基的抑制

表3 黃精多糖對羥自由基的抑制率（n=4）Table 3 The inhibition rate of hydroxyl free radical of Polygonatum polysaccharide（n=4）

自由基對機體的損害作用中以對脂質的損害作用最為嚴重[8]。羥自由基（·OH）是活性氧一種，能導致生物體內DNA，蛋白質和脂質氧化損傷。在體外體系中，通過硫酸亞鐵溶液與過氧化氫溶液生成氧自由基，攻擊小鼠肝組織生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化作用，并因此形成脂質過氧化物，如丙二醛（MDA）[9]，使用MDA檢測試劑盒測定，通過測試可以反映出體外系統細胞水平及亞細胞水平的脂質過氧化的情況。本實驗選用檢測體外系統中MDA生成量的方法進行黃精多糖抑制羥自由基能力檢測。

由表3可見，四產地的黃精多糖均可抑制羥自由基對細胞膜的損傷，其中九華山黃精多糖效果最好，抑制率約為28%，更與溫州產黃精有極顯著性差異。

3 結論

本文以黃精多糖為實驗對象，實驗結果顯示九華山黃精的多糖含量顯著高于其他三產地的黃精，且所含雜質更少。黃精多糖對鄰苯三酚自氧化產生超氧陰離子的速率均有明顯的降低作用，對羥自由基對細胞膜的損傷有抑制作用，九華山黃精多糖的作用明顯優于其余三產地的黃精多糖。

實驗中選用的提取原料是多花黃精的地下莖，是植株貯存營養物質的場所，糖類、脂類含量豐富，而且其營養物質的貯存及其生物活性與氣候、生長環境有很大關系。九華山地區氣候溫和，雨量充沛，日照充足，自然條件非常適合黃精的生長，生產的黃精質量也比較好。本實驗證明九華山產黃精的多糖含量和抗氧化活性都比較出色。

[1]曹明菊，鄭曉燕，陳麗華.黃精多糖的研究進展[J].中國食品添加劑實驗研究，2007（4）：51－53.

[2]黃趙剛，劉志榮，夏泉，等.不同產地黃精中多糖含量的比較[J].時珍國醫國藥，2003，14（9）：526－527.

[3]陳存武，張莉，王玉領，等.黃精多糖提取液的活性炭脫色研究[J].中國林副特產，2008（6）：1－3.

[4]余瑞元，袁明秀，陳麗榮，等.生物化學實驗原理和方法[M].第二版.北京：北京大學出版社，2008：197－201.

[5]賀海花，楊云，王爽，等.不同蒸制方法和時間對黃精中多糖含量的影響[J].中藥材，2009，32（6）：861－862.

[6]韓少華，朱靖博，王妍妍.鄰苯三酚自氧化法測定抗氧化活性的方法研究[J].中國釀造，2009，207（6）：155－157.

[7]Ming Sun，Seymour Zigman.An improved spectrophotometric assay for superoxide dismutase based on epinephrine autoxidation[J].Analytical Biochemistry，1978，90：81－89.

[8]姚林，王廣增，趙伯陽，等.泡利芬對大鼠脂質過氧化及抗氧化能力的影響[J].衛生毒理學雜志，1998，12（2）：124－125.

[9]J B Cross.Killing of Bacillus Spores by Aqueous Dissolved Oxygen， Ascorbic Acid， and Copper Ions[J].Applied and Environmental Microbiology，2003，69（4）：2245－2252.