CD68在胃癌組織中表達的意義及對腫瘤復發的影響

楊衛軍，楊 霞，尹家俊，王亞東，董浩林，吳正陽

（1.貴陽市第一人民醫院 普外科，貴州 貴陽550002；2.第三軍醫大學 免疫教研室，重慶400030；3.大連大學附屬中山醫院 普外科，遼寧 大連116001）

腫瘤組織內及其周圍浸潤的巨噬細胞稱作腫瘤相 關 巨 噬 細 胞 （tumor－associated macrophages，TAMs），以往認為在腫瘤內浸潤的巨噬細胞越多，腫瘤進展越慢，預后越好。近年來的研究表明，多種腫瘤內浸潤的腫瘤相關巨噬細胞是腫瘤病人預后不良的指標［1］。腫瘤相關巨噬細胞（TAMs）參與腫瘤發展的多個環節，并在促進血管和淋巴管生成過程中起重要作用［2］。目前關于腫瘤相關巨噬細胞在不同分期的胃癌中浸潤以及對胃癌術后復發率的影響的研究尚少，本研究采用免疫組化方法對52例胃癌組織進行CD68染色以檢測、比較腫瘤相關巨噬細胞在不同分期的胃癌組織的浸潤，并通過術后隨訪比較腫瘤三年內的腫瘤復發率，進一步了解腫瘤相關巨噬細胞對胃癌預后的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 胃癌組織標本取材于重慶腫瘤醫院2009年－2010年52例胃癌手術病人，年齡28歲－76歲，男性36例，女性16例。術前均未行放化療以及其他抗腫瘤治療。所有病人均行D2胃癌根治術，術后記錄病理類型、臨床分期、分化類型。所有病人術后均行XELOX方案化療6個周期。術后通過住院、門診復診以及電話聯系方式對病人隨訪3年。

1.1.2 CD68抗體免疫組化試劑盒購自abcam公司。

1.2 方法

取術后胃癌組織經10%甲醛固定，石蠟包埋切片。常規脫蠟至水，嚴格按試劑盒說明書操作，3%過氧化氫避光孵育10min消除內源性過氧化物酶；PBS沖洗，微波抗原修復10min，滴加血清工作液，室溫孵育15min封閉非特異性抗原；滴加一抗后置入冰盒4℃過夜。用PBS代替一抗作陰性對照。PBS洗3次，滴加二抗，室溫 孵育30min，PBS洗滌，滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15min，PBS洗滌，DAB顯色，蒸餾水終止，蘇木素復染，酒精梯度脫水、二甲苯透明，樹膠封片。

1.3 結果判定

CD68在巨噬細胞的胞漿內表達，胞漿含清晰的黃褐色或黃色顆粒狀者為陽性。觀察胃癌組織切片中TAM最密集的區域，選擇5個區域在400倍視野下計數并取其平均值即為該組織切片中的腫瘤相關巨噬細胞浸潤的數量［3，4］。取本組所有胃癌病人的TAM浸潤的中位數作為區分高密度和低密度的分界點［5］，將52例胃癌病人分為高密度組和低密度組。

1.4 統計學方法

應用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析，計量數據以±s表示，多組比較采用單因素方差分析；計數資料比較采用χ2檢驗及Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD68在胃癌組織中的表達情況

本組52例胃癌組織標本均見不同程度的CD68陽性表達，主要集中在胃癌間質內，即TAM主要在胃癌組織的間質中浸潤。52例標本TAM浸潤的范圍為70.28±29.34/HP，浸潤的密度為23－154/HP，平均70.3/HP，中位數63/HP。如圖1所示。

圖1 TAM在胃癌組織中的浸潤（CD68，×400）

2.2 不同 分期胃癌組織中 浸潤的比較

如表1所示，本組病例中TAM在Ⅰ－Ⅱ期共17例，TAM 浸潤的密度為41.02±8.47/HP；Ⅲ期28例，TAM 浸潤的密度為74.10±13.49/HP；Ⅳ期7例，TAM 浸潤的密度為126.10±13.35/HP。三者比較有明顯差異（P＜0.05）。

2.3 TAM在胃癌組織有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組中浸潤的比較

本組病例有13例標本無淋巴結轉移，TAM浸潤的密度為38.36±7.87/HP；而有淋巴結轉移者39例，TAM 浸潤的密度為81.78±25.68/HP，兩者比較有明顯差異（P＜0.05）。見表1。

表1 TAM在52例胃癌組織中浸潤情況

2.4 胃癌組織高密度TAM浸潤與低密度浸潤對胃癌術后復發率的影響

本組52例胃癌病人中，術后一年的總復發率為21.15%，術后二年累計復發率為42.31%，術后三年累計復發率為57.69%。以52例標本TAM浸潤密度的中位數63/HP為分界點，分為高密度組27例，低密度組25例，高密度組在術后1年、2年、3年的累計復發率明顯高于低密度組（P＜0.05）。如表2所示。

表2 胃癌組織中不同密度浸潤的TAM對術后累計復發率的影響

3 討論

腫瘤組織中浸潤的炎細胞以巨噬細胞為主，腫瘤組織中浸潤的腫瘤相關巨噬細胞曾被認為是機體的抗腫瘤免疫反應的表現。近年的研究認為腫瘤組織中浸潤的炎細胞可能促進腫瘤的發生、發展。有研究表明，高密度浸潤的腫瘤相關巨噬細胞與病人的不良預后相關［1］。宋宇峰等的研究［6］發現口腔鱗癌中浸潤的巨噬細胞較正常組織中明顯增多。但目前對惡性腫瘤組織內腫瘤相關巨噬細胞增多的機制尚不明了。

本次研究腫瘤相關巨噬細胞在不同TNM分期的胃癌組織中浸潤的密度上有明顯差異，腫瘤分期越晚其內浸潤的TAM密度越高。進一步提示胃癌組織中浸潤的TAM密度越高預示著胃癌的惡性程度越高，病人的腫瘤分期越晚，TAM參與了促進胃癌進展，TAM與胃癌病人不良預后相關。研究中發現，有淋巴結轉移組的TAM密度明顯高于無淋巴結轉移組，也說明了高密度的TAM在胃癌組織中浸潤能促進胃癌淋巴結的轉移。在對胃癌組織中浸潤的高密度TAM與低密度TAM對胃癌術后復發率的研究中發現，胃癌病人高密度組在術后一年、二年、三年的累計腫瘤復發率明顯高于低密度組。胃癌的術后復發率越高意味著病人術后生存率越短。這進一步說明胃癌組織中高密度浸潤的TAM能促進腫瘤的復發，高密度浸潤的TAM是胃癌病人預后不良的重要因素。

現有的研究表明，腫瘤相關巨噬細胞來源于外周血循環中的單核細胞，是在多種趨化因子的作用下遷移到腫瘤間質中然后分化為腫瘤相關巨噬細胞。巨噬細胞分為M1型和M2型。M1型巨噬細胞具有遞呈腫瘤抗原和吞噬腫瘤細胞等細胞毒性效應；M2型巨噬細胞可通過其復雜的自分泌、旁分泌途徑，在腫瘤的侵襲和轉移中發揮重要作用，與腫瘤的惡性增殖及凋亡密切相關［7］。Melichar［8］發現上皮性惡性卵巢癌病人的腹水中巨噬細胞與外周血中的巨噬細胞在表型與功能上不一致。馮紅超等的研究［9］提示在缺氧的環境下單核/巨噬細胞分泌的V EGF的能力增加，推測腫瘤相關巨噬細胞促進腫瘤的血管生成而更多地參與了腫瘤的生長和轉移。本次研究發現胃癌組織分期越晚其內浸潤的巨噬細胞越多，提示在胃癌分期晚者其內增多的巨噬細胞主要是M2型巨噬細胞，而這種對胃癌細胞喪失殺傷、吞噬功能的免疫細胞在腫瘤微環境中促進了胃癌的進展和轉移，最終導致胃癌病人術后的復發率增高。

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤，胃癌術后復發是病人最常見的致死原因。外科手術以及術后化療并不能明顯的有效降低病人的術后復發率和延長生存率。因此，揭示胃癌組織中腫瘤相關巨噬細胞浸潤的機制以及巨噬細胞表型轉化的機制，如何調控M1型巨噬細胞表型向M2型巨噬細胞的轉化以及抑制M2型巨噬細胞的功能，不但對延長胃癌病人的生存率和減少復發率有重要意義，也將為胃癌病人的免疫治療提供一個新的途徑。

［1］Takanami I，Takeuchi K，Kodaira S.Tumor－associated macrophage infiltration in pulmonary adenocarcinoma：association with angiogenesis and poor prognosis［J］.Oncology，1999，57（2）：138.

［2］Coffelt S B，Hughes R，Lewis C E.Tumor－associated macrophages effectors of angiogenesis and tumor p rogression［J］.Biochim Biophys Acta，2009，1796（1）：11.

［3］彭 娟，丁 童，鄭利民，等.腫瘤相關巨噬細胞對鼻咽癌進展和預后的影響［J］.癌癥，2006，25（11）：1340.

［4］Lindsay TH，Jonas BM，Sevcik MA，et al.Pancreatic cancer pain and its correlation with changes in tumor vasculature，macrophage infiltration，neuronal innervations，body weight and disease progression［J］.Pain，2005，119（1－3）：233.

［5］萬 挺，劉繼紅，鄭利民，等.腫瘤相關巨噬細胞在晚期上皮性卵巢癌組織中的浸潤及其與預后的關系［J］.癌癥，2009，28（3）：323.

［6］宋宇峰，馮紅超，溫玉明.口腔鱗狀細胞癌中巨噬細胞浸潤和腫瘤生長、轉移的關系［J］.中華口腔醫學雜志，2005，40（5）：385.

［7］Chen JJ，Lin YC，Yao PL，et al.Tumor－associated macrophages：the double－edged sword in cancer p rogression［J］.J Clin Oncol，2005，23（5）：953.

［8］Melichar B，Savary CA，Patenia R.Phenotype and antitumor activity of ascetic fluid monocytes in patients with ovarian carcinoma［J］.Int J Gynecol Cancer，2003，13（4）：435.

［9］馮紅超，彭江帆，馬 洪，等.口腔癌組織中缺氧微環境對單核/巨噬細胞分泌 V EGF影響的實驗研究［J］.重慶醫學，2010，39（17）：2244.