ADD1基因多態性位點與豬肌內脂肪含量、嫩度及背膘厚的關聯性研究

李江凌 劉 銳 陳曉暉 龔建軍 趙素君謝 晶 廖黨金 何志平 高 榮 呂學斌

（1四川省畜牧科學研究院，四川成都 610066；2四川大學，四川成都 610000）

ADD1基因多態性位點與豬肌內脂肪含量、嫩度及背膘厚的關聯性研究

李江凌1劉 銳1陳曉暉1龔建軍1趙素君1謝 晶1廖黨金1何志平1高 榮2呂學斌1

（1四川省畜牧科學研究院，四川成都 610066；2四川大學，四川成都 610000）

將82頭藏豬和84頭其他品種豬屠宰后測定背膘厚，采集背部最長肌測定肌內脂肪含量和嫩度。采集血樣提取DNA，利用PCR-RFLP分析ADD1基因的基因型，發現藏豬和其他豬種中均能檢測到三種基因型AA、AB和BB。三種基因型的肌內脂肪含量和嫩度存在差異（P＜0.05），而背膘厚不存在差異（P＞0.05）。ADD1基因在藏豬和其他豬種中存在多態性位點，可以作為肌內脂肪選育的標記輔助選擇位點。

脂肪細胞定向和分化決定因子1（ADD1）；PCR-RFLP；肌內脂肪；藏豬

在過去的豬新品種選育中曾經把提高瘦肉率、提高生長速率作為主要目標，不過隨著瘦肉率提高、生長速度提高，導致肌肉脂肪含量下降，豬肉品質下降。而我國的一些地方豬種如藏豬等具有較高的肌內脂肪含量，豬肉品質較好，瘦肉率卻普遍較低。因此，目前與豬肉品質密切相關的肌內脂肪含量成為豬育種工作中關注的一個重點性狀。

肌內脂肪含量是一個遺傳力較高的性狀，但是在活體狀態時無法直接測定，常規的育種方法不能進行有效的選育。篩選與肌內脂肪含量相關的候選基因，進行標記輔助選擇是進行肌內脂肪含量有效選育方法。近年來對與肌內脂肪含量相關基因的研究較多，但研究結果不盡一致。脂肪細胞定向和分化因子1（ADD1） 基因又稱固醇調節元件結合蛋白 -1（sterol-regulatoryelement-binding protein-1SREBP1）基因，編碼脂肪細胞定向和分化因子1[1]。ADD1基因是脂肪細胞分化過程中一種重要的核轉錄因子，通過氧化物酶體增殖蛋白激活受體（PPARγ） 和CCAAT元件增強子結合蛋白（C/EBPs） 共同控制脂肪細胞的分化過程[2]，同時還直接參與調節與脂肪酸、甘油三酯和葡萄糖代謝相關的酶基因的表達[3]。已有的研究顯示，在正常的非脂肪組織，脂肪含量的穩定依賴于ADD1對脂肪合成的調控[4]。如果ADD1基因超水平表達，就可以使如肌肉、肝臟等非脂肪組織內脂肪細胞沉積。Kakuma（2000）等[5]發現ADD1基因高表達與肌肉、肝臟等非脂肪中脂肪沉積有著確定的關系。Soazig（2002） 等[6]的研究結果表明ADD1在脂肪細胞分化過程中發揮重要的作用。本試驗的目的是對ADD1基因的extron2進行多態性分析，研究82頭藏豬群體和84頭其他豬群體中基因的多態性與肌內脂肪含量、嫩度以及背膘厚之間的關系，為尋找合適的遺傳標記提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗動物為四川省畜牧科學研究院簡陽試驗基地82頭藏豬和84頭其他品種豬，采集血樣后屠宰，取背部最長肌3c m左右，一部分液氮中冷凍，-80℃保存，一部分-20℃保存。

1.2 肉質性狀測定

在右酮體胸腰結合處用游標卡尺測定背膘厚；采用索氏抽提法測定肌內脂肪含量。采用TAXTPlus嫩度儀測定嫩度。

1.3 基因多態性分析

采用TIANamp Genomic DNA試劑盒提取豬血樣D N A（天根生化科技有限公司）。

ADD1基因引物參照Gen Bank中豬的mRNA序列（序列號：DQ519396.1）設計，引物序列為：上游引物：5′-G C G A C G G T G C C T C T G G T A G T C A T-3′；下游引物：5′-C G C A A G A C G G C G G A T T T A C G G C A-3′。

ADD1基因PCR反應體系：2×Master Mix12.5μL， cDNA模 板0.5μL， Primer1(10μM)1μL，Primer 2(10μM)1μL， d d H2O 加 至25μL。PCR反應條件：94℃4分鐘；94℃30秒、55℃30秒、72℃30秒，28個循環；72℃延伸5分鐘。

PCR產物進行RFLP，用限制性內切酶HinfⅠ酶切后，3%瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果，凝膠成像系統觀察并記錄。

表1 ADD1基因基因型及基因頻率分布

表2 ADD1基因不同基因型的肉質性狀差異

1.4 數據分析

ADD1各基因型間肌內脂肪含量、嫩度和背膘厚差異采用S P S S 11.0進行單因子方差分析。

2 結果與分析

PCR擴增產物長度為220b p（圖1）。對PCR產物進行RFLP分析，發現該基因產生了3種基因型，純合子為1條泳帶，有兩種分別命名為AA，BB，雜合子有兩條泳帶命名為AB（圖2）。三種基因型在本研究所用的藏豬和其他豬種中均能檢測到（表1），說明在藏豬群和其他豬群中，ADD1基因存在多態性位點。在藏豬群體中B B基因型頻率最高，A B型次之，A A型最少，等位基因B出現頻率高于等位基因A出現頻率；而在其他豬群中，三種基因型的頻率相當，等位基因A和B的出現頻率相當。這一結果是否與藏豬的肌內脂肪含量高等優質性狀相關還有待于進一步研究。

進一步將所有的試驗組豬按基因型進行分類，比較了不同基因型間肉質性狀的差異（表2），發現基因型B B和基因型A B肌內脂肪含量顯著高于基因型A A（P<0.05），基因型B B嫩度顯著高于其他兩種基因型（P<0.05），而三種基因型的背膘厚無顯著差異（P>0.05）。ADD1基因不同基因型間背最長肌內脂肪含量、嫩度存在差異，而不同基因型的背膘厚卻沒有顯著差異，提示在該基因上發現的這個標記可能可以作為豬肌內脂肪選育的輔助標記。

[1] Edwards P A, Tabor D, Kast H R,et al. Regulation of gene expression by SREBP and SCAP. Biochimica et Biophysica Acta,2000,1529 (1-3):103-113.

[2] Fleischmann M, Iynedjian P B.Regulation of sterol regulatory-element binding protein 1 gene expression in liver:role of insulin and protein kinase B/ cAkt.Biochem J,2000,349:13-17.

[3] Kotzka J, Wieland D, Koponen A, et al. ADD1/ SREBP-1c mediates insulin -induced gene expression linked to the MAP kinase pathway [J] . Biochem Biophys Res Commun, 1998, 249 (2):375-379.

[4] Foretz M, Guichand P, Ferre P, et al.SREBP-1c is a major mrfiator of insulin action on the hepatic expression of gluckinase and lipogenesis related genes. Proc Natl Acad Sci USA,1999,(96):12737-12742

[5] Kakuma T,Lee Y, Higa M, et al.Leptin troglitazone, and the expressing of sterol regulatory element binding proteins in liver and pancreatic islets. Proc Natl Acad Sci USA,2000,(97):8536-8541

[6] SoazigL L, IsablleL,Christian T, et al.Insulin and sterol-regulatory elemenet-binding protein-1c (SREBP-1c)reregulation of gene expression in 3T3-L1 adipocytes. J Biol Chem, 2002, 277:35625-35634

S813.3

A

1673-4645（2013）06-0044-02

2013-06-07

四川省基本科研業務費專項資金項目SASA 2008B 01；四川省繁育專項S A S A 2009Y Z 001

李江凌（1972-），研究員，主要從事動物遺傳育種研究,e-ma i l：yujiang 1465@126.com

呂學斌（1965-），研究員，主要從事豬遺傳育種研究