富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代魚粉對羅非魚生產性能及免疫功能的影響

山東寶來利來生物工程股份有限公司 李曉穎 王 靜 谷 巍

抗菌肽是生物體免疫系統產生的一類抵抗外界病原體感染的小分子肽類物質，具有非特異性的抗菌、抗病毒等作用，且不破壞正常細胞。本試驗以高產抗菌肽的乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕添加到羅非魚日糧中，部分替代魚粉，研究富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代魚粉對羅非魚生長性能及免疫功能的影響，為植物發(fā)酵蛋白在水產飼料中的應用提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 抗菌肽發(fā)酵豆粕：為產抗菌肽乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕，由山東寶來利來生物工程股份有限公司提供。

1.2 試驗設計 選取平均體重為（56.0±0.56）g的健康羅非魚240條，隨機分成4組，每組3個重復，每個重復20條，馴養(yǎng)10 d。對照組飼喂基礎日糧，試驗基礎日料參照NRC魚類營養(yǎng)需要，以全魚粉作為蛋白源，配制羅非魚配合日糧。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別用20%、40%、60%富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代基礎日糧中等量的魚粉。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗羅非魚飼養(yǎng)在室內水族箱內，按體重的3%投喂飼料，每天2次，投飼時間為 09∶00和17∶00， 投飼后2 h撈取剩余飼料，烘干，稱重。試驗期為40 d。試驗期間每天記錄羅非魚的攝食量和死亡魚數量，試驗結束后尾椎靜脈采血，4000 r/min，離心15 min，分離血清。測定血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、溶菌酶（LZM）含量。

1.4 統計分析 試驗數據采用SPSS13.0軟件進行單因子方差分析，用LSD進行組間多重比較，試驗結果均以“平均數±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚生產性能的影響由表1可知，在試驗開始時，各試驗組平均體重差異均不明顯，10日齡時，與對照組相比，試驗Ⅰ組的平均日采食量和平均日增重分別降低2.95%和3.73%，但差異均不顯著（P＞0.05）；試驗Ⅰ組餌料系數比對照組提高1.14%，但差異不顯著（P＞0.05）；與試驗Ⅰ組和對照組相比，試驗Ⅱ組和Ⅲ組日增重、日采食量均顯著降低，餌料系數顯著升高（P＜0.05）；試驗Ⅱ組日增重和日采食量均顯著高于試驗Ⅲ組（P＜0.05）。這說明在日糧中用抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚粉是可行的，但是高劑量添加會影響羅非魚的生長。

表1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚生產性能的影響

20日齡時，各組的初始體重雖然差異不顯著，但是對照組和試驗Ⅰ組的體重均高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組，與試驗Ⅰ組和對照組相比，試驗Ⅱ組、Ⅲ組，平均日增重和平均日采食量顯著降低，試驗Ⅱ組和Ⅲ組的餌料系數均顯著高于試驗Ⅰ組和對照組（P＜0.05）。試驗Ⅱ組平均日增重和平均日采食量與試驗Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05）。

30日齡時，對照組與試驗Ⅰ組的初始體重差異不顯著，但均顯著高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組 （P＜0.05）；試驗結束時，對照組和試驗Ⅰ組的日增重和餌料系數差異均不顯著（P>0.05），但均與試驗Ⅱ組和Ⅲ組差異顯著（P＜0.05）；試驗Ⅱ組的平均日增重和平均日采食量與試驗Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），分別較試驗Ⅲ組提高18.25%和9.27%。通過比較不同添加水平抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚不同生長階段生長性能的影響可以看出，抗菌肽發(fā)酵豆粕在飼料中替代魚粉是可行的，但高劑量的添加對羅非魚生長發(fā)育具有明顯的抑制作用。

2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清生化指標的影響

2.2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清TP、ALB含量的影響 由圖1可知，試驗Ⅰ組TP含量比對照組提高1.58%，但差異不顯著（P＞0.05），而試驗Ⅱ組、Ⅲ組的TP含量分別比對照組降低5.66%（P＞0.05）和10.46%（P＜0.05）。試驗Ⅰ組ALB含量最高，比對照組高10.54%，差異顯著（P＜0.05）；試驗Ⅱ組、Ⅲ組的ALB含量與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05），但均顯著低于試驗Ⅰ組。

由圖2可知，隨著日齡的增加各試驗組的TP、ALB含量均有所增加，但各組間TP、ALB含量差異均不明顯，其中，試驗Ⅰ組TP、ALB含量最高，分別比對照組提高1.2%和0.77%。

由圖3可知，到試驗結束時，各試驗組間TP、ALB含量差異均不顯著，試驗Ⅰ組的TP、ALB的含量最高，分別比對照組提高0.29%和0.38%。

2.2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對羅非魚血清LZM含量的影響 由圖4可知，對照組和試驗Ⅰ組LZM含量呈現逐漸遞增趨勢，而試驗Ⅱ組、Ⅲ組含量呈現遞減趨勢，在試驗前期對照組LZM含量最低，各試驗組LZM含量均高于對照組。其中，試驗Ⅱ組LZM含量最高，較對照組提高20.81%，各組間差異均顯著（P＜0.05）；隨著日齡的增加對照組和試驗Ⅰ組LZM含量逐漸增加，試驗Ⅱ組、Ⅲ組逐漸降低，到試驗結束時，試驗Ⅰ組含量最高，比對照組提高4.59%，差異不顯著（P>0.05），但顯著高于試驗Ⅱ組、Ⅲ組（P＜0.05）。

3 討論

抗菌肽作為飼料添加劑，已在畜牧生產中廣泛應用。宋理平等（2010）研究發(fā)現，在凡納濱對蝦的飼料中添加重組抗菌肽制劑，可使其攝食量增加，相對增重率顯著提高。王阿榮等（2011）研究表明，抗菌肽能提高斷奶仔豬的生長性能和免疫功能。黃永彤等（2004）研究報道，抗菌肽在代替抗生素防治肉雞病害方面有明顯效果，并對多種細菌有較明顯的殺滅作用。

豆粕的蛋白質含量為42%～45%，且必需氨基酸含量、氨基酸構成比例以及消化率均優(yōu)于其他植物性餅粕類原料，經過微生物發(fā)酵處理的豆粕，營養(yǎng)素水平有所提高，并可獲得有益微生物，同時抗營養(yǎng)因子水平顯著降低。盡管發(fā)酵豆粕有效能含量和氨基酸水平不及魚粉，但大量飼養(yǎng)試驗表明，發(fā)酵豆粕替代全部或部分魚粉不會影響動物的生產性能和健康水平（劉勇，2009；Refstie 等，2005）。

本試驗結果表明，在飼料中適量添加含有抗菌肽成分的發(fā)酵豆粕代替魚粉，能促進羅非魚的生長發(fā)育、提高采食量及降低餌料系數，但值得注意的是，添加中、高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕會嚴重影響羅非魚的生長性能，原因可能是乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕替代魚粉，影響了飼料適口性及氨基酸組成。高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚粉時，影響作用更為明顯。此外，陳曉生等（2006）研究表明，添加高劑量抗菌肽可能會抑制腸道有益菌的生長。

通過測定不同組別的血液指標，可以看出在整個試驗過程中，低劑量替代組即試驗Ⅰ組TP、ALB含量均最高，但與其他各組均無顯著差異。一定濃度范圍內的發(fā)酵豆粕對羅非魚血清TP、ALB含量無顯著影響，這表明，羅非魚具有自身穩(wěn)定調節(jié)系統，可以保持血清TP、ALB含量處在穩(wěn)定狀態(tài)。

LZM是機體非特異性免疫功能的重要體液因素，在試驗前期試驗Ⅱ組、Ⅲ組的含量高于對照組和試驗Ⅰ組，說明高劑量替代能顯著增加血清中LZM含量，但是隨著日齡的增加，這兩組LZM含量明顯下降，原因可能是試驗Ⅱ組、Ⅲ組羅非魚在后期采食量下降影響了免疫功能。姜珊等（2011）研究報道，高劑量的抗菌肽對肝臟組織有一定的破壞性作用。LZM含量的下降，可能與該因素也有一定的關系，有待進一步驗證。

劉勇（2009）研究表明，鮮雜魚-豆粕替代奧尼羅非魚幼魚飼料中2／3魚粉 （占飼料6%），不影響機體生長性能。在本試驗中，抗菌肽發(fā)酵豆粕替代20%魚粉（占飼料5.4%），對羅非魚的生長性能影響不大，進一步說明抗菌肽發(fā)酵豆粕代替魚粉的適宜比例與品種和生長階段等有一定關系。本試驗結果證實，富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代20%的魚粉（占飼料5.4%），對羅非魚生長性能及血清免疫指標具有促進和增強作用。

[1]陳曉生，張輝華，周慶國，等.抗菌肽對肉鴨雛鴨期腸道主要微生物菌落的影響[J].獸藥與飼料添加劑，2006，11（4）：1 ～ 2.

[2]黃永彤，黃自然，黃建清，等.抗菌肽與抗生素飼喂肉雞的效果比較[J].廣東飼料，2004，13（2）：21 ～ 24.

[3]姜珊，王寶杰，劉梅，等.飼料中添加重組抗菌肽對吉富羅非魚生長性能及免疫性能的影響[J].中國水產科學，2011，18（6）：308 ～ 314.

[4]劉勇.黑鯛、奧尼羅非魚飼料中不同蛋白源替代魚粉的研究：[碩士學位論文][D].上海：上海海洋大學，2009.

[5]宋理平，胡斌，王愛英，等.抗菌肽對凡納濱對蝦生長和機體免疫的影響[J].廣東海洋大學學報，2010，30（3）：28 ～ 32.

[6]王阿榮，敖長金，宋青龍，等.日糧中添加天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生產性能和血液生化指標的影響[J].飼料工業(yè)，2011，32（10）：24 ～ 25.

[7]Refstie S，Sahlstrom S，Brathen E，et al.Lactic acid fermentation eliminates indigestible carbohydrates and anti-nutritional factors in soybean meal for Atlantic salmon（Salmo salar）[J].Aquaculture，2005，464：331 ～ 345.