康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮的含量測定

樊秦娥，吳立兵

康婦涌泉顆粒(批準文號:鄂藥制字Z2011148)是湖北醫藥學院附屬太和醫院研制的一種婦產科用口服顆粒劑，具有補氣養血、去瘀生新、通經下乳的功效。用于產后氣血虛弱、四肢無力、乳汁稀少或乳腺炎初期，乳腺脹痛，防治清宮后盆腔感染等癥［1］。康婦涌泉顆粒由黃芪、當歸、黨參、漏蘆、大棗、玄參、青皮、白芷、小通草、炒王不留行、蒲公英、甘草等12味中藥組成。漏蘆是佐藥，該藥物為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uni florum(L.)DC.的干燥根，味苦、寒、平，歸胃經。具有清熱解毒、消癰、下乳的作用，常用于乳癰腫痛、癰疽發背、癗癘瘡毒、乳汁不通、濕痹拘欒等癥［2］。其主要藥理活性成分為β-脫皮甾酮，由于受條件的限制，該制劑到目前為止尚無定量標準。為了提高該制劑質量標準，筆者參考相關文獻試驗對該制劑中各味藥物的主要藥理活性成分進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與材料

戴安UItiMate3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司);UP5200HE超聲震蕩儀(熊貓集團南京電子計量有限公司，500 W，50 Hz);分析天平(上海精科天平廠，FA2004，精度 0.000 1 g);β-脫皮甾酮對照品(中國食品藥品研究院提供，批號:111746-2013212);康婦涌泉顆粒(湖北醫藥學院附屬太和醫院制備，規格:15 g/袋，10袋/盒，批號:20130310、20130312、20130314)。超純水(湖北醫藥學院附屬太和醫院新鮮制備);甲醇為色譜純;冰醋酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［3-4］色譜柱:Diamonsil-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流 動 相:甲 醇-水(31∶69)，檢測波長 247 nm，流速 1.0 mL/min，進樣量10 μL，柱溫30 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取β-脫皮甾酮對照品適量，用60%甲醇溶解制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取康婦涌泉顆粒2.0 g，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入60%甲醇20 mL，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 精密吸取不含漏蘆的康婦涌泉顆粒2.0 g，按“2.2.2”項溶液的制備方法制備，即得。

2.3 系統適用性試驗 分別取“2.2”項下的各溶液，在“2.1”色譜條件下進樣，記錄色譜圖，結果對照品溶液、供試品溶液在同一時間有相同色譜峰出現，陰性樣品溶液在此處無色譜峰出現，樣品分離度良好，表明在該色譜條件下樣品中的其他成分對β-脫皮甾酮含量測定無干擾。見圖1。

2.4 線性方程的建立 取β-脫皮甾酮對照品用60%甲醇溶解，分別制成每1 mL含 β-脫皮甾酮5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μg 的系列溶液，分別在“2.1”色譜條件下進樣，以濃度為縱坐標、峰面積值為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y=0.093 7X+0.183 1，r=0.999 4，β-脫皮甾酮在5.0～160 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液，在“2.1”色譜條件下分別進樣5次，記錄峰面積值，結果RSD為0.74%，表明該儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

2.6 穩定性試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液，于0、3、6、12、24 h 分別取樣，在“2.1”色譜條件下進樣測定峰面積值，結果RSD為1.05%，說明β-脫皮甾酮對照品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗 精密稱取同一批號(201130310)的康婦涌泉顆粒樣品6份，每份2.0 g，按“2.2.2”項下供試品溶液的方法制備，在“2.1”色譜條件下進樣，測定峰面積值，結果RSD為1.22%。

2.8 回收率試驗 精密稱取同一批號(20130310)已測知含量的康婦涌泉顆粒1.0 g(含量70.0 μg/g)于100 mL圓底燒瓶中，共9份，3個樣品一組，分別精密加入“2.2.1”項下濃度為20.0 μg/mL 的 β-脫皮甾酮對照品溶液 1.0、2.0、3.0 mL，按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法制備，在“2.1”色譜條件下進樣，記錄峰面積值，按外標法計算β-脫皮甾酮回收率，結果見表1。

表1 康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮回收率試驗結果(n=6)

2.9 含量測定 取3批樣品，照“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，在“2.1”色譜條件分別測定峰面積，按外標法計算含量，結果見表2。

表2 康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮含量測定結果(n=3)

3 討論

康婦涌泉顆粒系由多種中藥組成的復方制劑，成分比較復雜，制備時經過煎煮、濃縮、干燥、制粒等過程，煎煮時不能保證所有藥理成分完全溶出，在濃縮、干燥過程中部分藥理成分可能被破壞等，因此，對其中相關成分進行檢測尤為重要。

β-脫皮甾酮在漏蘆中含量較低，本試驗參考2010年版中國藥典(一部)標準對其進行最低限量(≥0.04%)控制。取樣2 g用60%甲醇回流提取，目的是使樣品中所含β-脫皮甾酮能充分溶出。β-脫皮甾酮在60%甲醇中的溶解效果較好，故選用60%甲醇做溶劑。在選擇流動相時曾用乙腈-0.03%磷酸溶液(58∶42)為流動相，但分離度較差。后改用甲醇-水(39∶61)為流動相［5-6］，則檢出效果良好。該方法專屬性強，適用于康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮的質量控制。

［1］湖北省食品藥品監督管理局.湖北省醫療機構制劑質量匯編［Z］.2000年版:304-305.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:348.

［3］孫宇，卿德剛，張娟，等.鹿草根中 β-蛻皮甾酮的含量測定［J］.藥物分析雜志，2012，32(9):1614-1616.

［4］陳玉敏，曹紅，水彩紅.HPLC法測定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮的含量［J］.中國醫藥指南，2011，9(17):212-213.

［5］林大專，王廣樹，楊曉虹，等.牛膝中新脫皮甾酮類成分的研究［J］.中國藥學雜志，2006，41(17):1295-1297.

［6］李文莉，汪文濤，雷玉萍.RH-HPLC法測定脈絡寧注射液中脫皮甾酮的含量［J］.華西藥學雜志，2001，16(4):382-383.