高效液相色譜法測定更年安舒顆粒中松果菊苷含量

董政起，高 軍，陳 昕，程東巖*

(1.中國醫學科學院藥用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012；3.長春中醫藥大學，吉林 長春 130022)

·實驗研究·

高效液相色譜法測定更年安舒顆粒中松果菊苷含量

董政起1，高 軍2，陳 昕3，程東巖2*

(1.中國醫學科學院藥用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012；3.長春中醫藥大學，吉林 長春 130022)

目的：建立更年安舒顆粒中松果菊苷的高效液相色譜(HPLC)測定方法。方法：色譜柱采用shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相采用甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22：78)為流動相；檢測波長為330nm；柱溫為30 ℃；流速為1mL/min。結果：松果菊苷在0.080～1.286μg范圍內線性關系良好，相關系數為0.999 8，平均回收率為99.2%，RSD=1.85%(n=6)。結論：HPLC測定方法簡便，結果準確，可用于更年安舒顆粒的質量控制。

更年安舒顆粒；松果菊苷；高效液相色譜法(HPLC)；質量控制

更年安舒顆粒是中國醫學科學院研制的中藥復方顆粒劑，由肉蓯蓉、女貞子等5味中藥組成,具有益腎補陰，清心開郁之功效，適用于以陰虛內熱為主所致的女性更年期綜合征。松果菊苷為君藥肉蓯蓉中主要有效成分，具有抗氧化、保護神經、保護肝臟、抗炎、抗腫瘤、改善學習記憶以及免疫調節等作用[1-3]。本文以松果菊苷為指標性成分，以高效液相色譜法建立更年安舒顆粒的質量控制方法，控制產品質量，保證臨床療效。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器；松果菊苷對照品(為中國藥品生物制品檢定所提供；更年安舒顆粒自制(批號:120608、120813、120818、120824)，規格5g/袋；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取松果菊苷對照品適量，置容量瓶中，加50%甲醇，制成每1mL含50μg松果菊苷的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液 精密稱取0.3g本品(裝量差異項下),研細，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇至刻度，稱重，超聲處理30min，放冷，以50%甲醇補足再次稱重時所減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)為流動相；檢測波長：330nm；柱溫：30 ℃；流速：1mL/min；進樣體積：10μL。松果菊苷峰與更年安舒顆粒中其他組分分離完全，且分離度大于1.5，理論板數按松果菊苷峰計算應不低于3 000。

2.3 干擾試驗 按比例從處方中去除肉蓯蓉,按2.1.2項下制備成肉蓯蓉的陰性對照樣品。取供試品溶液、陰性對照樣品溶液及對照品溶液各10μL，按2.2項下色譜條件進樣測定。結果顯示，在松果菊苷色譜峰相應位置，陰性對照樣品溶液無吸收峰，故確定處方中其他藥味對測定無干擾。

2.4 線性關系的考察 精密稱取松果菊苷對照品4.02mg，加50%甲醇溶解并稀釋定容至10mL，作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mL,分別置5mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列對照品溶液。分別吸取上述6份對照品溶液各10μL，按2.2項下色譜條件進樣測定。以峰面積積分值為縱坐標，松果菊苷的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=-22 688+1 542 263X,r=0.999 8，在0.080～1.286μg范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，按選定色譜條件進樣測定,連續進樣6次。結果顯示，松果菊苷峰面積的RSD為0.91%(n=6)，故儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于配制后0、4、8、12、24h按選定色譜條件進樣測定，測得松果菊苷峰面積的RSD為1.43%(n=6)，故溶液穩定性良好。

2.7 重復性試驗 從同一批號樣品(批號：120608)中，精密稱取6份，按2.1.2項下方法制備并按選定色譜條件進樣測定，測得松果菊苷平均含量為42.69mg/袋，RSD=1.67%(n=6)。

2.8 中間精密度試驗 按2.1.2項下方法取同一批號樣品(批號：120608)6份，于不同日期，由不同分析人員，在不同設備上，按選定色譜條件進樣測定，結果顯示松果菊苷平均含量為42.04mg/袋，RSD=1.63%(n=6)。

2.9 加樣回收率試驗 采用加標回收方法，精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號：120608，含松果菊苷8.483mg/g)約0.3g共6份，分別精密加入松果菊苷對照品(2.67，2.61，2.52，2.72，2.70，2.64mg)，按2.1.2項下及2.2項下方法進行配置和測定松果菊苷含量。結果顯示，平均回收率為99.2%,RSD=1.85%(n=6)。具體結果見表1。

表1 松果菊苷回收率測定結果

根據上述測定結果可知，該方法平均回收率達99.2%，且RSD小于3%，故認為用此方法測定制劑中松果菊苷含量完全可行。

2.10 樣品測定 分別取4個批號的樣品(批號分別為120608、120813、120818、120824),按2.1.2項下方法制成供試品溶液。再精密吸取10μL對照品溶液及供試品溶液，按上述選定色譜條件測定，計算樣品中松果菊苷含量，結果4批樣品的含量分別為42.59、36.40、53.25、40.35(mg/袋)(n=3)。

2.11 耐用性試驗

2.11.1 不同品牌色譜柱 精密稱取同一批號樣品(批號：100608)，制成供試品溶液，分別采用3種色譜柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm);AlltimaTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，進樣測定,計算松果菊苷含量。結果表明3種色譜柱測定樣品均能達到良好分離，精密度良好。

2.11.2 柱溫 精密稱取同一批號樣品(批號：100608)，制成供試品溶液，分別于柱溫30、35 ℃按選定色譜條件進樣測定，結果表明柱溫變化不能引起測定結果較大變化。

2.11.3 流速 精密稱取同一批號樣品(批號：100608)，制成供試品溶液，依選定色譜方法分別用流速0.8、1.0、1.2mL/min進行測定。結果表明流速變化對分離效果及測定結果影響較小。

3 討論

通過比較3種流動相：1)甲醇-1%冰醋酸溶液(29∶71)；2)以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)為流動相；3)乙腈-水(13.5∶86.5)，結果以流動相2)分離效果最佳，故確定流動相2)為測定松果菊苷含量的最終流動相。另外，通過對不同溶劑、不同提取方法和提取時間進行比較試驗，最終確定用50%甲醇超聲提取30min為最佳方法，方法簡便易行。

[1]麻景梅,宋新波,張麗娟,等.荒漠肉蓯蓉多糖的研究[J].吉林中醫藥,2012,32(2):199-201.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:126.

[3]姜翔之,陳英紅,羅浩銘,等.HPLC法測定藤黃健骨丸中松果菊苷的含量[J].中國藥師,2009,12(4):481-482.

R284.1

A

1003-5699(2013)06-0607-02

董政起(1983-)，男，助理研究員，博士。研究方向：中藥新藥研究工作。

*[通信作者] 程東巖，女，副研究員,Tel：0431-86058657，E-mail:cdyan1225@sohu.com。

2013-04-29)