五藤痛風飲對大鼠急性痛風性關節炎模型的 IL-8、TNF-α 的影響

王曉璐 徐靜 李慧 郭慧 梁華

隨著我國經濟的發展人們飲食結構的改變，痛風已經由過去的罕見病變成了當今的常見病。痛風是嘌呤代謝紊亂所導致的疾病，其主要臨床特點為血尿酸增高及尿酸鹽沉積導致的痛風性關節炎反復發作、痛風石沉積、慢性間質性腎炎和尿酸腎結石形成［1］。痛風已經成為了當今世界中老年男性的常見病［2］，患病率呈逐年增高的趨勢［3］，并且出現了發病年齡低齡化的特點［4］。本實驗通過對急性痛風性關節炎大鼠模型關節液內IL-8、TNF-α水平變化的研究，探討五藤痛風飲治療痛風性關節炎的作用機制。

1 試驗過程

1.1 實驗動物 健康清潔級wistar大鼠60只，全部為雄性，體重為(200±20)g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司。實驗動物飼養環境：室溫20℃ ～22℃，空氣新鮮，自由攝食、飲水，飼固體飼料。分籠飼養。

1.2 實驗藥品 中藥組五藤痛風飲(忍冬藤、海風藤、雞血藤、絡石藤 、青風藤、穿山龍、秦艽、土茯苓、萆薢、威靈仙等組成。將藥物加水適量，煎制濃度為7.2 g/ml的水煎液)；西藥組秋水仙堿，配制成濃度為0.03 mg/ml的溶液。

1.3 試劑及設備 ①尿酸鈉溶液的制備取250 mg MSUC顆粒加入9 ml生理鹽水，1 ml吐溫80，加溫攪拌，制成濃度為25 mg/ml；②IL-8、TNF試劑盒；③0.9%氯化鈉注射液；④腺嘌呤制成10 mg/ml的乳濁液，現用現配。

1.4 實驗動物分組 將60只Wistar大鼠隨機分為6組，分別為空白組，關節炎模型組，中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組，西藥對照組，每組10只。每只均使用苦味酸染色標記。

1.5 實驗步驟 60只大鼠正常飼養一周后開始給藥，空白組常規飼養，中藥各組給藥：(7.2 g/ml、3.6 g/ml、1.8 g/ml)五藤痛風飲煎液+腺嘌呤各2 ml，西藥組給藥：秋水仙堿+腺嘌呤各2 ml，模型組給藥：9%生理鹽水+腺嘌呤各2 ml，空白組給藥：9%生理鹽水2 ml，均為灌胃給藥；第2、3、4天給藥同第一天；第5天灌胃給藥30 min后在各鼠右踝關節處，立即以碘酒消毒局部，用6號滅菌注射針在大鼠右側踝關節背側，從45°方向插入至脛跗關節腔內，注射0.2 ml MSU混懸液；第6、7天給藥同第5天。

1.6 取材 第7天給藥后30 min取材：10%水合氯醛麻醉，頸動脈取血，脫頸處死后取踝關節滑膜組織，制備血清和組織勻漿，-70℃保存待測。

2 試驗結果

五藤痛風飲對大鼠痛風性關節炎模型關節液TNF-α、IL-8含量影響：見表。

表1 各組藥物對關節液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

表1 各組藥物對關節液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

注：與模型組比較：▲P＜0.01

分組 n IL-8(pg/ml) TNF(pg/ml)空白 10 0.49±0.16▲ 0.54±0.07▲模型 10 2.49±0.35 2.14±0.50秋水仙堿 10 0.72±0.16▲ 0.87±0.11▲中藥高劑量 10 0.84±0.16▲ 0.95±0.14▲中藥中劑量 10 1.88±0.25▲ 1.31±0.26▲中藥低劑量10 2.27±0.38 1.84±0.36

對關節液中IL-8水平的影響：與空白組比較，模型組的IL-8水平有明顯升高(P＜0.01)，說明本次試驗造模成功；與模型組比較，秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的IL-8水平均有明顯下降(P＜0.01)，中藥低劑量組的無統計學意義(P＞0.05)；中藥高中兩個劑量組雖無顯著差異，但也存在著量效關系(高劑量＞中劑量)。對關節液中TNF-α水平的影響：與空白組比較，模型組的TNF-α水平明顯升高(P＜0.01)，說明本次試驗造模成功；與模型組比較，秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的TNF-α水平有明顯下降(P＜0.01)，中藥低劑量組無統計學意義(P＞0.05)；中藥高中兩個劑量組雖無顯著差異，但也存在著量效關系(高劑量＞中劑量)。

3 討論

現代醫學認為痛風急性發作其主要的病理改變是尿酸鈉晶體(MSUC)在關節周圍組織沉積引起急性炎癥反應。沉積在關節腔中的尿酸鹽結晶(MSU)被吞噬細胞、白細胞吞噬后，破壞細胞的溶酶體等細胞器，釋放出蛋白水解酶、激酶、組胺、趨化因子等物質，引起局部血管擴張和通透性增加、血漿滲出、水腫、發熱、白細胞聚集等炎癥反應，促使炎癥細胞釋放白細胞介素、腫瘤壞死因子等細胞因子，激活環氧化酶-2(COX-2)合成前列腺素類，導致炎癥范圍進一步擴大，進而發生急性痛風性關節炎［5］。總的來講，尿酸鹽在滑膜組織沉積并引起炎癥介質釋放是急性痛風性關節炎發作的基礎，PGE2、白細胞三烯 B4(LTB4)、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α 等是參與炎癥過程的重要因子。本實驗研究發現，五藤痛風飲對大鼠痛風性關節炎模型關節液TNF-α、IL-8的水平有明顯下調作用，由此推測五藤痛風飲在消除炎癥因子方面有一定的作用。總之，五藤痛風飲對大鼠痛風性關節炎發揮作的機制之一，可能與其降低TNF-α、IL-8的水平起到抗炎作用有關。

［1］ Richette P，Bardin T．Gout．Lancet，2010，375(9711)：318-328．

［2］ 南海榮．高尿酸血癥和痛風的遺傳學研究進展．國外醫學內分泌學分冊，2002，22(5)：326．

［3］ Kim KY，Ralph schumaeher H．Hunsehe E，et al．A literature review of the epidemiology and treatment of acute gout．Clin Ther，2003，25(6)：1593-1617．

［4］ Choi HK，Curhan G．Gout：epidemiology and lifestyle choices．Curr Opin Rheumato1．2005，17(3)：341-345．

［5］ Ponce L，Arjona M，Blanco G．The effect of montelukast in a model of gouty arthritis induced by sodium monourate crystals．Invest Clin，2011，52(1)：15．