奧氮平有關物質的HPLC檢查法研究

林 潔，程煜鳳，康秋梅，李祖琨，李 丹，康天懌，徐小平

（1.四川大學華西藥學院，四川 成都 610041；2.新疆醫科大學藥學院，新疆 烏魯木齊 830011）

0 引 言

奧氮平（olanzapine）化學名為 2-甲基-4-（4-甲基-1-哌嗪基-）-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜卓，是一種非典型抗精神病藥，可有效改善精神分裂的陽性及陰性癥狀，錐體外系反應[EPS]發生率低[1]，具有神經保護作用[2]，可改善老年期癡呆的精神行為癥狀，廣泛用于治療多種精神疾病[3-6]。其質量標準收載于美國藥典（USP34-NF29）及國家藥品標準（WS1-（X-181）-2004Z）中。針對其有關物質研究的文獻資料較少，且主要采用高效液相色譜法[7]進行檢查，所報道的色譜條件及限度有較大差異。本文在對比驗證標準方法和實驗室建立的方法基礎上，根據有關物質的分離個數、分離度、峰高和分析時間，篩選并優化出奧氮平有關物質檢查的HPLC條件，為奧氮平質量研究提供快速、簡便、靈敏的方法。

1 實驗材料與方法

1.1 儀器

Shimadzu LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司），色譜工作站（日本島津公司）；純水儀（成都品成科技有限公司）；BP211D型十萬分之一電子分析天平；KL10260D超聲波清洗器。

1.2 試劑

奧氮平對照品（批號：100948-200801，中國藥品生物制品檢定所）；奧氮平原料藥（批號：ODOON1206001，浙江新華制藥有限公司）；乙腈為色譜純（廣東光華科技股份有限公司）；甲醇為色譜純（天津市科密歐化學試劑有限公司），純化水，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 奧氮平有關物質研究的3種HPLC方法比較

參照奧氮平在美國藥典標準（USP34-NF29，以下簡稱USP法）、國家藥品標準（WS1-（X-181）-2004Z，以下簡稱WS法）和實驗室參照文獻建立的方法（以下簡稱自建法）中所收載的3種HPLC有關物質檢查法（均采用主成分自身稀釋對照法定量），分別對奧氮平中有關物質進行了分離考察，記錄了色譜峰，并就有關物質的個數、檢測限、分離度、對稱性和柱效等方面進行了比較。分析條件見表1。

表1 奧氮平有關物質分析方法色譜條件比較

表2 USP法梯度洗脫程序

檢出限：取適量供試品，用流動相溶解并逐級稀釋成不同濃度的供試品溶液，分別取20μL進樣，最小雜質峰高的信噪比≥3時，確定雜質檢出限。

1.3.2 測定方法的優化

根據上述3種色譜法的特點，本文設計了不同類型固定性、柱長和洗脫形式，以奧氮平原料藥中有關物質的檢出個數、分離度、峰高、分析時間和基線漂移等作為優化其HPLC條件的指標，評價條件見表3。

2 結果與討論

2.1 3種測定奧氮平有關物質方法比較

由圖1可知，USP法采用的是梯度洗脫法，分離得到USP法指定的奧氮平5個主要雜質峰，但是基線漂移較嚴重，奧氮平主峰后的另一個雜質峰（1，4-二（2-甲基-10H-苯并（b）噻吩并[2，3-e][1，4]二氮雜-4-基）哌嗪）體現不明顯，且分析時間相對較長，可能與固定相類型（C8）和柱長（250mm）有關；WS法采用恒比例洗脫法，分離得到4個主要的雜質峰，響應值高，相對分析時間最短，基線平穩，但幾乎沒有完全分離的峰；自建法用比例洗脫得到6個主要雜質峰，主峰后的雜質峰體現明顯，峰分離度均大于1.5，基線平穩，但靈敏度相對較低。因3種方法各自的固定相類型，柱長、流動相和洗脫類型的差異，直接比較尚有不足，需要進一步優化。

表3 不同優化條件表

圖1 3種方法的色譜圖比較

2.2 測定方法的優化

實驗采用不同類型、不同柱長3種色譜柱，分別參照上述3種奧氮平有關物質檢查方法的HPLC條件，測定奧氮平原料藥中有關物質，測定主要結果如圖2所示。

圖2 不同色譜柱參照不同色譜方法實驗結果

據實驗數據分析，相同色譜柱下比較不同洗脫方法，USP法采用的是梯度洗脫，且流動相中存在SDS緩沖鹽，所以基線漂移較大，分析時間也較長，而采用WS法和自建法的等度洗脫程序的基線較平穩。在使用 C18柱（150mm×4.6mm×5μm）和C8柱（150mm×4.6mm×5 μm）時，自建法分離雜質峰相對較多，峰分離度大，分析時間合適，因此自建法較WS法以及USP法在雜質分析上具有一定優勢。在采用C8柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）情況下，USP 法分離得到雜質多，峰分離度均大于1.5，靈敏度高，分析時間短，因此，C8柱（250mm×4.6mm×5μm）情況下，參照USP法梯度洗脫程序雜質分離更好。在不同柱子情況下比較，等度和梯度各具有優勢，但考慮分析時間及對實驗設備的要求，以及基線漂移對雜質分離影響的情況，自建法的等度洗脫更具實用性和合理性。

在相同方法下比較不同柱子，參照USP法梯度洗脫程序，采用的 C8柱（250mm×4.6 mm×5 μm），分離雜質峰數多，分離度高，基線漂移相對較小，分離情況最為理想。參照WS法的等度洗脫程序，C18柱（150mm×4.6mm×5 μm）靈敏度最高，分離情況相對理想。自建法的等度洗脫程序，考慮分析時間，峰分離個數及響應值，C18柱（150mm×4.6mm×5μm）分離分析情況理想。一般情況下洗脫程序相同，同一類型色譜柱雜質峰分離個數應一致，但自建法的C8（250mm）柱比C8（150mm）分離雜質數少，原因是柱長增加，采用等度洗脫時譜帶展寬嚴重，導致含量很低的雜質峰高過小，所以能積分的雜質峰變少。根據以上分析可知，美國藥典標準、國家藥品標準中收載的方法，以及實驗室自建的方法，在柱子的類型及柱長選擇上具有明顯優勢，因此在分別采用各方法進行分析時，推薦采用原方法中的色譜柱。

圖3 實驗室自建方法奧氮平有關物質HPLC圖

3 結束語

結果表明，固定相的類型在分離中影響不明顯，柱長增加有利于分離度的改善，但是分析時間會明顯增長。綜上可知，自建法具有檢出雜質個數多、分析時間較短、分離度較高、靈敏度較高和基線平穩等特點，是奧氮平有關物質限量檢查的較好方法。

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