脊索瘤組織中Brachyury 表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

張琳琳，張 展#，段震峰

1)鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 鄭州 450052 2)哈佛大學(xué)麻省總醫(yī)院骨肉瘤分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室 波士頓 02114

脊索瘤是一種罕見的局部惡性侵襲性骨腫瘤,占所有惡性骨腫瘤的1%～4%。脊索瘤約50%發(fā)生于骶尾骨，由于發(fā)病部位隱蔽，腫瘤生長(zhǎng)緩慢，早期很難被發(fā)現(xiàn)[1]。脊索瘤總體預(yù)后較差，術(shù)后局部復(fù)發(fā)率高，患者多死于局部腫瘤病灶的反復(fù)復(fù)發(fā)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，脊索瘤患者的病死率在63%左右，5 a生存率為50%，10 a生存率約為28%[2]，因此亟須尋找到特異的分子標(biāo)志物為脊索瘤的預(yù)后判斷提供幫助。Brachyury是T-box基因家族的表達(dá)產(chǎn)物，是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。目前已發(fā)現(xiàn)Brachyury在80%的脊索瘤組織中有表達(dá)[3-4]，近來被認(rèn)為是診斷脊索瘤的特異性標(biāo)志物。作者利用組織芯片技術(shù)對(duì)脊索瘤組織中Brachyury的表達(dá)進(jìn)行了分析，探討 Brachyury作為脊索瘤臨床預(yù)后分子標(biāo)志物的可能性。

1 材料與方法

1.1組織標(biāo)本搜集美國(guó)麻省總醫(yī)院骨科1941年至2010年期間的78例脊索瘤組織、7例脊索瘤癌旁正常組織和6例胚胎脊索的存檔組織蠟塊，均經(jīng)2名病理醫(yī)生再次確認(rèn)。71例患者年齡31～87歲，≤45歲14例，46～歲25例，≥61歲32例。74例患者性別信息完整，其中男56例，女18例。63例患者可查閱到發(fā)病部位，其中21例于活動(dòng)脊柱發(fā)病，42例于骶骨發(fā)病。61例患者生存狀態(tài)信息完整，至隨訪結(jié)束時(shí)，27例存活，34例死亡。57例患者疾病狀態(tài)信息完整，至隨訪結(jié)束時(shí)，無瘤存活27例，帶瘤存活7例，因病死亡23例。

1.2Brachyury的檢測(cè)①組織芯片的制備：每例存檔組織蠟塊被鉆取3個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)直徑0.6 mm，按照預(yù)先設(shè)計(jì)的位置將所有鉆取的組織點(diǎn)轉(zhuǎn)移到一個(gè)空白蠟塊中，切片用于免疫組化染色。②免疫組化染色：采用R&D Systems公司(美國(guó))細(xì)胞和組織染色試劑盒，依照試劑盒說明進(jìn)行免疫組化染色。Brachyury抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。經(jīng)2名病理醫(yī)生采用雙盲法讀片，對(duì)于不一致的結(jié)果，再次判讀，直至取得一致結(jié)果，記錄在案。在良好的組織結(jié)構(gòu)和清晰的背景下，以細(xì)胞核內(nèi)顯現(xiàn)棕色為陽(yáng)性細(xì)胞。結(jié)果判讀采用陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)法：計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，無陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)為0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比<30%、30%～60%、>60%分別記為1、2、3分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Graphpad PRISM進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不同組織中Brachyury陽(yáng)性表達(dá)水平的比較采用秩和檢驗(yàn)，2組比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)，多組比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。利用Kaplan-Meier法對(duì)脊索瘤不同疾病狀態(tài)及存活時(shí)間與Brachyury陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行分析，生存時(shí)間記錄的起點(diǎn)為臨床診斷，終點(diǎn)為臨床追蹤結(jié)束。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1胚胎脊索瘤、癌旁正常及脊索瘤組織中Brachyury的表達(dá)結(jié)果見圖1、表1。

2.2Brachyury的表達(dá)與脊索瘤臨床參數(shù)的關(guān)系不同臨床參數(shù)脊索瘤組織中Brachyury的表達(dá)見表2。結(jié)果表明，Brachyury的表達(dá)與脊索瘤患者的性別、年齡均無關(guān)，但發(fā)病于骶骨者的陽(yáng)性表達(dá)水平高于發(fā)病于活動(dòng)脊柱者。

圖1 Brachyury在脊索組織中的表達(dá)(免疫組化，×40)A：癌旁正常組織；B：胚胎脊索組織；C：脊索瘤組織。

例

H=22.669，P=0.263。

表2 不同臨床參數(shù)脊索瘤組織中Brachyury的表達(dá) 例

2.3Brachyury的表達(dá)與脊索瘤不同疾病狀態(tài)及存活時(shí)間的關(guān)系Kaplan-Meier生存曲線見圖2。不同Brachyury表達(dá)水平的脊索瘤患者的生存曲線差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.432，P=0.933)。不同疾病狀態(tài)的脊索瘤患者Brachyury表達(dá)的差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

圖2 不同 Brachyury 表達(dá)水平的脊索瘤患者的生存曲線

組別n0分1分2分3分無瘤存活2771136帶瘤存活70241因病死亡237844

H=2.605，P=0.272。

3 討論

Brachyury是T-box基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，在胚胎脊索組織中大量表達(dá),調(diào)控中胚層形成和細(xì)胞分化基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)于脊索細(xì)胞的增殖分化異常重要[5-6]，其表達(dá)受Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控。由于脊索瘤被認(rèn)為是來源于胚胎脊索組織殘余物的惡性骨性腫瘤，Brachyury在脊索瘤組織中表達(dá)較高，因此許多研究認(rèn)為Brachyury與脊索瘤密切相關(guān)，因而Brachyury一向被認(rèn)為是診斷脊索瘤的特異性標(biāo)記物[3，7-8]，多用于脊索瘤的鑒別診斷[7-8]等。但是近年來的研究顯示Brachyury并非特異性表達(dá)于脊索瘤，在多種惡性腫瘤(如肺癌和結(jié)直腸癌[9]等)和正常組織(如腎、肺、腦、骨髓等)中均有Brachyury的表達(dá)。該研究中，胚胎脊索組織中Brachyury陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)6/6，脊索瘤癌旁正常組織中4/7存在Brachyury的陽(yáng)性表達(dá)，而脊索瘤組織中Brachyury的陽(yáng)性表達(dá)率為75.64%，也并非100%。Oakley 等[10]的研究亦顯示88%的脊索瘤組織中有Brachyury的表達(dá)。

在Brachyury與腫瘤臨床進(jìn)展相關(guān)性方面，僅見Brachyury與結(jié)直腸癌的報(bào)道，結(jié)果顯示Brachyury在晚期結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率要遠(yuǎn)高于早期結(jié)直腸癌，但是即便是在陽(yáng)性表達(dá)率較低的早期結(jié)直腸癌組織中，Brachyury的表達(dá)也達(dá)到了80%以上[10]，并因此認(rèn)為Brachyury不適合作為評(píng)價(jià)結(jié)直腸癌臨床進(jìn)展和預(yù)后的分子標(biāo)志物。也有研究[11]顯示Brachyury可以通過促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。該研究發(fā)現(xiàn)，Brachyury的表達(dá)與脊索瘤患者的疾病狀態(tài)及生存時(shí)間均無關(guān)，僅與脊索瘤發(fā)生部位有關(guān)。同樣，Presneau等[5]報(bào)道，在181例散發(fā)脊索瘤病例中，雖然 39%出現(xiàn)6p27的拷貝數(shù)變異，但是未發(fā)現(xiàn)這些變異與臨床參數(shù)之間的相關(guān)性。

綜上所述，作者認(rèn)為，雖然脊索瘤組織中Brachyury高表達(dá)，但是Brachyury并不能作為預(yù)測(cè)脊索瘤臨床預(yù)后的特異性分子標(biāo)志物。

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