益心泰對心肌梗死大鼠心室重構及CaN、NFAT3蛋白表達的影響

孫 濤，郭志華，毛湘屏，李 雅，肖長江，范紅輝，劉葉輝，劉文頻

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南 長沙410007；2.湖南中醫藥大學第二附屬醫院，湖南 長沙410005；3.湖南中醫藥大學藥學院，湖南 長沙410208；4.湖南省中醫藥研究院，湖南 長沙410006）

心室重構是心肌梗死后許多并發癥發生發展的病理基礎[1]。研究表明鈣調神經磷酸酶-活化的T 細胞核因子3（CaN-NFAT3）信號通路的活化是心室重構的重要信號轉導通路之一[2]。通過長期的臨床觀察，筆者發現中藥復方益心泰對改善心肌梗死患者臨床癥狀明顯，但確切的作用機制目前尚不清楚。本研究通過觀察益心泰對心肌梗死大鼠心室重構時CaN、NFAT3蛋白表達的影響，試圖闡明益心泰作用機制，為進一步臨床運用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物 健康雄性Wistar 清潔級大鼠，體質量200～220 g，由湖南中醫藥大學動物中心提供，合格證號：醫動字第20-002 號。

1.1.2 藥物、試劑 益心泰：由湖南中醫藥大學第二附屬醫院制劑室提供的醫院制劑，主要由黃芪、紅花、澤瀉、豬苓等組成；開博通：由中美施貴寶制藥有限公司生產(國藥準字H31022986)，規格：12.5 mg/片；復方丹參滴丸：由天津天士力制藥股份有限公司生產（國藥準字Z10950111），規格：27 mg/粒。CaN蛋白表達試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供，批號090312）；NFATc 蛋白相對試劑盒 （由北京普利萊基因技術有限公司提供，批號20091126）。

1.1.3 儀器設備 AEV-210 電子分析天平(長沙湘儀天平儀器廠)；UV-365 型紫外分光光度計(日本島津)。

1.2 方法

1.2.1 造模與動物分組 參照文獻[3]方法，建立心梗大鼠模型：200～220 g 健康Wistar 清潔級雄性大鼠稱質量，以10%水合氯醛（400 mg/kg 體質量）腹腔注射麻醉。消毒皮膚，經左側剪開皮膚，于3～4 肋間鈍性分離肌肉組織，開胸快速擠出心臟，于前降支下約1～2 mm 處結扎左冠狀動脈前降支，成功的即時標志為：直視下可見結扎血管供應區域心肌變為蒼白伴或不伴有局部室壁運動障礙；記錄標準肢導聯及胸前導聯心電圖(紙速50 mm/s)，ST 段弓背向上抬高。造成急性心肌梗死模型后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合。術后給予青霉素4 萬U 肌內注射，連續3 d。假手術組除不結扎冠狀動脈外，其余操作同模型組結扎動脈。將造模成功的大鼠按隨機數字表隨機分為5 組：模型組、益心泰組、開博通組、復方丹參滴丸組和假手術組。各組動物于同等條件下飼養，灌胃量為1 mL/100 g，模型組和假手術組以蒸餾水等量灌胃，劑量以人與大鼠體表面積換算，每200 g 大鼠的系數為0.018[4]，經計算益心泰組、復方丹參滴丸組和開博通組分別給予相應的藥物1.575 g/（kg·d）、1 g/（kg·d）、4 mg/（kg·d） 灌 胃，1次/d，連續用藥8 周。

1.3 各項指標的測定

1.3.1 心室重構指數檢測 左心室質量指數（LVWI）和右心室質量指數（RVWI），計算左心室濕質量/體質量，即左心室質量指數；右心室濕質量/體質量，即右心室質量指數。

1.3.2 CaN、NFAT3蛋白表達 Western blotting 檢測去磷酸化CaN、NFATc 蛋白的相對表達，以SigmaScan 圖像分析軟件進行光密度積分值分析。實驗重復12 次。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 心肌質量指數變化比較

與假手術組比較，模型組左、右室質量指數顯著增大，提示發生了心室重構，差異有統計學意義(P＜0.01)。與模型組比較，益心泰組、復方丹參滴丸組和開博通組左、右室質量指數均降低，差異有統計學意義(P＜0.01)，益心泰組與復方丹參滴丸組和開博通組各項指標組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組用藥后大鼠心室重構指數變化比較 （±s，mg/g）

表1 各組用藥后大鼠心室重構指數變化比較 （±s，mg/g）

注：與假手術組比較▲▲P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05；與丹參滴丸組P＞0.05；開博通組比較P＞0.05。下表同。

組 別假手術組模型組益心泰組開博通組復方丹參滴丸組n 12 10 12 11 12 LVWI 2.35±0.70 2.90±0.43▲▲2.41±0.40△2.39±0.41△2.44±0.46△RVWI 0.67±0.20 0.78±0.12▲▲0.71±0.14△0.70±0.15△0.73±0.17△

2.3 CaN、NFAT3 蛋白表達比較

與假手術組比較，模型組CaN、NFAT3蛋白顯著升高，差異有統計學意義(P＜0.01)；與模型組比較，益心泰組、復方丹參滴丸組和開博通組CaN、NFAT3蛋白均降低，差異有統計學意義(P＜0.01)；益心泰組與復方丹參滴丸組和開博通組各項指標組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。結果見表2。

表2 各組CaN、NFAT3 蛋白表達光密度比值比較 （±s）

表2 各組CaN、NFAT3 蛋白表達光密度比值比較 （±s）

組 別假手術組模型組益心泰組開博通組復方丹參滴丸組n 12 10 12 11 12 CaN 44.78±12.99 65.74±14.68▲▲53.95±11.32△54.00±10.85△56.41±11.89△NFAT3/β-actin 0.76±0.04 0.99±0.10▲▲0.86±0.07△0.84±0.06△0.89±0.08△

3 討論

已有文獻報道，Ca2+/CaM 激活的CaN 信號轉導通路在心室重構的發生發展中起著重要的作用[4]。當心肌細胞內的Ca2+升高時，通過活化CaN 而啟動向核內傳遞的信號通路[5]。激活的CaN 將通過去磷酸化活化T 細胞核因子 （nuclear factor of activated T cell，NFAT），使其上的核定位信號暴露，轉入細胞核。進入細胞核的NFAT 與心肌細胞核內的轉錄因子如GATA4 相互作用，誘導與心肌細胞增殖相關的原癌基因c-fos、c-myc、c-jun 等的表達，最終導致心肌細胞蛋白合成的增加。可見最終的蛋白表達是心室重構發生發展中至關重要的環節[6]。而本研究表明益心泰、開博通和復方丹參滴丸對大鼠心室重構有顯著的抑制作用，如表1所示3 治療組均降低了左、右室質量指數。從表2中可知，益心泰、開博通和復方丹參滴丸組CaN、NFAT3蛋白表達均低于模型組且高于假手術組。由此可知，益心泰抑制心室重構作用顯著，其作用機制可能是通過干預心肌細胞內CaN、NFAT3蛋白表達實現的。

益心泰丸是根據病機氣虛血瘀水停，結合導師多年臨床經驗組方而成，由黃芪、紅花、澤瀉、豬苓等組成。方中重用黃芪為君藥，既益皮膚、腠理之氣又壯臟腑之氣，補心氣、肺氣、脾氣之不足，配以紅花活血化瘀，行血中之滯為臣藥，共奏益氣活血化瘀之功。佐以澤瀉、豬苓加強利水消腫。全方以補氣、活血、利水為主，通過益氣、活血，達到補其虛，祛其瘀，利其水的目的，因方中紅花歸心經，故不再加使藥。現代藥理實驗亦證明:組成益心泰丸的諸種藥物，能很好的保護心血管系統，能增強心肌收縮力，有擴張冠狀動脈、舒張周圍血管、降低血壓、抗凝、利尿等多種作用。其舒張外周血管、降低血壓、減低左室舒張末壓力和利尿的作用，降低心臟前后負荷，減少心肌耗氧，減緩心室重構，間接改善心功能，有利于防止心功能的進一步減退。

總之，本研究表明益心泰降低心肌梗死后大鼠心室重構指數，干預心肌梗死后心室重構可能與其降低了CaN、NFAT3蛋白表達有關，其作用機制可能是通過阻斷CaN-NFAT3信號傳導通路實現的。

[1]趙 鵬，朱興雷.急性心肌梗死與左室重構[J].國際內科學雜志，2007，34（1）：17.

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