紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量

鄧 偉，李新建，田小林，王 沛*

(1.長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量

鄧 偉1，李新建1，田小林2，王 沛2*

(1.長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

目的：建立淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。方法：采用紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量。以甲醇作空白對照，檢測波長：270 nm。結果：淫羊藿苷量在0.048～0.40 mg范圍內與吸收度呈良好的線性關系，r=0.999 9，平均回收率為98.88%，RSD為2.87%。結論：本方法簡便可行、結果準確可靠，重復性好，可作為淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。

紫外分光光度法；淫羊藿顆粒；淫羊藿苷；含量測定

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbreviconumMaxim.的干燥地上部分, 始載于《神農本草經》，味辛、甘，性溫，歸肝、腎經，具有補肝腎、強筋骨、助陽益精和祛風濕功效，并有抑制脊髓灰質病毒、降血壓、增加冠脈流量和防治骨質疏松[1-2]等多種藥理作用。臨床主要用于治療陽痿、腰膝痿弱、風寒濕痹、四肢麻木及股骨頭壞死等癥。淫羊藿的主要有效成份是淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷、淫羊藿次苷)和淫羊藿多糖等[3]為了有效的控制淫羊藿顆粒的質量，筆者選取了其中主要藥效成分，也是含量較高的淫羊藿苷作為監控指標，現報道如下。

1 實驗材料

1.1 材料 淫羊藿飲片購自長春中醫藥大學附屬醫院藥房，經長春中醫藥大學藥學院鑒定教研室肖寄平老師鑒定確系小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornumMaxim.的干燥地上部分，屬《中華人民共和國藥典》2010版所載正品;淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號11788-201002)；甲醇為色譜純(北京化工廠)，其余化學試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器 UV-9100紫外分光光度儀(北京瑞利分析儀器公司)，電子天平AL204(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司),循環水多用真空泵SHZ-型(上海滬西分析儀器廠有限公司)。

1.3 對照品(標準品)溶液的制備 精確稱取經80 ℃干燥至恒重的淫羊藿苷標準品4.0 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，既得(每1 mL中含淫羊藿苷標準品0.16 mg)。

1.4 樣品溶液的制備 取淫羊藿顆粒適量，研細，取約5.0 g，精密稱定，加70%乙醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，靜置過夜，過濾。再用乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯層。最后用甲醇溶解所得稠膏轉溶于25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，制成每1 mL中約含樣品25 mg的溶液，搖勻，用0.45 μm微膜濾過，取濾液，作為樣品供試品。

2 實驗方法與結果

2.1 最大吸收波長的選擇 分別吸取淫羊藿標準品溶液、樣品溶液和色譜純甲醇溶液適量,于紫外分光光度儀上從λ=200～700 nm進行掃描。標準品溶液和樣品溶液在λ=270 nm處均有最大吸收，色譜純甲醇溶液在λ=270 nm處沒有吸收，所以確定測定最大吸收波長為λ=270 nm。

2.2 標準曲線的繪制 精確吸取1.3項下淫羊藿苷標準品溶液0.3，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL置于25 mL容量瓶中，定容至刻度,用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處,以甲醇為空白對照分別測其吸光值。以淫羊藿苷量(X)對吸收度值(A)進行線性回歸。

由數據得線性回歸方程為:Y=1.419 1X-0.047 7(r=0.999 9)。淫羊藿標準品在0.048～0.400 mg范圍內線性關系良好。

2.3 精密度實驗 分別精密量取1.3項下標準品溶液1.0 mL，6份,分別置于25 mL容量瓶中，定容至刻度，用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處，以甲醇為空白對照分別測其吸光值，取平均值，計算RSD=0.28%，表明儀器精密度良好。

2.4 穩定性實驗 精密吸取1.4項下方法制備的同一樣品溶液，室溫(25 ℃)放置,用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處,以色譜甲醇為空白對照，每隔20 min 測1次其吸光值。數據結果表明:在2 h內淫羊藿苷含量穩定，計算RSD=1.26%，不影響測定結果。

2.5 回收率實驗 采取加樣回收法，精密稱取已知淫羊藿苷含量(高、中、低3個濃度)的樣品6份，再精密添加淫羊藿苷標準品，按1.4項下方法制備樣品溶液，室溫(25 ℃)放置。以色譜甲醇為空白對照，在λ=270 nm處測定吸光度值(結果見表1)。計算得平均回收率為98.88%，RSD值為2.87%。

2.6 樣品含量測定 取淫羊藿顆粒成品6批，按1.4項下方法制成樣品溶液,依照上述色譜測定條件測定,根據外標法測定計算淫羊藿顆粒中的淫羊藿苷含量。6批淫羊藿顆粒成品的紫外吸收度分別為：0.476、0.467、0.477、0.456、0.466、0.474；含量分別是：0.369 037、0.362 695、0.369 741、0.354 943、0.361 990、0.367 627 mg/粒,均值0.364 339 mg/粒；標示量誤差為：96.64、100.45、98.53、102.64、100.64、99.11，符合該新藥研發所制定的質量標準。

表1 回收實驗測定結果

3 討論

3.1 供試品溶液制備的溶劑選擇 由于本制劑屬于中藥制劑，成分比較復雜，考慮到在含量測定時雜質的干擾，對樣品的溶解度進行了測定試驗。按《中國藥典》2010年版一部凡例的標準規定，對供試和淫羊藿苷對照品進行了溶解測定考察，通過使用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、苯、氯仿等試劑進行比較，結果使用甲醇溶解制成最終待測樣品的效果最佳。

3.2 色譜條件的選擇 本測定方法采用的色譜條件為λ=270 nm處測定吸收度。原因在于淫羊藿苷標準品溶液、樣品溶液和色譜純甲醇溶液，在該波長處均有最大吸收，作為溶媒的色譜純甲醇溶液在此波長處沒有吸收(較好地排除了干擾)，所以確定測定吸收波長為λ=270 nm。測量結果好。

3.3 測定結果 本方法簡便快捷，結果準確可靠，重復性好，可作為淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。

[1]李青南,廖進民,吳鐵,等.淫羊藿防治羥基脲所致雄大鼠骨質疏松的定量研究[J].中國中醫骨傷科雜志,1996,4(3):1.

[2]李青南,廖進民,吳鐵,等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨質疏松的實驗研究[J].中國藥學雜志,1996,31(8):647.

[3]王文龍,顧雪竹,李雪婷,等.淫羊藿提取工藝優化研究[J].長春中醫藥大學學報,2011,27(2):163-164.

ContentDeterminationoftheIcariininEpimediumBreviconumGrainbyUV

DENG Wei1,LI Xin-jian1,TIAN Xiao-lin2,WANG Pei2*

(1.Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130021;2.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130117)

ObjectiveTo establish a method for determing Icariin in Epimedium breviconum Grain.MethodsUV deternination of Icariin in Epimedium breviconum Grain.Using methanol as blank control,detection wavelength:270 nm.ResultsIcariin in 0.048～0.400 mg Range and absorbance was linear regression,r=0.999 9,the average recovery was 98.88%,RSD 2.87%.ConclusionThe method is simple and reproducible for the determination of Icariin in Epimedium breviconum Grain by UV.

UV;Epimedium breviconum Grain;Icariin;Determination

R284.2

A

1003-5699(2013)01-0072-02

2012-10-19)

吉林省科技廳科技支撐項目(編號:20090926)。

鄧 偉(1981-)，男，碩士，講師。研究方向：骨傷臨床與藥物研究。

*通信作者：王 沛,Tel:0431-86045206,E-mail:Wapa1988@163.com。