生防細菌SFJ-7對西瓜枯萎病的防治效果

拜有玉 (長江大學農學院，湖北 荊州434025)

王翠霞，紀莉景，孔令 (河北省農林科學院植物保護研究所，河北省有害生物綜合防治工程技術研究中心，農業部華北北部作物有害生物綜合治理重點實驗室，河北 保定 071000)

生防細菌SFJ-7對西瓜枯萎病的防治效果

拜有玉 (長江大學農學院，湖北 荊州434025)

王翠霞，紀莉景，孔令 (河北省農林科學院植物保護研究所，河北省有害生物綜合防治工程技術研究中心，農業部華北北部作物有害生物綜合治理重點實驗室，河北 保定 071000)

以對西瓜枯萎具有較好防治效果的生防細菌SFJ-7為研究對象，采用平板菌落計數法獲得生長曲線(其中最佳發酵時間為21h，此時菌體數量可達到5×106cfu/ml)，將其菌液設置成每克土109、108、1073個濃度梯度，與每克土106病原菌混合，采用盆栽方法進行了西瓜枯萎病的防治試驗。結果顯示：濃度為每克土109個分生孢子的生防菌防效最好，病株率最低只有13.18%，防治效果達到了86.04%。該結果可為西瓜枯萎病的生物防治提供參考。

西瓜枯萎病菌；生防菌；細菌生長曲線

西瓜枯萎病是一種由尖孢鐮刀菌西瓜轉化型(Fusariumoxysporumsf.sp.melonis)引起的毀滅性的土傳病害[1]，通常發病率即為損失率；一般株發病率為 10%～30%，嚴重時高達80%，甚至絕收[2-3]。近年來，隨著西瓜種植面積的迅速增加，產區輪作倒茬困難，枯萎病發病越來越嚴重[4]。不僅嚴重影響了西瓜的產量和質量，而且挫傷了瓜農種植的積極性。目前生產上存在的問題是缺乏抗病品種，土壤消毒難以大面積推廣、嫁接影響果品質量、化學防治的效果也不盡人意。為了尋求對西瓜枯萎病安全有效的防治措施，人們越來越關注以菌治菌的生物防治方法[5]。近年來利用拮抗菌防治西瓜枯萎病越來越受到重視，國內外已有不少報道，已發現的生防菌包括非致病鐮刀菌(Fusariumspp.)[6]、芽孢桿菌(Bacillusspp.)、熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescence)[7]、綠色木霉(Trichodermaviride)[8]、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)[9]等，在實際應用中仍多以拮抗活菌施入病菌生存的環境角度加以利用，但是活菌應用容易受到環境條件影響，致使防治效果喪失或延遲，用于大面積推廣存在一定風險，施用前需綜合考慮當地病害微生態系統的環境[10]；張麗榮等[11]的研究表明，在作物生長期間經2次灌根后，以木酶制劑T1、T2、T3處理的西瓜苗發病率為1.25%～2.5%，明顯低于藥劑對照(72%農用鏈霉素)和空白對照，相對防效達71.4%～85.4%；木霉制劑T1、T3 對西瓜枯萎病的防治效果和增產效果更為顯著，西瓜植株長勢旺盛、葉片大且濃綠，說明木霉制劑對作物具有一定的促生長作用；紀明山等[12]對綠色木霉和芽孢桿菌聯合防治西瓜枯萎病進行了初步研究，兩者聯合后的防效達到了80%以上，在研究過程中也觀察到了木霉菌迅速覆蓋病原菌并使之停止生長或枯死，以及拮抗細菌分泌抗生物質使病原菌停止生長形成拮抗帶和促進植物生長等現象。本研究以對西瓜枯萎菌有較好抑制作用的生防細菌SFJ-7為研究對象，在確定生防菌最佳發酵時間的基礎上，采用室內盆栽試驗探討了不同使用濃度對西瓜枯萎病的防治效果以及對土壤中病菌數量的影響，以期為該病的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

西瓜枯萎病菌：菌株由河北省農林科學院植物保護研究所植物病害實驗室提供，是具有強致病力的尖孢鐮刀菌西瓜專化型。

生防菌株SFJ-7： 由河北省農林科學院植物保所植物病害實驗室篩選。

供試西瓜種子：京域二號F1(北京京域威爾農業科技有限公司)。

LB培養基：胰蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml。

LB 液體培養基：胰蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml。

PDA培養基：馬鈴薯200g，葡糖糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml。

PDA 液體培養基：馬鈴薯200g，葡糖糖20g，蒸餾水1000ml。

1.2 病原菌和生防菌的擴繁培養

生防菌株的擴繁培養：將在LB培養基上生長良好的生防細菌SFJ-7接種在裝有100ml LB液體培養基的三角瓶(250ml)中，每瓶接種0.1ml，經搖床以160r/s的轉速在30℃下培養36h。

病原菌的擴繁培養：選擇在PDA培養基上生長良好的病原菌，用6mm的打孔器打孔，每瓶接種5～6塊于裝有100ml PDA液體培養基的三角瓶(250ml)中，經搖床以170r/s的轉速25℃培養4～5d。

1.3 生防菌株生長曲線測定

采用平板菌落計數法，將在LB培養基上生長良好的生防細菌SFJ-7接種在裝有100ml LB液體培養基的三角瓶(250ml)中，每瓶接種0.1ml，經搖床以160r/s的轉速30℃培養，每隔3h取1次樣，進行稀釋涂平板，統計生防菌菌落數，繪制其對數生長曲線。

1.4 不同濃度生防菌的防效測定

采用室內盆栽法進行。首先將濕熱滅菌(121℃、50 min)后的沙子和蛭石(沙子∶蛭石=1∶1)按每盆500g的量裝于花盆中；其次把擴繁的生防細菌原液稀釋，配制成不同濃度的菌液(即每克土109、108、1073個濃度梯度)，再與擴繁好的病原菌(接種量為每克土106分生孢子)分別混合，然后將混合好的菌液澆入盆中，并寫明相應的編號；設對照CK1和CK0，其中CK1只加入每克土106的病原菌，CK0只加對應量的水。

每盆播種6粒西瓜種子，覆土100g，每個濃度設15個重復；移至溫室，常規管理，待開始發病后調查病株率，直至植株死亡，計算相對防效。

1.5 生防菌對根際土壤病菌數量的影響

調查結束后，收集花盆當中幼苗根圍的沙土，將其進行100倍稀釋，于選擇性培養基上每皿涂抹500μl ，25℃培養3～4 d，調查西瓜枯萎病病菌的菌落數量，以確定生防細菌對其是否有抑制效果。

2 結果與分析

2.1 生防菌株的生長曲線

圖1 生防菌SFJ-7的對數生長曲線

經平板菌落計數獲得的生防細菌SFJ-7對數生長曲線如圖1。由圖1可以看出，生防菌SFJ-7在3～15h內生長速度較緩慢，隨后生長速度逐漸加快，持續到21h時達到最高峰，達到5×106cfu/ml，說明它的的最佳生長點在21h。

2.2 不同使用濃度的生防菌的防治效果

通過盆栽方法，人工接入生防細菌和病菌后，調查不同濃度生防菌液處理后的發病率和防治效果，結果如表1所示。

當生防菌使用濃度為每克土109時，病株率最低只有13.18%，相對防效達86.04%；而每克土107的病株率高達81.11%，相對防效僅為14.11%；兩者差異極顯著，對照CK1的病株率達到了94.44%，幾乎全部死亡。

表1 不同濃度生防菌處理后西瓜枯萎病的發病率和防治效果

表2 不同生防菌濃度處理下植株根際土壤內病菌的數量

2.3生防菌對根際土壤病菌數量的影響

取根圍土樣的平板分離結果如表2，從表2可以看出，每克土109的濃度下健康植株幼苗根圍土中含有的病菌數量明顯少于每克土108和每克土1072個濃度下的數量。

3 小結與討論

本研究結果表明，生防菌SFJ-7對西瓜枯萎病有較好的防治效果，初步明確了該生防菌的菌體最佳搖瓶發酵生長時間為21h，根圍土壤使用該菌體濃度在每克土109時相對西瓜枯萎病防效最高，為達到86.04%，該濃度下植株根際土壤內的病原菌數量明顯減少，研究結果為西瓜枯萎病的生物防治提供了一定的依據。但由于試驗中設置的濃度梯度較少，且為室內盆栽的研究結果，因此，需進行進行多濃度測試和大田防效試驗。此外，對生防菌株尚需進一步確定分類地位。

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[6]張琴芳，代光輝，顧振芳,等.非致病性鐮刀菌Fusariumoxysporum菌株47(FO47)對番茄枯萎病的防治效果[J].上海交通大學學報(農業科學版)，2004，(1)：17-21.

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[11]張麗榮，康萍芝.木霉制劑對西瓜枯萎病的田間防治效果[J].植物保護，2011,(17)：148-149.

[12]紀明山，王英姿.西瓜枯萎病拮抗菌株篩選及田間防效試驗[J].中國生物防治，2002,18(2)：71-74.

2013-05-20

公益性行業科研專項(200903049)。

拜有玉(1990-)，男，現從事植物病理學研究。

[作者簡介]孔令曉，E-mail：konglingxiao@sohu.com。

S436.5

A

1673-1409(2013)17-0005-03