高效液相色譜法測(cè)定塞來(lái)昔布中三氟乙酸殘留

于偉 雋海龍 王偉 史紅霞

高效液相色譜法測(cè)定塞來(lái)昔布中三氟乙酸殘留

于偉 雋海龍 王偉 史紅霞

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定塞來(lái)昔布中三氟乙酸的殘留含量。方法 色譜柱：采用Hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm, 流動(dòng)相：0.08%磷酸溶液(Ph 3.0)-甲醇(95:5),流速1.0 ml/min,柱溫：35℃。結(jié)果 三氟乙酸濃度在 2.05～12.12 μg/ml范圍內(nèi), 線性關(guān)系良好, r=0.9998;檢測(cè)限為 1.0 ng;加樣回收率平均為 98.57%, RSD 為 0.99%。結(jié)論 此法可用于塞來(lái)昔布中三氟乙酸含量的測(cè)定, 準(zhǔn)確度高。

塞來(lái)昔布；高效液相色譜法；三氟乙酸；含量測(cè)定

塞來(lái)昔布(4-［5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基］苯磺酰胺)是第一個(gè)在骨關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕病的治療中起作用的COX-2抑制劑［1,2］。這個(gè)藥與傳統(tǒng)的非類固醇性抗炎劑聯(lián)用時(shí)無(wú)通常的副作用。GD Searle研發(fā)出了塞來(lái)昔布, 目前市場(chǎng)上商品名為西樂(lè)葆。

在塞來(lái)昔布的合成工藝中, 一般以對(duì)甲基苯乙酮和三氟乙酸乙酯經(jīng)Claisen縮合反應(yīng)制得中間體, 然后與對(duì)苯磺酰胺基苯肼鹽酸鹽化合制得塞來(lái)昔布。由于三氟乙酸乙酯會(huì)水解生產(chǎn)三氟乙酸, 因此在塞來(lái)昔布原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中, 對(duì)三氟乙酸限量有明確要求, 進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定三氟乙酸不得超過(guò)0.04%。本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法(HPLC) 測(cè)定塞來(lái)昔布中三氟乙酸殘留的方法。

1 材料

塞來(lái)昔布, 江蘇正大清江制藥有限公司提供, 批號(hào): 20121029、 20121103、 20121109、 20121118；三氟乙酸對(duì)照品( 色譜純) , 美國(guó)天地試劑有限公司；甲醇( 色譜純) , 江蘇漢邦科技有限公司; 其余試劑均為市售分析純。美國(guó)Waters Alliance 2695 高效液相色譜儀, 2487紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器, Empower 2色譜工作站。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱: Hypersil ODS 柱( 4.6 mm × 250 m m, 5 μm) ; 流動(dòng)相: 0.08% 磷酸溶液( pH 3.0) - 甲醇( 95:5) ; 流速: 0.8 ml/min; 檢測(cè)波長(zhǎng): 210 nm; 柱溫: 35 ℃ ; 進(jìn)樣量: 20 μl。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 取三氟乙酸對(duì)照品適量, 精密稱定, 加流動(dòng)相溶解并制成每 1 ml 中含三氟乙酸10.1 μg的溶液, 作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的配制 取塞來(lái)昔布適量, 精密稱定, 加流動(dòng)相溶解并制成每 1 ml中含塞來(lái)昔布 25 mg 的溶液, 作為供試品溶液。

2.3 測(cè)定方法 精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μl,分別注入液相色譜儀。記錄色譜圖( 見(jiàn)圖 1) , 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中三氟乙酸的含量。

圖 1 塞來(lái)昔布中三氟乙酸測(cè)定的HPLC色譜圖

2.4 加樣回收率測(cè)定 用加樣回收法, 精密量取供試品溶液 250 mg, 置10 ml量瓶中, 加流動(dòng)相稀釋至刻度, 搖勻, 作為回收試驗(yàn)用空白溶液(濃度為25 mg/ml) ,另精密量取塞來(lái)昔布樣品250 mg分別用含三氟乙酸 8.08、10.10、12.12 μg/ ml的對(duì)照溶液溶解并定容到10 mL 量瓶中,釋至刻度, 搖勻,作為回收率測(cè)定溶液, 按2.3項(xiàng)方法分別測(cè)定, 并計(jì)算回收率,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。平均回收率為98.57%, RSD( n= 9) 為0.99%。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表

2.5 線性范圍 取三氟乙酸對(duì)照品適量, 精密稱定, 加流動(dòng)相溶解并分別稀釋制成、2.02、4.04、6.06、8.8、10.10、12.12 μg/ ml的溶液, 依次進(jìn)樣20 μl, 記錄色譜圖, 以峰面積(Y)為縱坐標(biāo), 濃度(X, g/ml) 為橫坐標(biāo), 進(jìn)行線性回 歸。回歸方程: Y = 958.75X-90.07, r=0.9998, 線性范圍為2.05～12.12 μg/ml。

2.6 精密度測(cè)定 取塞來(lái)昔布( 批號(hào)：20121029) 適量, 精密稱定, 加流動(dòng)相溶解并制成每 1 ml 中含塞來(lái)昔布25 mg的溶液,作為供試品溶液, 共配制 6 份, 按2.3項(xiàng)方法分別測(cè)定三氟乙酸的含量,均未檢出。

2.7 檢測(cè)限 取三氟乙酸對(duì)照品適量, 精密稱定, 加流動(dòng)相溶解并稀釋制成1.01 μg/ml 的溶液, 進(jìn)行測(cè)定, 信噪比 S/N=3,測(cè)得三氟乙酸的檢測(cè)限為1.0 ng。

2.8 塞來(lái)昔布中三氟乙酸含量測(cè)定取塞來(lái)昔布4批( 批號(hào): 20121029、 20121103、 20121109、 20121118) , 按 2.3 項(xiàng)方法測(cè)定三氟乙酸的含量, 結(jié)果均未檢出。

3 討論

目前三氟乙酸含量測(cè)定的方法多采用氣相色譜法［3］, 由于三氟乙酸的極性大, 酸性強(qiáng), 對(duì)氣相色譜柱損傷大, 分析成本較高, 且效果不是很理想。而用氧瓶燃燒法測(cè)定氟的含量［4,5］, 操作繁瑣且誤差較大, 且塞來(lái)昔布樣品本身含有氟元素干擾樣品檢測(cè)。另?yè)?jù)報(bào)道［6］, 也可考慮用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換色譜柱測(cè)定三氟乙酸的含量, 本文采用 C18色譜柱分離測(cè)定塞來(lái)昔布中三氟乙酸的含量, 方法簡(jiǎn)便, 準(zhǔn)確度高。在三氟乙酸對(duì)照品的配制過(guò)程中, 因三氟乙酸極易揮發(fā), 故在稱量過(guò)程中, 量瓶?jī)?nèi)應(yīng)先加入適量流動(dòng)相, 再加入三氟乙酸后需充分振搖, 使三氟乙酸充分溶解于流動(dòng)相中, 減量法稱樣比較準(zhǔn)確。

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中, 塞來(lái)昔布主峰未能洗脫出來(lái), 多次進(jìn)樣尚未發(fā)現(xiàn)其對(duì)三氟乙酸測(cè)定有干擾, 因此, 應(yīng)對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗后再保存。

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［3］ 孟靜娟,單風(fēng)平.氣相色譜法測(cè)定液相合成蛋酸腦啡肽中雜質(zhì)殘留量.微生物學(xué)雜志,2008,28( 3) : 106 -108.

［4］ 顏冬梅.人發(fā)中微量氟的測(cè)定.醫(yī)療保健器具, 2008, 15(9):74-75.

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Determination of trifluoroacetic acid in celecoxib by HPLC

YU Wei, JUAN Hai-long, WANG Wei, et al.Huaian City High-tech Business Center, Huaian 223001, China

Objective To establish a HPLC method for determination of the content of trifluor oacetic acid in celecoxib.Methods Hypersil ODS column(4.6 mm×250 mm, 5 μm) and 0.08% phosphoric acid so -lution( pH 3.0)-methanol( 95:5) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/ min were used with a column temperature of 35℃ and detection wavelength of 210 nm.Results The standardcurve of trifluoroacetic acid was linear in the range of 2.05～12.12 μg/ml, r= 0.9998.The detection limit was 1.0 ng.The average recovery rate of method was 98.57%, and RSD was 0.99% .Conclusion The method of content determination is practicable and accurate.It can be used for content determination of trifluoroacetic acid in celecoxib.

Celecoxib；HPLC；Trifluoroacetic acid; Content determination

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