糖尿病大鼠坐骨神經cAMP、cGMP、Na+-K+-ATP的變化及益氣活血通絡方的干預作用

李 光 張文風 于 海 馬金鈴 (長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

環磷酸腺苷(cAMP)、環磷酸鳥苷(cGMP)廣泛存在于動物機體各種組織中，cAMP不僅充當第二信使角色〔1〕，還具有多種調節功能。神經組織中cAMP、cGMP含量下降的同時Na+-K+-ATP酶活性也相應降低，神經的動作電位異常，傳導速度減慢。以往研究表明，益氣活血通絡方可以降低糖尿病(DM)大鼠血糖、提高其體重、坐骨神經傳導速度、改善血清胰島素、C肽以及抑制細胞凋亡等作用〔2～8〕。在前期研究基礎上，本文以大鼠坐骨神經cAMP、cGMP含量、Na+-K+-ATP活性的變化為觀察指標，探究其對神經軸突的再生和修復作用及機制。

1 材料與方法

1.1 模型的建立 選用雄性健康Wistar大鼠，體重(240±20)g。適應性飼喂1 w后，禁食12 h，將鏈脲佐菌素臨用配成2%濃度溶液，按劑量50 mg/kg左下腹腔內單次注射，72 h后取尾血測血糖，血糖≥16.7 mmol/L作為DM大鼠。適應性喂養3 d后將成模大鼠隨機分為3組，即模型組、中藥組、彌可保組，每組10只。并取體重、鼠齡相匹配的同批血糖值在正常范圍內正常大鼠10只作為正常對照組。連續觀察8 w后處死。

1.2 實驗設備 AnkeTDL-5-A型離心機(上海醫療器械有限公司)，GC-911-r-放射免疫計數器(中國科技大學實業總公司)，7225型分光光度計(上海第三分析儀器廠)。

1.3 藥品及試劑 益氣活血通絡方組成藥物(黃芪、桂枝、生地、水蛭)均購于長春市同仁堂藥房，長春中醫藥大學王淑敏教授鑒定，煎制成2 g/ml，置4℃冰箱保存備用。cAMP、cGMP放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術研究所，批號121020、121026)。Na+-K+-ATP酶測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:20121026)。

1.4 體重、血糖檢測 實驗結束前，稱其體重。取尾靜脈血檢測血糖。

1.5 大鼠坐骨神經cAMP、cGMP檢測 大鼠在麻醉狀態下，切開雙側股后部皮膚，分離出雙側坐骨神經。剪下后快速放入干冰中保存。在冰浴環境下，將坐骨神經放入盛有2 ml冷的0.05 mol/L醋酸緩沖液(pH4.75)的勻漿器內，將組織粉碎后，懸浮液倒入10 ml試管內，用2 ml無水乙醇洗勻漿器，然后將乙醇倒入懸浮液中混勻，靜止5 min，3 500 r/min離心15 min，將上清液收集在小瓶內，用2 ml 75%乙醇洗勻漿器和沉淀2次，混勻，3 500 r/min離心15 min，合并上清液，60℃水浴中吹干，殘渣放于4℃保存。嚴格按照試劑測定盒的要求檢測。

1.6 大鼠坐骨神經Na+-K+-ATP檢測 取兩側坐骨神經，生理鹽水洗凈后剪碎，加冷生理鹽水制成10%坐骨神經組織勻漿，3 500 r/min離心10 min，取上清液進行指標測定。嚴格按照試劑測定盒的要求檢測。

1.7 統計學分析 選用SPSS13.0軟件進行統計分析，各項實驗數據以±s表示，各組間樣本均數比較采用單因素方差分析，組間比較采用q檢驗。

2 結果

2.1 各組大鼠體重、血糖變化 與正常組比較，模型組、中藥組、彌可保組體重明顯降低，血糖明顯升高，差異顯著(P＜0.05);與模型組相比，中藥組動物的體重明顯升高，血糖明顯降低，差異顯著(P＜0.05);中藥組與彌可保組相比，體重明顯升高，血糖明顯降低，差異顯著(P＜0.05)。見表1。

表1 各組大鼠體重、血糖變化的比較(±s)

表1 各組大鼠體重、血糖變化的比較(±s)

與正常組比較:1)P＜0.05;與模型組比較:2)P＜0.05;與彌可保組比較:3)P＜0.05

組別 n 體重(kg) 血糖(mmol/L)正常組10 316.8±23.9 4.5 ±0.8模型組 7 197.2±20.51) 21.6±2.71)彌可保組 8 208.5±23.21) 20.1±3.21)中藥組 9 246.4±26.51)2)3) 15.1±2.61)2)3)

2.2 各組大鼠坐骨神經cAMP、cGMP、Na+-K+-ATP酶變化與正常組比較，模型組、中藥組、彌可保組cAMP、cGMP含量、Na+-K+-ATP酶活性明顯降低，差異顯著(P＜0.05);與模型組相比，中藥組動物的cAMP、cGMP含量明顯升高，Na+-K+-ATP酶活性明顯提高，差異顯著(P＜0.05);中藥組與彌可保組相比無顯著差異(P＞0.05)。見表2。

表2 各組大鼠cAMP、cGMP、Na+-K+-ATP變化的比較(±s)

表2 各組大鼠cAMP、cGMP、Na+-K+-ATP變化的比較(±s)

與正常組比較:1)P＜0.05;與模型組比較:2)P＜0.05

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3 討論

DM周圍神經病變是DM的重要并發癥之一，屬于中醫的痹證、痿證范疇。中醫認為，DPN是由于DM日久，氣陰兩虛、瘀血阻絡所致。益氣活血通絡法方由黃芪、桂枝、水蛭、生地組成，具有養陰益氣、活血化瘀之功。

cAMP、cGMP廣泛存在于動物機體的各種組織中。cAMP具有各種調節功能，神經組織中cAMP、cGMP含量下降的同時，Na+-K+-ATP酶的活性也降低，將影響神經的正常動作電位，使神經傳導速度減慢。cGMP信號的產生，是鳥苷酸環化酶(GC)催化的，其中的一類胞內可溶性環化酶與NO的傳導有關，NO有使血管舒張的作用〔9〕。

綜上，益氣活血通絡方能提高坐骨神經組織中 cAMP、cGMP含量、提高Na+-K+-ATP酶的活性，可能是其促進神經軸突的再生和修復作用及機制之一。

1 朱禧星.現代糖尿病〔M〕.上海:上海醫科大學出版社，2000:333.

2 張文風.益氣活血通絡方對糖尿病大鼠血清胰島素、C肽的影響〔J〕.湖南中醫雜志，2008;24(5):98-9.

3 張文風.益氣活血通絡方防治糖尿病周圍神經病變的實驗研究〔J〕.中醫藥信息，2008;25(6):24-5.

4 張文風，蘇 鑫，粟 栗.糖尿病大鼠坐骨神經AGEs的表達及益氣活血通絡方的干預研究〔J〕.上海中醫藥雜志，2010;3:25-6.

5 張文風，樸今哲，蘇 鑫，等.從血液流變學和神經傳導速度評價益氣活血通絡方對糖尿病周圍神經病變的干預作用〔J〕.時珍國醫國藥，2010;2:686-8.

6 李鐵成，張文風.糖尿病大鼠坐骨神經傳導速度與其超微結構的相關性及益氣活血通絡中藥的干預研究〔J〕.時珍國醫國藥，2010;7:1657-9.

7 張文風，鐘慧群，汪 勤.糖尿病大鼠坐骨神經細胞凋亡及其調控基因的表達及益氣活血通絡方的干預研究〔J〕.時珍國醫國藥，2011;4:1121-3.

8 鐘慧群，張文風，蘇 鑫，等.糖尿病大鼠糖化血清蛋白與AGES的相關性及中藥的干預作用〔J〕.時珍國醫國藥，2011;6:1453-5.

9 孫大業.細胞信號傳導〔M〕.第3版.北京:科技出版社，2003:124.