不同產地天門冬水提液抗氧化能力比較

歐立軍 危 革 周紅燦 鄭 鎮 李軍桃 (懷化學院生命科學系，湖南 懷化 48008)

不同產地的同種藥材，其活性成分的種類及含量均有所不同，導致其藥效的差異，從而中藥材講究道地性〔1～5〕。對道地藥材的判斷方法很多，如高效液相色譜法〔6～9〕、光譜法〔10～12〕和分子標記〔13～16〕等方法，但少見從藥理學角度進行中藥材的道地性分析。天門冬為天門冬屬植物，具有較強的抗氧化能力〔17～20〕。對天門冬藥材的道地性探討較少，僅見通過ITS序列初步認為貴州產天門冬遺傳多樣性較大，可能是其道地產區〔14〕。本文從藥理學角度對不同地區天門冬進行抗氧化能力比較。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 我國貴州、湖南、廣東、廣西、云南、青海和浙江7個省產的天門冬。昆明種健康雄性小鼠，2月齡，體重(20±2)g，分為空白對照組、衰老模型組和給藥組，每組10只。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥劑制備 天門冬低溫烘干后，粉碎成粗粉。取天門冬粗粉20 g，加水160 ml煮提3次，1 h/次，合并3次提取液，過濾后濃縮得天門冬水提液;把所得的藥劑稀釋到生藥濃度0.7 g/ml，冷藏備用。

1.2.2 衰老和給藥模型的構建 對照組每天皮下注射生理鹽水;衰老模型組每天注射 D-半乳糖(7 mg/ml，經130℃滅菌，100 mg/kg);給藥組每天注射 D-半乳糖(上海試劑二廠)(100 mg/kg)，同時灌胃天門冬水提液(2 g/kg)。各組分籠飼養，自由進水。

1.2.3 生理指標測定 連續給藥30 d后，斷頭處死，取血，3 000 r/min離心取血清;取肝臟、腦、心、肺稱重，用生理鹽水分別制成1%和10%的勻漿。南京建成產試劑盒進行起氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的測定。

1.3 統計學方法 應用SPSS13.0進行分析，數據以s表示，各組之間差異的比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 天門冬對小鼠腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響 各地區天門冬水提液均能提高小鼠腦的SOD、NOS和CAT的活力，使NO含量上升，MDA含量降低(均P＜0.05);不同產區天門冬的提高或降低比率存在明顯差異，貴州和湖南產天門冬提高抗氧化系統酶活性明顯高于其他產區天門冬，且升高NO含量和降低MDA含量同樣與其他產區天門冬存在顯著差異(均P＜0.05)。見表1。

2.2 天門冬對小鼠肝NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響比較 7個給藥組小鼠肝的NOS、CAT和SOD活性及NO含量都比衰老組高，MDA含量比衰老組低，SOD活性和NO含量比對照組低(均P＜0.05);不同產區天門冬的效果存在顯著差異，貴州和湖南產天門冬效果最好，云南和青海產天門冬次之，其他產區一般(P＜0.05)。見表2。

2.3 天門冬對小鼠血清NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響 7個給藥組小鼠血清的SOD、NOS和CAT活性、NO和MDA含量與衰老組差異顯著(均P＜0.05);貴州和湖南產天門冬的抗氧化效果顯著優于其他產區(P＜0.05)。見表3。

表1 不同產地天門冬水提液對腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響( s，n=10)

表1 不同產地天門冬水提液對腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響( s，n=10)

與衰老組比較:1)P＜0.05，與其他產地天門冬比較:2)P＜0.05;下表同

處理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)對照組 98.31±4.44 1.48±0.035 32.34±0.98 1.43±0.08912.50±1.06衰老組 63.99±4.20 1.35±0.057 20.67±2.16 2.59±0.255 5.08±0.85給藥組 貴州產 93.47±4.051)2) 1.63±0.0551)2) 47.80±1.811)2) 1.09±0.0281)2) 22.02±1.831)2)湖南產 92.25±3.641)2) 1.59±0.0291)2) 48.47±2.481)2) 1.15±0.0471)2) 21.37±1.361)2)廣東產 74.31±3.471) 1.41±0.0641) 38.36±2.141) 1.39±0.0581) 16.02±1.781)廣西產 76.67±5.141) 1.39±0.0341) 36.24±3.251)1) 1.41±0.0971) 15.39±2.131)云南產 85.21±3.981) 1.48±0.0671) 40.47±2.401) 1.34±0.0551) 18.44±1.501)青海產 79.68±2.471) 1.42±0.0401) 42.80±3.031) 1.29±0.0741) 19.21±2.141)浙江產 86.34±3.191) 1.44±0.0641) 34.56±1.681) 1.37±0.061) 17.57±1.391)

表2 天門冬不同提取液對小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響( s，n=10)

表2 天門冬不同提取液對小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響( s，n=10)

?處理對照組 55.65±2.81 0.84±0.130 54.61±3.32 1.32±0.2734.95±0.017衰老組 49.54±2.88 0.74±0.117 45.72±4.5 1.75±0.136 1.91±0.016給藥組 貴州產 51.87±3.011)2) 1.11±0.2231)2) 57.28±3.141)2) 1.14±0.1241)2) 3.75±0.0451)2)湖南產 52.36±2.751)2) 1.08±0.1941)2) 58.01±2.241)2) 1.18±0.0381)2) 3.98±0.0321)2)廣東產 50.35±3.551) 0.79±0.1141) 54.10±1.871) 1.34±0.0471) 3.01±0.0181)廣西產 50.24±2.671) 0.82±0.1321) 53.26±3.021) 1.30±0.0871) 2.89±0.0231)云南產 50.87±4.381) 0.87±0.1231) 55.14±2.221) 1.28±0.0741) 3.31±0.0501)青海產 51.47±1.801) 0.90±0.1141) 54.87±2.571) 1.33±0.0571) 3.43±0.0421)浙江產 50.89±2.491) 0.82±0.1341) 52.14±1.451) 1.39±0.0771) 3.12±0.0321)

s，n=10)表3 天門冬不同提取液對小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響(

s，n=10)表3 天門冬不同提取液對小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響(

處理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)對照組 96.42±9.29 46.52±3.32 0.61±0.083 24.96±3.80987.64±46.14衰老組 72.58±6.47 43.76±4.51 0.072±0.0132 29.64±4.46 503.26±27.08給藥組 貴州產 102.65±8.131)2) 57.21±3.431)2) 0.85±0.0541)2) 22.67±2.211)2) 985.52±32.121)2)湖南產 99.10±7.581)2) 59.54±3.191)2) 0.74±0.0201)2) 21.35±1.321)2) 978.36±35.031)2)廣東產 95.36±8.741) 49.36±4.141) 0.58±0.081) 23.44±1.941) 805.36±40.241)廣西產 96.31±9.271) 50.17±2.321) 0.54±0.0221) 23.78±1.871) 824.31±30.021)云南產 97.87±8.301) 55.39±3.231) 0.64±0.0521) 22.98±2.071) 905.21±25.051)青海產 95.87±7.811) 54.18±4.141) 0.65±0.0521) 23.07±2.571) 918.39±30.041)浙江產 94.25±7.491) 51.02±3.341) 0.58±0.0411) 23.57±3.071) 836.25±40.021)

3 討論

衰老是生命的必然過程，提高抗氧化系統酶活性，抑制脂質過氧化反應，清除自由基，是中藥材抗氧化，延緩衰老的重要機制〔21〕。MDA是脂質過氧化物的分解產物，可間接反映機體自由基水平的代謝情況〔22，23〕。隨著年齡的增長，NO的含量逐漸下降，許多生理作用不能發揮而加速機體衰老進程〔24〕，NO的生成量與NOS的活性密切相關〔25〕。SOD和CAT廣泛存在于各類生物體中，是機體重要的抗氧化酶，可催化生物體內的超氧自由基發生歧化反應，降低自由基代謝產物MDA的生成〔26～31〕。本文結果表明，7個省產天門冬都可以提高提高機體內各種抗氧化系統相關酶活性，增加NO生成量，從而達到減少機體過氧化損傷程度而延緩衰老。

針對傳統藥用植物的品質退化進行品質改良，選育優良品種，是優化中草藥品質的根本途徑，選育出優質、高產、穩產、熟期適當、抗性強和適應性廣，是各種藥用植物育種的共同目標〔32，33〕。天門冬在我國分布較廣，主要依靠野生資源。近些年由于天門冬用量大增，野生天門冬資源逐年減少，且生態破壞嚴重，因此人工栽培成為解決天門冬資源緊張和保護環境的必要手段，而優異種質是人工栽培的重要方面。本文研究認為，貴州和湖南產天門冬具有更有效地抗氧化損傷和減少過量自由基的損傷能力，有更明顯的抗衰老效果。因此，這些地區可以成為人工栽培天門冬及引種的首選，并可以從中選育出抗氧化能力強、產量高和適應性廣的優良新品種。

1 袁 曉，高俊飛，舒楚金，等.不同產地決明子中9種蒽醌類成分的測定〔J〕.中草藥，2012;43(9):1773-5.

2 白雪媛，趙 雨，劉海龍，等.不同產地人參中的總糖、還原糖和可溶性多糖含量的比較研究〔J〕.中國現代應用藥學，2012;29(2):39-42.

3 梁臣艷，覃潔萍，陳玉萍，等.不同產地防風揮發油的GC-MS分析〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2012;18(8):80-3.

4 鞠成國，徐 剛，宋勇軍，等.不同產地生制狗脊中總酚酸含量比較〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2012;18(10):24-6.

5 吳雪松，葉正良，郭巧生，等.東北不同產地人參及其加工品外觀性狀及非皂苷類成分比較分析〔J〕.中國中藥雜志，2012;37(16):2383-7.

6 蔡曉翠，賀金華，徐 芳，等.新疆道地藥材伊貝母HPLC-ELSD指紋圖譜研究及西貝母堿的含量測定〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2012;18(21):82-5.

7 胥秀英，鄭一敏，傅善權，等.重慶道地藥材青蒿高效液相色譜指紋圖譜研究〔J〕.時珍國醫國藥，2009;20(5):1188-9.

8 袁清照，張水寒，李順祥，等.吳茱萸道地藥材的高效液相指紋圖譜研究〔J〕.中草藥，2010;41(9):1534-8.

9 崔 洋，王 巧，張蘭桐，等.河北道地藥材連翹的高效液相色譜指紋圖譜研究〔J〕.中草藥，2010;41(2):297-301.

10 王鋼力，石 巖，魏玉海，等.近紅外光譜鑒別冬蟲夏草道地藥材〔J〕.中草藥，2006;37(10):1569-71.

11 郭蘭萍，黃璐琦，Christian WH.近紅外光譜技術及其在中藥道地性研究中的應用〔J〕.中國中藥雜志，2009;34(14):1751-7.

12 白 雁，李雯霞，王 星，等.近紅外光譜法測定道地產區生地黃中梓醇的含量〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2010;16(13):45-7.

13 劉 穎，劉東吉，劉春生，等.基于 HMGR、SQS1、β-AS基因 CNVs的甘草道地性機制研究〔J〕.藥學學報，2012;47(2):250-5.

14 歐立軍，張人文，談智文，等.我國不同地區天門冬核DNA ITS序列分析〔J〕.中草藥，2011;42(7):1402-6.

15 劉明珍，陳乃富，劉秀珍，等.道地藥材霍山石斛及其相似種的分子鑒定〔J〕.生物學雜志，2009;26(5):34-6.

16 曹 亮，李順祥，魏寶陽，等.吳茱萸RAPD體系構建及道地性遺傳背景研究〔J〕.中草藥，2010;41(6):975-8.

17 李 敏，費 曜，王家葵.天冬藥材藥理實驗研究〔J〕.時珍國醫國藥，2005;16(7):580-2.

18 曲鳳玉，毛金軍.天門冬對D-半乳糖衰老模型小鼠紅細胞膜、干細胞膜MDA影響的實驗研究〔J〕.中草藥，1999;30(10):763-4.

19 張鵬霞，曲鳳玉.天門冬醇提取液對D-半乳糖致衰小鼠腦抗氧化作用的實驗研究〔J〕.中國老年學雜志，2000;20(1):42.

20 趙玉佳，孟祥麗.天門冬水提液及其納米中藥對衰老模型小鼠NOS、NO、LPF的影響〔J〕. 中國野生植物資源，2005;24(3):49-51.

21 襲 月，杜冠華，屈志煒.常用補益中藥抗脂質過氧化作用比較〔J〕.中國中藥雜志，1996;31(2):83-6.

22 吳秋萍，王 姣，樂國偉，等.加熱或丙二醛氧化大豆蛋白對小鼠體內自由基水平及抗氧化能力的影響〔J〕.營養學報，2011;33(1):14-8.

23 田 卉，周海洋，劉 梅.刺山柑提取物的體外抗脂質過氧化作用〔J〕.中藥藥理與臨床，2011;27(6):69-70.

24 Mollace V，Rodino P，Massoud R，et al.Aged-dependent changes of NO synthase activity in rat brain〔J〕.Biochem Biophy Res Commun，1995;215(3):822-7.

25 張 林，戴體俊，劉紅亮，等.硫噴妥鈉麻醉前后鼠腦 NOS活性，NO的動態變化〔J〕.中國藥理學通報，2001;17(3):3191.

26 夏花英，張江虹，謝月霞，等.左歸丸對D-半乳糖致衰老大鼠血液抗氧化能力和淋巴細胞DNA損傷的影響〔J〕.中華中醫藥雜志，2012;27(11):2937-8.

27 劉 丹，尹 東，曾 姝，等.川芎嗪對LPS致心肌細胞損傷的影響及機制研究〔J〕.中國藥理學通報，2012;28(11):1531-5.

28 倪慶純，郭健敏，肖百全，等.兩種中藥組方對D-半乳糖誘導的衰老模型裸鼠皮膚的影響〔J〕.中草藥，2012;43(9):1808-13.

29 楊宏志，李 靜，陳明星.開環異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷(SDG)抗氧化活性研究〔J〕.中國食品學報，2012;12(8):73-7.

30 黃敬群，文 娟，王四旺，等.槲皮素對大鼠痛風性關節炎抗炎抗氧化活性研究〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2012;18(2):169-73.

31 張利敏，侯志飛，王 剛.N-(2-乙酰氧基)苯甲酰基 -吡咯烷-2-酮對血管性癡呆大鼠學習記憶能力的影響〔J〕.中國老年學雜志，2012;32(2):334-5.

32 傅大立，趙東欣，孫金花，等.辛夷揮發油含量及良種選育指標研究〔J〕.河南農業大學學報，2004;38(2):179-83.

33 陳 翠，康平德，楊麗云，等.云南重樓不同地理種源分析評價與研究利用〔J〕.西南農業學報，2009;22(6):1722-6.