襄麥冬不同極性部位粗提物抗氧化性能初步評價*

聶 倫，熊尚森，余海忠

(湖北文理學院化學工程與食品科學學院，湖北襄陽441053)

襄麥冬，即湖北麥冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.Var.Prolifera Y.T.Ma，為《中華人民共和國藥典》(1995年版、2000年版、2005年版和2010版)收錄的麥冬基原植物之一，已成為中藥麥冬的主流商品。此道地藥材因主產于湖北襄陽而俗稱為襄麥冬，國家質檢總局已于2008年發布53號公告批準對“襄麥冬”實施地理標志產品保護。研究表明，襄麥冬植物天然產物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表現，這對于防癌、抗癌、抗衰老、預防心血管疾病，提高人民身體健康具有積極的作用［1］。襄麥冬活性物質抗氧化性的研究目前尚未見報道，為了更加合理利用襄麥冬資源，本研究以蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等為溶劑，采用α－脫氧核糖法、鄰苯三酚自氧化法、鐵氰化鉀還原法、抗脂質過氧化試驗等方法，分別提取襄麥冬不同極性部位粗提物，并對其抗氧化性進行初步評價。

1 材料與方法

1.1 材料

襄麥冬，采自湖北襄陽歐廟襄麥冬規范化栽培基地。將其新鮮塊根洗凈瀝干后置于電熱恒溫鼓風干燥箱50℃烘干至恒重，切片，粉碎，置于密閉容器中待用。

鄰苯三酚、HCL、Tris堿、α －脫氧核糖、FESO4、EDTA、硫代巴比妥酸(TBA)、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、K3［Fe(CN)6］、三氯乙酸、FeCl3、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、KCl、10%卵黃懸液(1.15%的KCl溶液為溶劑)、十二烷基硫酸鈉均為分析純，購于國藥集團上海公司。FZ10型微型植物粉碎機(天津泰斯特);GZX－9030－MBE電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博訊);RE－52AA旋轉蒸發儀(上海亞榮);DKB－501A超級恒溫水槽(上海精宏);AL204電子分析天平(梅特勒－托利多);可調式微量移液槍(Finntte);UV－2550紫外－可見分光光度計(日本島津);LRH－250－Gb光照培養箱(廣東醫療)。

1.2 方法

1.2.1 襄麥冬活性物質的提取 分別稱取10 g樣品粉碎物，用100 mL蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷50℃恒溫水浴提取3 h，過濾，再分別向濾渣中加入100 mL上種溶劑50℃恒溫水浴提取3 h，過濾。再重復一遍上述操作。合并3次濾液，經減壓濃縮分別得到襄麥冬不同溶劑的提取浸膏，完全干燥后配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/mL溶液。

1.2.2 襄麥冬粗提物體外抗氧化活性測定

羥基自由基清除能力的評價方法:采用α－脫氧核糖法，取0.2 mL的FeSO4－EDTA混合液(10 mmol/L)于具塞試管中，加入0.2 mLα－脫氧核糖溶液(10 mmol/L)，然后加入1 mL樣品溶液，并用磷酸緩沖液(pH=7.4，0.1 mol/L)定容至1.8 mL，最后加入0.2 mL H2O2(10 mmol/L)，混勻后于37℃水浴中恒溫保持1 h;然后再加入2.8%(w/w)三氯乙酸(TCA)溶液1.0 mL、1.0%(w/w)硫代巴比妥酸(TBA)溶液1 mL，混勻后于沸水浴中加熱10 min，冷水冷卻后在532 nm處測定吸光值AS［2］。不加樣品溶液，同上操作處理，測定其對比吸光值AC。以不加樣品溶液且不在37℃水浴中反應作為參比。樣品的羥自由基清除能力可表示為:清除率(%)=［(1－AS)/AC］×100。

超氧陰離子自由基清除能力的評價方法:采用鄰苯三酚自氧化法，取4.5 mL pH 8.2的Tris－HCI緩沖液(50 mmol/L)于具塞試管中，加入3.2 mL蒸餾水、1 mL樣品溶液(空白管用蒸餾水代替)，混勻后在25℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入25℃預熱過的0.3 mL鄰苯三酚(3 mmol/L)，空白管用10 mmol/L HCl代替。迅速搖勻后倒入比色杯，在325 nm處每隔30 s測定吸光值，共測4 min，推遲30 s［3］。樣品的·O－2清除能力可表示為:清除率(%)=［(A0－A)/A0］×100(A=A1－A2)。其中，A0為鄰苯三酚自氧化速率;A1為加入樣品后鄰苯三酚自氧化速率;A2為樣品的吸光值。

還原能力評價方法:采用鐵氰化鉀還原法，取1 mL樣品溶液與2.5 mL pH 6.6的磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L)及2.5 mL 1%鐵氰化鉀溶液混合，50℃保溫20 min，加入2.5 mL 10%三氯乙酸，混勻，靜置10 min于700 nm處測吸光值［4］。以吸光值大小表示還原能力大小。

抗脂質過氧化作用評價方法:抗脂質過氧化作用采用卵黃過氧化體系［5］。在具塞試管中加入0.5 mL 10%的卵黃懸浮液和0.1 mL不同濃度浸提液，用蒸餾水補至1 mL，再加入1.5 mL 20%的醋酸溶液和1.5 mL 0.8%TBA溶液，用微型混合振動儀振蕩混合，加塞于95℃恒溫水浴中加熱60 min，流水冷卻至室溫，加入5.0 mL正丁醇，振蕩后，3 000 rpm離心10 min，取上層清液，以正丁醇為空白管調零，用紫外分光光度計測定532 nm處的吸光度A1。不加提取物的對照體系吸光度為A0，平行測定5次。按下式計算提取物對卵黃脂蛋白過氧化作用:抑制率(%)==(A0－A1)/A0×100。

2 結果與分析

2.1 羥基自由基清除能力的評價結果

采用α－脫氧核糖法評價襄麥冬不同極性部位粗提物清除·OH的能力，其原理為:Fe2+－EDTA+H2O2→Fe3+－EDTA+·OH+OH;·OH+α－脫氧核糖→氧化產物丙二醛;丙二醛+TBA(TCA)→粉紅色化合物。當反應體系中存在·OH清除劑時，·OH被部分清除，氧化產物丙二醛生成量減少，粉紅色化合物生成量減少，532 nm下吸收減弱［6］。因此，清除能力的大小可以通過粉紅色化合物生成量減少來表示。由圖1可知，襄麥冬不同極性部位粗提物均對Fenton體系產生的·OH有清除能力，且清除活性隨粗提物質量濃度的升高而逐漸增強。考察上述溶劑粗提物平均清除能力，則可以得出清除能力的大小順序為:乙醇粗提?。炯状即痔嵛铮疽宜嵋阴ゴ痔嵛铮救燃淄榇痔嵛铮臼兔汛痔嵛铮菊麴s水粗提物。其中，乙醇粗提取、甲醇粗提物及乙酸乙酯粗提物的清除能力相近，均超過60%。

圖1 襄麥冬不同極性部位粗提物的羥自由基清除能力Fig.1 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on hydroxyl radical-scavenging abilities

2.2 超氧陰離子自由基清除能力的評價結果

采用鄰苯三酚自氧化法評價襄麥冬不同極性部位粗提物對·O－2的清除能力，其原理如下:在堿性條件下(pH 8.2)，鄰苯三酚發生自氧化反應，生成超氧陰離子自由基(·O－2)和中間產物，該中間產物在325 nm處有一特征吸收峰。當加入自由基清除劑時，·O－2的生成受到抑制，自氧化過程受阻，中間產物生成減少，在325 nm處的吸收減弱［6］。因此，可以通過測定A325的變化，推測襄麥冬不同極性部位粗提物對·O－2的清除能力。由圖2可知，不同粗提物均對·O－2有一定的清除能力，除了三氯甲烷粗提物外，清除能力隨粗提物質量濃度的升高而逐漸增強，但清除率普遍不高。在濃度為1.6 mg/mL時，最大清除率也不到40%(甲醇粗提物)。

圖2 襄麥冬不同極性部位粗提物的超氧陰離子自由基清除能力Fig.2 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on superoxide anion radical-scavenging abilities

2.3 還原能力評價結果

采用鐵氰化鉀還原法評價襄麥冬不同極性部位粗提物的還原能力，其原理為:當體系中存在還原性物質時，鐵氰化鉀被還原成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀在酸性條件下與三氯化鐵反應，生成普魯士藍，在700 nm波長處有最大吸收峰。故吸光值越大，表示待測物質的還原能力越強［6］。由圖3可知，襄麥冬不同極性部位粗提物平均還原能力大小排序為:甲醇粗提物＞三氯甲烷粗提物＞乙醇粗提?。疽宜嵋阴ゴ痔嵛铮菊麴s水粗提物＞石油醚粗提物。

圖3 襄麥冬不同極性部位粗提物的還原能力Fig.3 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on reducing abilities

2.4 抗脂質過氧化作用評價結果

試驗結果表明，襄麥冬不同極性部位粗提物均表現出較強的抗脂質過氧化作用，且均隨質量濃度升高而增強。其作用強度順序為:三氯甲烷粗提物＞石油醚粗提物＞乙酸乙酯粗提物＞蒸餾水粗提物＞甲醇粗提物＞乙醇粗提取(圖4)，且平均抑制率均超過55%，三氯甲烷粗提物達到91.21%。

圖4 襄麥冬不同極性部位粗提物抗脂質過氧化作用Fig.4 Anti lipid peroxidation effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera

3 結論

本文采用α－脫氧核糖法、鄰苯三酚自氧化法、鐵氰化鉀還原法、抗脂質過氧化試驗4種國內外常用的體外抗氧化活性檢測方法，對鄂西北產道地藥材襄麥冬的蒸餾水、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷粗提物的抗氧化性進行了化學評價，結果表明，襄麥冬不同極性部位粗提物均具有一定抗氧化性，而且在試驗質量濃度范圍內呈明顯量效關系。襄麥冬是一種藥食兼用的中藥植物，其塊根目前廣泛應用到保健品、食品的開發中。因此，除了對·O－2清除能力偏低(不到40%)外，襄麥冬粗提物·OH的清除活性、還原能力及抗脂質過氧化作用在今后食品生產與保存中的應用值得期待。

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