肝細胞癌中Survivin、Livin蛋白的表達及其臨床意義

王康康 肖興國

鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院消化內科，河南鄭州 450052

原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤，嚴重危害著人類的健康。 IAPs（inhibitors of apoptosis proteins）是一組以抑制caspase為主要作用機制的凋亡調控因子。其中Survivin和Livin是IAPs家族中最具有表達特異性的兩種凋亡抑制蛋白，在人類多種腫瘤組織中異常表達[1]。故一部分學者認為檢測Livin、Survivin可以幫助腫瘤疾病的診斷，為腫瘤的治療提供新的治療途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院普外科2006年5月～2008年5月手術切除并經(jīng)病理學證實的HCC標本60例，男39例，女 21 例，年齡 18～78 歲，平均（50.00±10.60）歲。 所有患者在術中、術前均未經(jīng)放、化療及免疫治療。將HCC分為3級，其中，高分化13例，中分化36例，低分化11例；腫瘤直徑≥3 cm 42例，＜3 cm 18例；有轉移47例，無轉移13例（轉移包括肝內轉移、淋巴結轉移和肝外轉移）。另隨機抽取上述60例HCC患者的癌旁肝組織40例作為對照。

1.2 方法

兔抗人Livin、survivin多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色劑試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。標本均經(jīng)10%甲醛溶液常規(guī)固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組化二步法，具體步驟參照試劑盒說明。用PBS代替一抗做陰性對照。以胞漿、胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒為Survivin、Livin免疫組化染色陽性。將染色強度和陽性細胞百分率相結合判斷Survivin、Livin免疫組化染色結果。先按染色強度評分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，染色強度需與背景色相對比；再按陽性細胞所占百分比評分：0分為陽性細胞<5%，1分為5%～25%，2分為 26%～50%，3分為 51%～75%，4分為>75%，染色強度分值與陽性細胞百分比分值的乘積為0～1分為陰性，2～3 分為+，4～5 分為++，>6 分為+++。 本實驗將+～+++均視為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理，陽性率比較用χ2檢驗，相關性分析采用Sperman等級相關性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Survivin及Livin在肝細胞癌組織及癌旁組織中的表達

肝細胞癌中Survivin及Livin染色陽性物質呈棕黃色顆粒狀，表達主要位于癌細胞的胞漿和胞核，在部分癌旁組織中可見Survivin及Livin染色陽性。肝癌組Survivin及Livin 陽性率分別為 68.3%（41/60）、58.3%（35/60）， 癌旁組分別為 10.0%（4/40）、5.0%（2/40）。 兩組 Survivin 及 Livin陽性率比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。

2.2 Survivin及Livin的表達與肝細胞癌臨床及病理學特征之間的關系

具體見表1。

表1 肝癌組織Survivin及Livin陽性表達與腫瘤臨床病理特征的比較（n）

2.3 肝癌組織Survivin與Livin表達的相關性分析

本實驗結果顯示，其中22例HCC標本中Survivin蛋白及Livin蛋白均為陽性，有6例HCC標本中兩者的表達均為陰性；Survivin陽性表達而Livin陰性表達的有19例，Livin陽性表達而Survivin陰性表達的13例。肝癌組織中Survivin和Livin的表達無相關性（P＞0.05）。

3 討論

IAP 家族包括 8 個成員：NAIP、XIAP、cIAP-1、cIAP-2、survivin、apollon、ILP-2和 livin。Survivin和 Livin是 IAP 家族中新發(fā)現(xiàn)的兩種蛋白，兩者都可以直接或間接抑caspase凋亡信號轉導過程中的起始分子caspase-9的活化、活性以及效應分子caspase-3/-7的活性而阻斷凋亡的發(fā)生過程[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在胃癌、胰腺癌、結腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達增加，并可促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展或遠處轉移[4]。Survivin在腫瘤組織中高表達、在癌旁組織中低表達，使其在HCC的診斷及評估預后中具有重要的參考價值。Livin是一種新發(fā)現(xiàn)的、特異性表達于人的胚胎組織、胎盤組織以及大多數(shù)人類實體瘤細胞的蛋白。在正常成人組織亦有所表達，如心臟、脾、卵巢、肺、腦、骨骼肌和淋巴細胞，但含量很低。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Livin蛋白在肺癌、膀胱癌、黑色素瘤等多種腫瘤中表達增加，同時該蛋白的高表達與腫瘤的分化程度、侵襲、轉移過程相關[5]。本實驗結果顯示，肝癌組織Survivin蛋白、Livin蛋白表達均高于相應癌旁肝組織，并在不同的組織分級及有無轉移組間表達均有明顯差異。提示Survivin蛋白、Livin蛋白的高表達與肝癌的侵襲和轉移密切相關。有實驗表明，用siRNA技術沉默Survivin與Livin基因表達，能夠抑制腫瘤的增殖并取得了一定的成效[6-7]。提示Survivin基因、Livin基因可做為候選癌基因在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用，并與腫瘤的侵襲、轉移過程密切相關。

本研究表明，Survivin與Livin表達無相關性，考慮兩者的上調機制有一定的差異，還需更深入、更具體的研究。或者，我們可以認為Survivin和Livin兩種基因在肝癌的診斷和治療中有單獨的作用。

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