COX-2與VEG F在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)及意義

陳麗艷 脫 晉 郭秀娟

遼寧省大連市婦產(chǎn)醫(yī)院急診科，遼寧大連 116033

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma）是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，自生育年齡至絕經(jīng)后均可發(fā)生，發(fā)病高峰在50～69歲，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[1]。子宮內(nèi)膜增生癥包括單純增生、復(fù)雜性增生及非典型增生，其與內(nèi)膜癌的發(fā)生關(guān)系密切。環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）屬于誘導(dǎo)型基因，一般只在誘導(dǎo)因子的作用下表達(dá)上調(diào)。大量研究證明血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）對內(nèi)皮細(xì)胞有促進(jìn)有絲分裂作用，并有促進(jìn)血管增生的能力。本研究通過檢測COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，探討二者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月1日～2011年9月1日大連市婦產(chǎn)醫(yī)院術(shù)后病理診斷為子宮內(nèi)膜癌的100例患者為研究對象。 患者年齡 28～75 歲，平均（53.1±7.4）歲；所有患者術(shù)前均未行化療、放療及內(nèi)分泌治療。取同時(shí)期子宮內(nèi)膜增生癥患者標(biāo)本90例為子宮內(nèi)膜增生癥組，其中單純性增生30例，復(fù)雜性增30例，不典型增生30例，患者年齡29～63歲，平均（51.3±8.2）歲。并取同時(shí)期因其他原因行全子宮切除術(shù)獲得的正常子宮內(nèi)膜增生期標(biāo)本30例作為對照組，年齡 45～65 歲，平均（55.2±4.5）歲。

1.2 主要試劑

鼠抗人COX-2單克隆抗體，鼠抗人VEGF單克隆抗體，PV9000 Immuno-Bridge+二步法免疫組化試劑盒及3，3'-二氨基聯(lián)苯胺顯色劑（DAB），以上試劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

每例標(biāo)本經(jīng)常規(guī)甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)組織切片成4 μm厚，按SP法試劑盒說明進(jìn)行免疫組化染色。

1.4 結(jié)果判定

COX-2與VEGF免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)主要位于細(xì)胞漿，呈棕黃色至棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，細(xì)胞無陽性反應(yīng)為陰性。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)采用高倍鏡（400×）下對每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞/視野，共計(jì)1 000個(gè)以百分率表示，陽性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性（-），陽性細(xì)胞數(shù)1%～10%微弱陽性（+），11%～50%為中度陽性（++），＞50%為強(qiáng)陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，等級資料采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2與VEGF在正常增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

COX-2在正常增生期子宮內(nèi)膜無表達(dá)，在VEGF中2例呈弱陽性（+）表達(dá)，陽性率為6.67%。

2.2 COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥中的表達(dá)

COX-2與VEGF在不典型增生及復(fù)雜性增生內(nèi)膜中的表達(dá)均明顯強(qiáng)于單純性增生，在不典型增生和復(fù)雜性增生的內(nèi)膜表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但它們在單純型增生、復(fù)雜型增生、不典型增生子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)逐漸增強(qiáng)（P ＜ 0.05）。 見表 1、2。

表1 COX-2在子宮內(nèi)膜增生癥的表達(dá)（n）

復(fù)雜性及不典型增生與單純性增生比較，P＜0.05；復(fù)雜性與不典型增生相比較，P＞0.05；3種組織類型間的表達(dá)率比較，P均＜0.05。

表2 VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥的表達(dá)（n）

復(fù)雜性及不典型增生與單純性增生比較，P＜0.05；復(fù)雜性與不典型增生相比較，P＞0.05；3種組織類型間的表達(dá)率比較，P均＜0.05。

2.3 COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

子宮內(nèi)膜癌組織中COX-2陽性染色不僅見于子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞的胞漿，而且見于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿，棕黃色顆粒彌漫分布于整個(gè)胞漿或沿核膜周邊呈線狀分布；VEGF表達(dá)于多數(shù)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞和少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿；COX-2在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)陽性率分別為0.0%、58.9%、88.0%，VEGF在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)陽性率分別為6.7%、66.7%、92.0%。COX-2與VEGF在三種組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 見表 3、4。

2.4 COX-2與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)通過Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

COX-2是前列腺素合成過程中的重要限速酶，COX-2是一種可誘導(dǎo)型酶具有促進(jìn)細(xì)胞增生、抑制細(xì)胞凋亡以及刺激新生血管的生成等多種功能[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在人的很多癌前病變和惡性腫瘤中高表達(dá)，并可能參與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移及分化[3-4]。正常情況下絕大部分組織細(xì)胞COX-2基因不表達(dá)，只有在細(xì)胞外廣泛的刺激作用下才誘導(dǎo)表達(dá)，如：炎性細(xì)胞因子、生長因子和促癌因素等均可誘導(dǎo)體內(nèi)組織產(chǎn)生COX-2。本研究顯示，COX-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜中無表達(dá)，這與眾多實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論相符。COX-2蛋白在子宮內(nèi)膜增生癥中有較高表達(dá)，與病理組織學(xué)類型有相關(guān)性，在單純性增生、復(fù)雜性增生與不典型增生之間比較有明顯差別，且COX-2在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜增生癥中的表達(dá)。提示COX-2的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜增生癥的形成及內(nèi)膜細(xì)胞的增殖密切相關(guān)，COX-2可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。

VEGF是一種對血管生長有極強(qiáng)誘導(dǎo)作用的因子，能特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，是目前所知的唯一作用于血管內(nèi)皮的生長因子。VEGF一個(gè)極其重要的生物學(xué)功能就是能增加血管通透性，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而促進(jìn)血管生成。VEGF在成年正常組織多呈低水平表達(dá)或不表達(dá)，血管的生成在正常生理狀態(tài)是被封閉的。Kawano Y等[5]發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)與增生期子宮內(nèi)膜的新血管生成呈正相關(guān)。Ancelin M等[6]發(fā)現(xiàn)VEGF（189）在細(xì)胞中的表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜水腫和不規(guī)則出血有相關(guān)性。據(jù)文獻(xiàn)[7]報(bào)道VEGF在子宮內(nèi)膜癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，能夠協(xié)同促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌血管形成，可提高子宮內(nèi)膜癌的侵襲能力，以及對預(yù)測子宮內(nèi)膜癌的組織病理學(xué)、臨床預(yù)后有價(jià)值。本研究提示，在正常子宮內(nèi)膜可見VEGF少量表達(dá)，與VEGF參與女性正常子宮內(nèi)膜增生期血管生成相符。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)量較正常子宮內(nèi)膜的表達(dá)明顯增高，且在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)明顯高于其他兩種組織類型。提示VEGF參與了子宮內(nèi)膜增生過長的血管生成及血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，VEGF與子宮內(nèi)膜癌血管生成有關(guān)，在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的連續(xù)過程中，VEGF表達(dá)呈進(jìn)行性升高，且與增殖密切相關(guān)。

COX-2與血管生成密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，COX-2的催化產(chǎn)物前列腺素E2（PEG-2）通過EP受體激活Her2/neu酪氨酸激酶信號通路及活化劑蛋白和轉(zhuǎn)錄激活因子促進(jìn)VEGF表達(dá)，VEGF反過來又能促進(jìn)COX-2的表達(dá)，其相互作用被某些因素（如炎癥）激發(fā)后，即可加速惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[8-9]新近國外有資料證實(shí)COX-2能夠上調(diào)VEGF表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，抑制COX-2則可抑制VEGF的表達(dá)[10]。COX-2可能通過產(chǎn)生前列腺素E調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，單一前列腺素E在體內(nèi)可刺激血管的生成，外源性前列腺素E可逆轉(zhuǎn)吲哚美辛引起的VEGF表達(dá)下調(diào)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌中COX-2表達(dá)與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)性，說明在子宮內(nèi)膜癌中COX-2表達(dá)與VEGF表達(dá)密切相關(guān)，COX-2可能通過促進(jìn)腫瘤血管形成來影響子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此COX-2抑制劑有可能成為治療子宮內(nèi)膜癌的新方法。近年來有關(guān)臨床研究表明，COX-2的表達(dá)多與預(yù)后不良有關(guān)。根據(jù)COX-2在不同子宮內(nèi)膜增生癥患者中的不同表達(dá)，來分析判斷患者的預(yù)后及向惡性疾病 （子宮內(nèi)膜癌）的發(fā)展趨勢。可根據(jù)COX-2在子宮內(nèi)膜癌患者中的不同表達(dá)，來分析判斷患者的預(yù)后及腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的趨勢。

表3 3種組織中COX-2的表達(dá)[n（%）]

表4 3種組織中VEGF的表達(dá)[n（%）]

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