CD14基因啟動子－260C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患性關(guān)系的Meta分析

吳修華，杜 杰，徐光燕

白細(xì)胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen 14，CD14)是革蘭陰性菌內(nèi)毒素脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)受體，為細(xì)胞表面糖蛋白家族成員之一［1］，主要由成熟的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。CD14基因全長3 900 bp，編碼一個375殘基的氨基酸，該基因位于人類5號染色體長臂2.3～3.1區(qū)。主要功能是在LPS結(jié)合蛋白的協(xié)助下結(jié)合LPS并引起細(xì)胞活化，引起致炎因子的釋放和促凝因子的合成，加速或促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成［2］。該基因啟動子區(qū)域上游－260位點(diǎn)存在C/T多態(tài)性，這兩種等位基因多態(tài)性的存在可能影響該基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)［3］。有關(guān)該位點(diǎn)多態(tài)性與腦血管疾病關(guān)系的研究較多，但結(jié)果存在一定差異，因此本文對該位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)評價(jià)。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)研究類型為CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與目標(biāo)疾病易患性關(guān)系的隊(duì)列研究或病例對照研究;(2)研究對象為臨床及影像學(xué)確診的腦血管疾病〔包括腦梗死、腦出血和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)〕患者及健康者;(3)文獻(xiàn)提供各基因型頻數(shù)，優(yōu)勢比(odds ratio，OR)及95%CI，或四格表資料用以計(jì)算 OR;(4)研究方法相似，且均符合流行病學(xué)要求;(5)對同一人群或亞群進(jìn)行的多次研究選擇質(zhì)量較高的最近發(fā)表的文獻(xiàn)作為研究對象。

文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn):(1)文獻(xiàn)提供數(shù)據(jù)不完整，無法提取四格表資料用以計(jì)算OR;(2)基因分型方法不可靠;(3)同一研究重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)。

1.2 檢索策略 檢索EMBase(1974年3月—2011年2月)、PubMed(1966年1月—2011年2月)、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI，1994年2月—2011年2月)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫 (CBM，1978年1月—2010年2月)，搜集公開發(fā)表的關(guān)于CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病相關(guān)性的病例對照研究或隊(duì)列研究。中文檢索詞為“白細(xì)胞分化抗原14”、“CD14”、“腦中風(fēng)”、“腦梗塞”、“腦出血”、“短暫性腦缺血發(fā)作”、“TIA”，英文檢索詞為“CD14”、“stroke”、“TIA”，并分別作為主題詞、自由詞進(jìn)行檢索。

1.3 文獻(xiàn)篩選和資料提取 由兩位研究者根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選和數(shù)據(jù)提取，如遇不同意見則進(jìn)行討論，并請教相關(guān)專家最終確定是否納入。

1.4 文獻(xiàn)質(zhì)量評價(jià) 納入研究為非隨機(jī)臨床對照研究，而目前關(guān)于非隨機(jī)臨床對照研究的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)并非十分完善。因此本Meta分析采用2003年STROBE條目進(jìn)行粗略評價(jià)［4］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 按照要求整理數(shù)據(jù)。分別計(jì)算TT vs.CC、TT vs.(CT+CC)、(TT+CT)vs.CC 3種模式下CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病的相關(guān)性。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件Review Manager 5.0計(jì)算合并OR值及95%CI，繪制OR值分布森林圖。異質(zhì)性檢驗(yàn)采用Q統(tǒng)計(jì)量的I2檢驗(yàn)分析，雙側(cè)P＞0.1不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，數(shù)據(jù)合并采用Mantel－Haenszel固定效應(yīng)模型 (fixed effect model);P≤0.1認(rèn)為存在較大異質(zhì)性，此時Meta回歸進(jìn)一步分析其異質(zhì)性的來源，并對引起異質(zhì)性的來源進(jìn)行亞組分析或采用描述性分析。異質(zhì)性因素單純由統(tǒng)計(jì)學(xué)引起而無臨床或方法學(xué)異質(zhì)性則采用Dersimonian－Laird隨機(jī)效應(yīng)模型 (random effect model)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以O(shè)R為橫坐標(biāo)，OR自然對數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤SE(logOR)為縱坐標(biāo)繪制漏斗圖，同時用Egger線性回歸法進(jìn)行檢驗(yàn)，根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果和漏斗圖的對稱性評估發(fā)表偏倚。如果檢驗(yàn)結(jié)果提示存在發(fā)表偏倚，采用剪補(bǔ)法 (metatrim)對發(fā)表偏倚進(jìn)行校正，并計(jì)算校正后的OR值。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果及質(zhì)量評價(jià) 最初檢索到相關(guān)文獻(xiàn)86篇，根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)最終共納入文獻(xiàn)8篇［5－12］(見圖1)，其中腦血管疾病組1 670例，對照組1 689例。來自亞洲人群報(bào)道4篇［5，8，11－12］，來自歐洲人群報(bào)道3篇［6，9，10］，來自北美洲人群的報(bào)道1篇［7］。病例診斷均符合世界衛(wèi)生組織 (WHO)診斷標(biāo)準(zhǔn)，基因分型均使用公認(rèn)的、科學(xué)的檢測方法 (見表1)。

圖1 納入分析文獻(xiàn)的流程圖Figure 1 Flowchart of searching for included studies

表1 納入研究的基本特征Table 1 Characteristic of the studies included in the Meta－analysis

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1 TT vs.CC模式 以CC基因型為參照，評估TT基因型與腦血管疾病易患性的關(guān)系。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性 (I2=74%，P=0.0004)。metreg分析異質(zhì)性來源:以O(shè)R的自然對數(shù)logOR為應(yīng)變量，OR自然對數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤SE(logOR)為自變量，以不同人群 (東亞和高加索人群)為協(xié)變量進(jìn)行回歸分析。結(jié)果顯示，人群不同不是造成異質(zhì)性的主要來源 (Coef=－0.19，t=－0.66，P=0.54，見圖2)。因此，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，結(jié)果顯示在該模式下，攜帶TT基因型個體與攜帶CC基因型的個體相比與腦血管疾病易患性無關(guān)〔OR=1.14，95%CI(0.76，1.70)，P=0.54，見圖3〕。

圖2 Meta回歸分析異質(zhì)性來源Figure 2 Meta－regression analyses on source of heterogeneity

圖3 TT vs.CC模式下CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系Figure 3 Forest plot of the relationship between CD14 gene promoter－260 C/T polymorphisms and cerebrovascular diseases susceptibility in TT vs.CC model

2.2.2 TT vs.(CT+CC)模式 以CT+CC基因型為參照，評估TT基因型與腦血管疾病易患性的關(guān)系。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性 (I2=74%，P=0.0004)。metreg分析異質(zhì)性來源:以不同人群 (東亞和高加索人群)為協(xié)變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示人群不同不是造成異質(zhì)性的主要來源 (Coef=－0.22，t=－0.98，P=0.37)。因此，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，結(jié)果顯示在該模式下，攜帶TT基因型個體與攜帶CC或CT基因型的個體相比與腦血管疾病易患性無關(guān)〔OR=1.17，95%CI(0.84，1.62)，P=0.36，見圖4〕。

圖4 TT vs.(CT+CC)模式下CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系Figure 4 Forest plot of the relationship between CD14 gene promoter－260 C/T polymorphisms and cerebrovascular diseases susceptibility in TT vs.(CT+CC)model

2.2.3 (TT+CT)vs.CC模式 以CC基因型為參照，評估TT+CT基因型與腦血管疾病易患性的關(guān)系。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性 (I2=78%，P＜0.0001)。metreg分析異質(zhì)性來源:以不同人群 (東亞和高加索人群)為協(xié)變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示人群不同不是造成異質(zhì)性的主要來源 (Coef=－0.17，t=－0.73，P=0.50)。因此，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，結(jié)果顯示在該模式下，攜帶TT或CT基因型的個體與攜帶CC基因型個體相比與腦血管疾病的易患性無關(guān)〔OR=1.08，95%CI(0.77，1.51)，P=0.65，見圖5〕。

圖5 (TT+CT)vs.CC模式下CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系Figure 5 Forest plot of the relationship between CD14 gene promoter－260C/T polymorphisms and cerebrovascular diseases susceptibility in(TT+CT)vs.CC model

2.2.4 亞組分析 按歐洲人群、亞洲人群和北美洲人群的不同進(jìn)行分層分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在各種模式下均未顯示出CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病的相關(guān)性 (見表2)。

表2 亞組分析不同模式下CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系Table 2 Sub－group analysis on the relationship between CD14 gene promoter－260/CT polymorphisms and cerebrovascular diseases susceptibility

2.3 發(fā)表偏倚 用統(tǒng)計(jì)軟件RevMan 5.0繪制倒漏斗圖，各點(diǎn)上呈漏斗狀排列 (見圖6);Egger檢驗(yàn)說明不存在明顯的發(fā)表性偏倚 (t=0.78，P=0.46)。

圖6 識別發(fā)表偏倚的漏斗圖Figure 6 Funnel plot of the detection of publication bias

3 討論

腦血管疾病是一組發(fā)病機(jī)制尚未闡明的中老年人群的常見病和多發(fā)病，是目前致死、致殘率極高的一種疾病，估計(jì)全國腦卒中患者每年新發(fā)病例數(shù)在150萬。隨著人口的老齡化，腦卒中發(fā)病率呈上升趨勢［13－14］。腦血管疾病的發(fā)生是多種危險(xiǎn)因素長期綜合作用的結(jié)果，它的發(fā)生與很多因素有關(guān)如高齡、高血壓、糖尿病等［15］。近年來基因多態(tài)性與腦血管疾病發(fā)病關(guān)系的研究較多，但各研究結(jié)果并不一致。CD14作為革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁成分LPS的受體，主要表達(dá)在單核巨噬細(xì)胞表面，可通過LPS結(jié)合蛋白與LPS特異性結(jié)合，并通過Toll樣受體向下游傳遞活化信號，啟動單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，并釋放多種炎性細(xì)胞因子，從而參與炎性反應(yīng)及血脂代謝。CD14基因具有遺傳多態(tài)性，這種基因多態(tài)性影響CD14基因轉(zhuǎn)錄和脂質(zhì)代謝，進(jìn)而影響到CD14的生物學(xué)功能。因此該基因的多態(tài)性可能與腦血管疾病的發(fā)生有關(guān)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攜帶TT基因型個體與攜帶CC基因型的個體相比 (TT vs.CC)患腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)為1.14;攜帶TT基因型個體與攜帶CT和CC基因型的個體相比 (TT vs.CT+CC)患腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)為1.17;攜帶TT和CT基因型與攜帶CC基因型的個體相比 (TT+CT vs.CC)患腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)為1.08。亞組分析，按歐洲、亞洲、北美洲人群進(jìn)行亞組分析，發(fā)現(xiàn)在各種模式下均未顯示出該基因多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系。因此，CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病的易患性無相關(guān)性。理論上，慢性病如腦血管疾病的遺傳方式并不符合孟德爾單基因遺傳的遺傳規(guī)律，而是多基因遺傳。多個微小效應(yīng)的基因在某個或某些環(huán)境因子的作用下產(chǎn)生一個總效應(yīng)，從而導(dǎo)致該疾病的發(fā)生，它的遺傳屬于多基因遺傳，腦血管疾病的遺傳并不符合經(jīng)典的單基因孟德爾遺傳法則，而是個體的遺傳易患性。因此，需要同時進(jìn)行多基因多位點(diǎn)聯(lián)合檢測，從而判斷基因多態(tài)性與腦血管疾病易患性的關(guān)系。根據(jù)聯(lián)合檢測結(jié)果篩查腦血管疾病易患人群，早期發(fā)現(xiàn)易患人群，對易患人群進(jìn)行早期干預(yù)，做到早預(yù)防、早診斷、早治療，從根本上解決目前腦血管診治過程中的被動局面。

本文Meta分析也存在一定的局限性，首先，本研究只對發(fā)表語言為英語、漢語的文獻(xiàn)進(jìn)行了檢索，未檢索其他語言發(fā)表的文獻(xiàn)。這種語言限定的檢索可能存在文獻(xiàn)納入偏倚。第二，各研究結(jié)果間在各模式下均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，盡管這種統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性可以通過隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行修正，但其結(jié)果會增大CI的范圍，對結(jié)論的穩(wěn)定性還是會產(chǎn)生一定的影響。基于上述局限性，有必要對CD14基因啟動子－260 C/T多態(tài)性與腦血管疾病易患間的關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

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