布氏菌病活疫苗的生產現狀與質量分析

王 楠，程君生，丁家波，蔣玉文，毛開榮

(中國獸醫藥品監察所，北京 100081)

布氏菌病(簡稱布病)是由布氏菌(Brucella)引起的一種人畜共患傳染病。近年來，我國布病疫情形勢嚴峻，對人體健康和畜牧業的發展造成了嚴重的危害［1－3］。目前，我國主要采取以預防為主的防疫措施，所以，布病疫苗產品質量優劣直接關系到全國布病疫情的有效控制。農業部高度重視布病類疫苗產品質量，每年安排并組織抽檢計劃，中國獸醫藥品監察所負責對該類產品實施監督檢驗。本文對布氏菌病活疫苗連續三年的生產現狀和監督檢驗結果進行了統計分析，以了解目前我國廣泛使用的布氏菌病活疫苗的質量狀況。

1 布氏菌病活疫苗生產現狀

目前，國內批準生產的布氏菌病活疫苗品種主要包括S2株、M5株和A19株。截至2012年7月，取得批準文號的企業共有14家，其中取得S2株疫苗批準文號的企業有13家，目前生產的企業有4家;取得M5株疫苗批準文號的企業有4家，目前生產的企業有2家;取得A19株疫苗批準文號的企業有6家，目前生產的企業有2家。

近三年，布病活疫苗總產量逐年增加，累計達到6．7億頭份。其中S2株疫苗的產量占總產量的94%，其產量增長也最快，2011年比2009年產量增加230%。結果見表1。

表1 2009-2011年布氏菌病活疫苗產量統計

2 布氏菌病活疫苗質量狀況

布氏菌病活疫苗質量標準依據《中國獸藥典》三部，其檢驗項目包括:性狀、純粹檢驗、變異檢驗、活菌計數、安全檢驗、剩余水分測定和真空度測定。活菌計數的結果是評價疫苗有效性的指標之一，所以布氏菌病活疫苗的以會檢形式開展的監督檢驗通常選取該項檢驗作為主要的檢驗項。從2010年到2012年，監督會檢的S2株疫苗活菌計數結果表明該項檢驗的合格率逐年上升，2012年已經達到了100%(表2)。

表2 2010-2012年布氏菌病活疫苗(S2株)活菌計數結果

為了能更全面的評價布氏菌病活疫苗質量，2012年的監督檢驗除了進行全項監督檢驗以外，還對疫苗菌株的純凈性、遺傳穩定性和種屬特異性進行了檢定。各項檢驗結果表明，抽檢的9批S2株疫苗和3批A19株疫苗的各項檢驗結果都符合規定，兩種疫苗菌株的純凈性、遺傳穩定性和種屬特異性也都符合菌種的特性。但是，抽檢的1批M5株疫苗的活菌計數結果不符合規定，而且該菌株的毒力檢定結果也顯示，該批次M5株毒力高達每克脾臟含菌量70萬個，明顯高于對生產用菌株每克脾臟含菌量應不超過20萬個的標準規定［4］(圖1)。

圖1 2012年布氏菌病活疫苗各批次生產用菌株毒力測定結果

3 布氏菌病活疫苗生產檢驗存在的問題及建議

3．1 生產工藝需進一步改進 疫苗的關鍵是質量可控，我國獸藥行業全面實行GMP管理以來，各生產企業產品質量不斷提高，抽檢合格率逐年提高［5－6］。但是，對于布病活疫苗仍然存在生產工藝落后影響疫苗質量的問題。一方面是培養基的成本較高且質量不穩定。布病疫苗傳統生產工藝中使用的肝湯培養基在很大程度上取決于動物來源的品質和消化處理的方式，而市售的干粉培養基不同企業和不同批次之間差異較大，成為布病疫苗生產過程中影響質量的最主要問題之一。另一方面是凍干保護劑保護效果不理想，疫苗的熱穩定性存在問題。實踐表明，現有工藝條件下，活菌數降低和有效期時間的延長呈正相關性。建議企業積極研發提高凍干保護劑的保護效果;同時，疫苗裝量應給予合理附加量、優化儲藏溫度并保證疫苗運輸過程中冷鏈存儲，最終確保活疫苗使用前的免疫效果不受影響。

3．2 生產企業檢驗能力需進一步提高 活菌計數檢驗項是控制疫苗質量的關鍵項。但是，會檢中發現各企業檢驗人員流動性大，新上崗檢驗能力不足，同一批次不同人員計數結果符合性差異很大。由于活菌計數時樣品的稀釋液的選擇、稀釋方法、操作熟練程度、滴板技巧等技術細節對計數的結果都會產生較大的影響。因此各企業有必要對活菌計數方法進一步細化，并加強對檢驗人員的技術培訓，避免由于檢驗技術不過關導致的疫苗質量不穩定。

3．3 開展布氏菌病活疫苗(M5株)的再評價工作

本次監督檢驗結果顯示布氏菌病活疫苗(M5株)的菌株毒力超過了標準規定的3倍。有研究結果顯示:M5株免疫后第16周仍能在小鼠脾臟內分離細菌，而S2株免疫后第6周在小鼠體內就已經分離不到活菌，M5株的毒力超過其他2個疫苗株［7］。由于2011年M5株疫苗僅生產8批，同時，監督檢驗受到抽檢批次的限制，雖然抽檢的1批疫苗不能充分說明疫苗毒株的穩定性有問題，但也給監管單位下一步的工作提供了一個方向，對M5株的安全性和質量可控性進行深入研究，掌握更多的關于M5株毒力的有關實驗數據。開展對布氏菌病活疫苗(M5株)的再評價工作將對布氏菌病活疫苗的安全使用和布病的防控工作提供有利的技術支持。

［1］ Seleem M N，Boyle S M，Sriranganathan N．Brucellosis:A reemerging zoonosis［J］．Veterinary Microbiology，2010，140(3/4):392－398．

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［3］ 崔步云．中國布魯氏菌病疫情監測與控制［J］．中國布魯氏菌病疫情監測與控制，2007，22(10):649 －651．

［4］ 中華人民共和國獸用生物制品規程［M］．二〇〇〇年版．北京:化學工業出版社．154－160．

［5］ 萬建青，王利永，姚文生，等．2008年度獸用生物制品質量監督抽檢質量分析及對策建議［J］．中國畜牧獸醫，2009，8:204 －207．

［6］ 高艷春，趙德明．我國獸用生物制品行業現狀分析與發展建議［J］．中國畜牧雜志，2011，47(2):55 －59．

［7］ 程君生，吳梅花，趙麗霞，等．三種布魯氏菌病疫苗株的毒力比較［J］．中國獸藥雜志，2012，47(9):13 －15．