血清GPC3與AFP的檢測對原發性肝癌診斷意義比較

許 方，李曉蘭，吳小利

（1.大連醫科大學附屬二院 檢驗科，遼寧 大連116027；2.溫州醫學院研究生院，浙江 溫州325035）

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是發病率最高的惡性腫瘤之一，其發病率位于全球第4位，中國第2位［1］，也是我國癌癥導致死亡的主要原因。由于大多數患者被確診時已是中晚期，因此HCC的早期診斷非常重要。AFP是目前最常用的腫瘤標記物，但仍存在在分化程度好的HCC或退行發育的HCC可能僅有輕度或沒有升高，對于腫瘤直徑小于1cm的微小HCC的檢出率仍不高等問題。

GPC3是一種細胞膜表面的硫酸乙酰糖蛋白，它在絕大多數肝癌患者中表達，而在正常肝組織及良性肝臟病變中不表達或僅有微弱表達［2，3］。國外最新研究表明，GPC3可以作為一種新的肝癌腫瘤標志物用于臨床研究。本研究通過對肝癌及肝硬化患者GPC3及AFP的檢測，探討血清GPC3對肝癌患者的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇2010－2－1至2012－11－25到大連醫科大學附屬二院就診的肝癌患者（符合 年中國抗癌協會肝癌專業委員會指定的診斷標準）120例（其中男77例，年齡25－93歲；女43例，年齡23－81歲），肝硬化患者（符合2000年病毒性肝炎防治方案肝硬化的臨床診斷標準）32例（其中男19例，年齡33－79歲；女13例，年齡28－81歲）及正常對照組25例（其中男16例，年齡23－79；女9例，年齡38－79歲）。正常對照為排除各型肝炎及其他任何肝功能異常的健康體檢者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集、處理 采集靜脈血標本，分離血清，－20℃冷凍保存。

1.2.2 檢測 采用電化學發光法檢測標本AFP值，儀器為Elecsys2010電化學發光分析儀，試劑購自羅氏公司。ELISA方法測定標本GPC3值，試劑購自Uscn公司，嚴格按照試劑盒說明書操作，酶標檢測儀型號為美國ElX800NB。

1.2.3 統計學分析 采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，均值用±s表示，組間比較采用t檢驗和方差分析，P＜0.05表明差異有統計學意義。GPC3和AFP的相關性采用相關性分析。

2 結果

2.1 不同組別血清GPC3水平比較（表1）

肝癌患者血清中 GPC3值（22.014±36.930 ng/ml）高于肝硬化患者（8.590±8.171ng/ml）及正常對照（0.455±0.244ng/ml），HCC組 GPC3值與肝硬化組及正常對照組比較差異均有統計學意義（P＜0.01）。

表1 不同組別血清GPC3水平（±s）

表1 不同組別血清GPC3水平（±s）

＊P＜0.01，AFP與GPC3兩項數據HCC組與肝硬化組相比差異存在顯著性；＃P＜0.01，AFP與GPC3兩項數據HCC組與正常對照組相比差異存在顯著性；經相關性分析，GPC3與AFP二者的相關系數為－0.13，P值為0.15，P＞0.05，二者之間沒有相關性。

組別 例數 AFP（IU/ml） GPC3（ng/ml）HCC組 120 385.39±302.90＊＃ 22.014±36.930＊＃25 2.21±2.18 0.455±0.244肝硬化組 32 48.65±38.31 8.590±8.171正常對照組

2.2 GPC3、AFP單獨檢測和二者聯合檢測診斷HCC的敏感度和特異度比較（表2）

統計120例HCC組及32例肝硬化組，GPC3對肝癌診斷的敏感性略高于AFP，二者之間差異不存在顯著性（P＞0.05）；特異性則低于AFP，二者之間差異不存在顯著性（P＞0.05）；GPC3聯合AFP檢測HCC敏感性提高。

表2 GPC3、AFP和兩者聯合診斷HCC的敏感性和特異性比較

2.3 HCC組中GPC3在AFP陽性與陰性中的檢測結果（表3）

HCC組中，100例AFP陽性中有88例GPC3陽性，陽性率88.00%，20例AFP陰性中有15例GPC3陽性，陽性率75.00%。

表3 HCC組中GPC3在AFP陽性與陰性中的檢測結果

3 討論

1996年，Pilia等［4］發現一例過度生長綜合征的者存在x：1轉位，通過STSS－PCR得到分離克隆了一個cDNA，屬硫酸類肝素糖蛋白聚糖家族家族，命名為磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（Glypican－3，GPC3）。GPC3蛋白作為一種膜性間質蛋白，其表達方式與生長因子（如成纖維細胞生長因子等）及其受體表達方式一致，能通過一系列細胞表面受體傳導的信號來調節細胞形態和各種細胞行為如黏附、增殖、遷移、存活和分化。有研究證實其在肝細胞癌中的表達率為80%－100%，并且不依賴于肝細胞癌的分化和腫瘤大小，在肝腺瘤中無表達［5］。Yamauchi等［6］研究表明GPC3蛋白在肝癌組織中的高表達同基因水平相一致，在非肝癌組織中同樣沒有表達或表達量極低。Wang［7］等發現，約48%的高級別不典型增生結節或早期肝細胞癌GPC3陽性表達，3%的低級別不典型增生或良性結節陽性表達。

本實驗分析了25例正常人血清、32例肝硬化病人血清和120例原發性肝癌病人血清中的GPC3含量。結果表明：HCC組的GPC3明顯高于肝硬化組及正常對照組，說明GPC3對肝癌的診斷有一定意義。這一結果與許多國外學者的報道相吻合，如Hsu等［8］報道在154例肝癌組織中有74.8%檢測到GPC3mRNA，而在正常肝和肝炎組織中只有3.2% 能檢測得到。Hippo等［9］在肝癌病人血清中特異性地檢測到可溶GPC3（sGPC3），其表達量明顯高于肝硬化病人及健康對照組，且方法的敏感性優于AFP。Nakatsura等［10，11］應用酶聯免疫吸附方法發現40%－53%肝癌患者血清GPC3陽性，而在20例肝炎肝硬化患者血清中僅1例陽性，正常人血清中未檢測到。

在我們的研究中同時發現肝硬化組中有幾例GPC3＞20ng/ml，對此我們進行了病例追蹤，追蹤到1例患者屬于在采樣時診斷為肝硬化但后來確診為肝癌，提示檢測GPC3有助于肝癌的早期發現，對肝癌的早期診斷具有一定意義，值得引起臨床的高度重視。

本研究也同時進行了AFP的檢測，二者單獨檢測GPC3敏感性及特異性分別為85.83%、50%；AFP敏感性及特異性分別為83.33%、62.50%。即GPC3對肝癌的診斷敏感性要高于AFP，而特異性低于AFP，與一些學者的研究進行比較，發現我們的特異度偏低，而敏感度的結果與其相仿，如Coston等［12］檢測肝癌、肝腺癌、淋巴結增生患者和非肝癌的癌癥患者的GPC3的表達情況，發現在107例肝癌中有94例（84%）能夠得到GPC3的陽性染色。GPC3對原發性肝癌的靈敏度和特異性分別達到88%和97%。靈敏度方面的一致性充分證明了GPC3這一指標對肝癌診斷的價值。特異性方面的不同分析原因可能有以下幾點：首先因為我們采用的方法不同，多數學者采用PCR、免疫組化、病理技術及動物實驗方法，而本實驗采用ELISA方法；其次是ELISA試劑盒廠家不同，其檢測限、敏感性有所不同；另外在病例選取方面也存在差異，本研究在病例選取時多傾向于AFP較低或正常的患者，這些都有可能導致研究的結果的差異。

GPC3與AFP聯合檢測HCC的敏感性為95.83%，特異性為46.88%，敏感性有所提高，但在二者的相關分析中P＞0.05，顯示GPC3和AFP二者并無相關性，這也從另一個方面顯示出聯合檢測的價值，且與多數學者的研究結果是一致的。Tangkijvanich等［14］用免疫吸附測定血清GPC3，結果發現53%的肝癌患者血清GPC3的水平在35.5－7826.6 ng/l，發現GPC3和 AFP的陽性率水平不相關。apurro和 Filmus［15、16］分別比較分析肝癌病人血清中GPC3和AFP的表達，結果顯示在同一病人血清中兩者沒有相關性，認為兩者聯合檢測能夠顯著提高肝癌的早期診斷。

綜上我們認為，GPC3在肝癌的早期篩查診斷方面具有一定的臨床意義，而聯合檢測GPC3和AFP可提高肝癌診斷的敏感性，防止漏檢。

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