蓽茇多糖提取與含量測定

烏云塔娜 齊明玉 劉 敏

1.內蒙古自治區興安盟科右中旗巴仁哲里木蘇木衛生院，內蒙古 興安盟 029425;2.內蒙古自治區國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010065;3.內蒙古神州硅業有限責任公司，內蒙古 呼和浩特 010070

1 實驗材料

1.1 實驗藥物

蓽茇 (piper Longum L)胡椒科植物蓽茇的干燥近成熟果穗)，均購自呼和浩特天力藥業，產地:海南省，批號:AA200072，

1.2 實驗試劑

乙醇:批號 20070115，常熟市晉陽遠化學有限公司。

乙醇丙酮:批號 0810201，汕頭市西隴化工廠。

乙醇苯酚:批號 0702072，汕頭市西隴化工廠。

硫酸:批號 200705063，萊陽市康德化學有限公司。

乙醚:天津化學試劑廠生產，批號:2D040512。

1.3 實驗儀器

LD5－2A低溫離心機，北京醫用離心機廠制造。T－500型電子天平，美國雙杰兄弟有限公司。AL－204型電子天平，上海梅特—托利多儀器有限公司。

KQ－250B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

210 型分光光度計，日本島津。

2 實驗方法

2.1 蓽茇多糖提取

①先蓽茇粉碎后過80目篩。

②800g蓽茇粉加8 000 mL蒸餾水，益煮3次，各煮0.5、1、1.5h，次濾布過濾。

③合并3次過濾液，濃縮原體積的1/10，得1 350 mL溶液。

④取300mL溶液加90%乙醇1 200 mL，攪拌后靜置24h。

⑤24h后過濾，棄去濾液，殘渣繼續以500mL蒸餾水溶解，再濃縮成25mL溶液。

⑥加入80%乙醇靜止12h后抽濾，無水乙醇沉淀、丙酮反復洗滌多次，60℃溫度干燥，得到白色無定形粉末3.04g。

2.2 蓽茇多糖含量測定

①葡萄糖標準溶液的配置:精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖50.2mg，用蒸餾水溶解并定容到500mL，即為100.4ug/mL的葡萄糖標準溶液。

②5%苯酚溶液的配置:精稱苯酚18.7g，加50mL蒸餾水溶解后的容量66mL，再加308 mL蒸餾水，置棕色瓶內放冰箱備用。

③標準曲線的繪制:精密量取葡萄糖標準溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、mL，分別加蒸餾水使成 2.0 mL，再分別加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻后再加濃H2SO45mL，充分搖勻，于室溫下放置5min，置水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。另以蒸餾水同上操作作為空白對照，在490nm處測定吸光度值，繪制標準曲線，建立回歸方程:A=0.0127C+0.0053(A為吸光度，C為濃度)，R2=0.9994。

④樣品溶液的配制:精密稱取蓽茇多糖22.2mg，加蒸餾水溶解后容量瓶中定容100ml，搖勻，濃度為222ug/ml。

⑤重現性實驗:對同一批樣品重復取樣5次，按樣品測定方法操作。

表1 重現性實驗

⑥精密度試驗:用樣品溶液在相同的條件下連續測定5次。這5次測定值的RSD為1.48%。

⑦回收率實驗:精密吸取樣品液0.2ml(5份)，分別精密加入0.4ml的葡萄糖標準溶液，再加蒸餾水使成2.0 mL，按測定標準曲線同樣方法測定吸光度值，按下公式計算回收率平均值。結果見表2。

回收率%=(測得重量－樣品重量)/標準重量

表2 回收率實驗

⑧蓽茇多糖含量測定:精密吸取樣品溶液0.2 mL，加蒸餾水使成1.0 mL，再加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻后再加濃H2SO45mL，充分搖勻，于室溫下放置5min，置水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。另以蒸餾水同上操作作為空白對照，在490nm處測定吸光度值。結果見表3。

表3 蓽撥多糖的含量

3 討論

3.1 實驗結果表明:蓽茇多糖含量為75.92%，回收率為99.43%。糖類含量測定法硫酸－苯酚法的原理是寡糖或多糖在濃硫酸的作用下水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛衍生物，在這種強酸性條件下與苯酚反應，生成橙色衍生物，該衍生物在490nm處和一定濃度范圍內吸收值和糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定單糖的含量，再根據單糖計算出多糖的含量。

3.2 多糖類化合物是多種植物藥中的有效成份之一，具有多種生物活性，目前多糖的研究不斷深入，而且不斷有新的多糖被發現，但蓽茇多糖還未見報道。本實驗首次蓽茇中提取出多糖，并對其含量進行了測定。

［1］國家藥典委員會編.中國藥典［M］.(2005年版一部)，北京:化學工業出版社，2005.

［2］國家藥典委員會編.中國藥典［M］.(2010年版一部)，中國醫藥科技出版社，2010，219.

［3］羅布桑等.蒙藥學，內蒙古:民族出版社，1989:189.

［4］黃泰康.常用中藥成份與藥理手冊［M］.北京:中國醫藥科技出版社，1994，1358.

［5］吳霞等，蓽茇化學成分研究 (Ⅰ)，中草藥，2008，39(2):178－180.

［6］白音夫，等.蓽茇對動物實驗性胃潰瘍的保護作用［J］.中草藥，1993，12:639.

［7］白音夫，等.蓽茇揮發油對動物實驗性胃潰瘍的保護作用［J］.中草藥，2000，(1):40－41.

［8］烏勒彩拉，等.蓽茇不皂化物降血脂作用的實驗研究［J］.中國民族醫藥雜志，2003，9(4):28－29.

［9］馬春杰等.蓽茇寧降血脂和急性毒性實驗研究［J］.中華中醫藥雜志，2008，4(4):321－324.

［10］肖培根.新編中藥志［M］.第2卷，第1版，北京化學工業出版社，2002，397－401.

［11］陰健.中藥現代研究與臨床應用［M］.第2卷，第1版，北京中醫古籍出版社，1995:252－256.

［12］張浩東.蓽茇揮發油對動物性實驗胃潰瘍的保護作用［J］.遼寧醫療，1997，5(2):15－18.

［13］海英、那生桑等.蓽茇胡椒堿致畸實驗研究［J］.世界科學技術－中醫藥現代化專題討論，2008，10(1):133－136.

［14］郭勝偉等.白參菌多糖的提取及含量測定 ［J］.時珍國醫國藥，2001，12(12):1065－1067.

［15］吳梧桐.《生物化學》第四版 (共藥學專業用)，人民衛生出版社.