紅大戟提取物對結核桿菌的抑制作用觀察

秦海宏，賈琳鈺，高 陽

(1 大連大學護理學院，遼寧大連 116622;2 大連大學醫學部;3 大連市結核病院)

我國肺結核的發病率居世界第二位。由于抗結核化學合成藥物開發周期長、難度大、易產生耐藥性，且目前臨床常用的抗結核藥物大多對肝臟、腎臟有較大的毒性，因此從中藥資源中尋找安全有效的抗結核藥物已受到重視。紅大戟又名紅芽大戟、廣大戟、南大戟，為茜草科植物紅大戟的干燥根，具有瀉水逐飲、消腫散結的功效，臨床上用于治療胸腹積水、二便不利、癰腫瘡毒、瘰疬痰核等癥［1］，對金黃色葡萄球菌及綠膿桿菌亦有抑制作用。2008年9月～2009年4月，我們對紅大戟的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚5種提取物進行了結核桿菌的體外抑菌試驗，旨在為紅大戟的臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 標準菌株為強毒人型結核桿菌H37RV菌株，由大連市結核病院提供。紅大戟購自石家莊樂仁堂飲片廠。

1.2 方法

1.2.1 紅大戟提取物制備 紅大戟根曬干后制成粗粉，取100 g分別采用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、甲醇、水提取，將五種提取物回收溶劑后置4℃冰箱中備用。

1.2.2 含藥培養基制備 參照文獻［2］配制改良羅氏培養基。陰性培養基采用無藥物的羅氏培養基。陽性培養基采用含5 mg/mL利福平的改良羅氏培養基。取2.1制備的紅大戟各組分提取物，分別加入含1.5%Tween-80的培養基，配置成相當于含生藥100 mg/mL濃度的培養基;再取100 mg/mL稀釋的含藥培養基4 mL，加入培養基(不含Tween-80)4 mL，混勻即成50 mg/mL稀釋度;同法稀釋，分別制成 25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78 mg/mL 共 8 個濃度，每個濃度裝3個試管，各組培養基高壓蒸汽滅菌后，制成斜面培養基備用。

1.2.3 紅大戟提取物對 H37RV的抑制作用觀察［3］取在培養基上生長良好的強毒人型結核桿菌H37RV，置于盛Tween-80生理鹽水的試管中，研磨成混懸液，濃度調整至106個/mL，供接種用。取該菌液0.1 mL，無菌條件下分別接種于陰性培養基、陽性培養基及不同濃度紅大戟提取物的含藥培養基中，放入37℃恒溫箱中培養，連續觀察4周，計錄培養基表面H37RV生長情況。判斷標準:以3個平行樣品綜合結果為準，結果不一致者為+，未見菌落增長為-，菌落數1～2個為+、2～6個為++、7～10個為+++，10個以上(或液面有菌膜生長)為++++。

2 結果

培養第2、3、4周，當紅大戟濃度高于12.5 mg/mL時，5種提取物對結核桿菌標準菌株H37RV生長均有明顯的抑制作用。相同藥物濃度下水提取物的抑菌能力最弱，在6.25 mg/mL濃度下，第2周即出現了由“-”轉“+”的現象;其次為甲醇提取物，在3.125 mg/mL濃度下第2周出現了由“-”轉“+”的現象。石油醚提取物和氯仿提取物作用最強，且效果相當;高于1.56 mg/mL濃度下，第2～4周均未見H37RV生長，抑菌作用較為穩定。培養第4周時，陰性培養基菌落數為-，陽性培養基為++++。見表1。

表1 實驗第2周各提取物對H37RV生長的抑制作用

表2 實驗第3周各提取物對H37RV生長的抑制作用

表3 實驗第4周各提取物對H37RV生長的抑制作用

3 討論

目前結核病發病率在全球呈上升趨勢［4］，我國結核病患者人數居世界第二位［5］。造成這種狀況的原因有多方面，但主要是結核桿菌對常用抗結核藥形成了耐藥性［6，7］。近年來，應用傳統中藥治療結核病和體外抑制結核桿菌的研究取得了較大的進展，從傳統中藥中尋求新的抗結核成分和化合物已經成為抗結核藥物研發的方向之一［8，9］。紅大戟是我國珍稀中藥材，以根入藥，性味苦寒，歸肺脾腎經，有小毒?！侗静菥V目》記載，紅大戟具有補肝益腎、滋陰壯陽、利尿消腫、排毒養顏等功效。近年中醫臨床研究發現，紅大戟治療癌腫、癰腫、瀉水、腹水等癥具有一定的療效，但目前尚未見到紅大戟抗結核活性的報道。本研究采用系統分離法獲得紅大戟的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚5個極性組分，發現當紅大戟濃度高于12.5 mg/mL時，5種提取物對結核桿菌標準菌株H37RV的生長均有明顯抑制作用，相同藥物濃度下水提取物的抑制菌作用最弱，其次為甲醇提取物，以石油醚提取物和氯仿提取物作用最強，尤其是當濃度高于1.56 mg/mL時，抑菌作用較為穩定。

現代藥物化學研究發現，紅大戟具有多種獨特的化學成分［10］。袁珊琴等［11］從紅芽大戟中分離得到2個蒽醌類化合物:1，3，5-三羥基-2-乙氧甲基-6-甲氧基蒽醌(Ⅰ)及 1，3-二羥基-2-乙氧甲基-蒽醌(Ⅱ)，且化合物Ⅰ為新成分。王玉波等［12］從紅芽大戟的正丁醇萃取部分分離得到4個黃酮醇苷成分，分別鑒定為槲皮素-7-O-α-L-阿拉伯糖-3-O-β-D-6-乙?；拎咸擒?、山奈酚-7-O-α-L-阿拉伯糖-3-O-β-D-吡喃葡糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷、槲皮素-3-O-β-D-6-乙?；拎咸擒铡５烤股鲜瞿男┏煞职l揮了抗結核作用尚不明確。本研究發現，紅大戟石油醚提取物和氯仿提取物的抗結核桿菌作用最強，為從紅大戟中尋找有應用前景的抗結核天然活性產物和先導化合物提供了實驗依據。但本實驗所用藥物為粗提物，有待于進一步分離追蹤有效成分。

［1］陸善旦，王建.紅大戟十年走勢分析及預測［J］.中國現代中藥，2008，10(8):38-40.

［2］黃志強，張日東，吳智龍.新型改良羅氏培養基與羅氏酸基檢測結核分枝桿菌比較［J］.廣東醫學，2011，32(9):1152-1153.

［3］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.2版.上海:上海科學技術出版社，2006:753-756.

［4］成詩明.我國結核病研究概況［J］.中國防癆雜志，2011，23(9):525-526.

［5］李靜，聶廣.中藥抗結核桿菌的實驗研究進展［J］.湖北中醫雜志，2010，32(8):35-37.

［6］石磊.結核分枝桿菌抗原及其研究進展［J］.醫學綜述，2012，18(11):1609-1610.

［7］任麗娟，王麗，文仲書，等.抗結核中藥成分的研究［J］.藥學實踐雜志，2009，27(1):15-17.

［8］范君文，于錄，馬蘭芝，等.29種中藥提取物抗結核藥物敏感性研究［J］.中國農學通報，2009，25(24):1-7.

［9］吳虢東，王玲.抗結核中藥的研究進展［J］.醫學綜述，2007，13(6):475-476.

［10］黃浩，韋鵬霄，岑秀芬.藥用植物紅芽大戟研究概況［J］.熱帶農業科技，2005，28(2):30-33.

［11］袁珊琴，趙毅民.紅芽大戟的化學成分［J］.藥學學報，2006，41(8):735-737.

［12］王玉波，趙靜峰，李干鵬，等.紅芽大戟化學成分研究［J］.藥學學報，2004，33(6):439-441.