針刺對肥胖大鼠血中瘦素、神經肽Y表達的影響

何仁勝 方春華 常 城 劉少平

（湖北省黃石市中心醫院，湖北 黃石 435000）

本實驗過以高脂飼料喂養的方法制造單純性肥胖大鼠模型，并采取穴位電針刺激方法，觀察電針刺激對大鼠攝食量、體質量的影響，并檢測血液中瘦素（Leptin）、神經肽Y（NPY）等攝食和能量代謝相關激素的變化。

1 材料與方法

1.1 動物 健康剛斷乳的SD雄性大鼠38只，體質量65～80 g，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。

1.2 試劑與儀器 Leptin放免試劑盒，購于北京科美東雅生物技術有限公司。NPY放免試劑盒，購于北京科美東雅生物技術有限公司。G805電針治療儀，福建醫療器械廠生產。

1.3 分組與造模 隨機分為兩組，對照組8只，普通飼料喂養，高脂組30只，高脂飼料喂養 （普通飼料60%、豬油 12%、蔗糖 5%、奶粉 5%、花生 5%、雞蛋10%、麻油1%、食鹽2%）［1］。動物居住環境溫度控制在25～30℃，濕度適宜，通風良好，明暗周期12 h，所有大鼠在造模期間自由攝食和飲水，每日晨暮各更換1次食水。每日記錄攝食量、飲水量，每周定時測量體質量。14周后，若高脂組大鼠體質量超過空白組大鼠平均體質量的20%，且其體質量連續2周內周增幅＞10 g認為單純性肥胖大鼠模型造模成功。有15只大鼠造模成功。將造模成功的大鼠隨機分為兩組，模型組7只，針刺組8只。

1.4 針刺方法 針刺時間固定在每日下午3∶00～5∶00，由專人操作。將實驗組大鼠放入自制的固定器中固定，用75%酒精消毒后，用36號美容針直刺雙側后三里5 mm，直刺雙側內關穴1 mm，接通G805電針治療儀，采用頻率為15 Hz，強度為1.5 V的連續波，每穴刺激時間為15 min，每日1次，連續治療4周。模型組和對照組大鼠采取同樣的方式每日固定15 min。在為期4周的針刺過程中，控制環境溫度在25～30℃，模型組和針刺組大鼠繼續以高脂飼料喂養，對照組大鼠用普通飼料喂養，所有大鼠在造模期間自由攝食和飲水，每日晨暮各更換1次食水。每日記錄攝食量、飲水量，每周定時測量體質量。

1.5 標本采集與檢測 實驗結束后，將大鼠禁食過夜，次日早晨斷頭處死，同時留取血樣。（1）Leptin測定：取全血 2 mL，37℃放置 30 min后，3000 r/min，4℃離心 5 min，分離血清，采用非平衡法，具體操作按說明書進行，用放射免疫計數器計數，由高年資專業放射免疫技師操作。（2）NPY測定：取全血3 mL，注入含10%EDTA Na230 μL和抑肽酶40 μL的試管中，4℃ 3000 r/min離心10 min，分離血漿。為排除蛋白質的干擾，采取酸性乙醇提取法，具體步驟如下：取血漿0.5 μL加1 μL酸性無水乙醇（100 mL無水乙醇+冰醋酸1.2 mL），放震蕩器上震蕩1 min，4℃離心15 min，將上清倒入青霉素瓶內，在45℃水浴鍋上蒸干（24 h即可完全干燥）封口，－20℃保存。測定前每瓶加入pH7.4 PBS 0.5 μL溶解，混勻，倒入試管，－20℃ 4 h以上完全凍結，然后放置4℃溶解，取上清200 μL測定用，測定采用非平衡法，具體操作按說明書進行，用放射免疫計數器計數，由專業高年資放射免疫工作者操作。

2 結 果

2.1 一般情況 實驗過程中，對照組和針刺組大鼠各死亡1只。對照組大鼠活潑好動，皮毛清潔有光澤；肥胖組大鼠行動遲緩，皮毛油膩污穢，對外界反應遲鈍；針刺組大鼠反應稍遲緩，皮毛色澤暗，但比模型組有光澤。

2.2 穴位電針刺激對大鼠體質量和攝食的影響 在針刺開始前，針刺組和模型組大鼠的平均攝食量都為25 g/d，針刺1周后針刺組大鼠的平均攝食量為16 g/d，并持續此水平直至實驗結束，但模型組大鼠的攝食量卻并沒有明顯變化（見圖1）。如表1所示，在為期4周的針刺過程中，對照組和肥胖組大鼠體質量緩慢上漲，而針刺組大鼠體質量在逐漸減少。針刺第1周后即可發現針刺組大鼠和肥胖組大鼠的體質量有明顯的差異（P＜0.05）。

圖1 電針刺激對大鼠攝食量的影響

表1 各組大鼠針刺不同時期體質量比較（g，）

表1 各組大鼠針刺不同時期體質量比較（g，）

與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.3 穴位電針刺激對大鼠血中NPY和Leptin水平的影響 見表2。經過四周的體表穴位電針刺激后，針刺組大鼠血中Leptin和NPY水平，明顯低于模型組；雖然針刺組NPY和Leptin水平依舊高于對照組大鼠，但是無統計學意義（P＞0.05）。

表2 各組大鼠血中NPY和Leptin水平比較（）

表2 各組大鼠血中NPY和Leptin水平比較（）

3 討 論

肥胖癥是一個以脂肪過多儲存為主要表現的慢性疾病常伴有代謝紊亂、代謝調節和神經及內分泌的異常。Leptin是一種主要由白色脂肪組織分泌的蛋白質類激素，它是肥胖基因（OB基因）的編碼產物。其不但存在于胃主細胞和壁細胞，也存在胃底的內分泌細胞中。故從某種意義上來說，Leptin也可以算一種胃腸肽類激素。Leptin由脂肪組織分泌后，進入血液循環。其通過與下丘腦相關的反饋環實現抑制攝食作用。研究表明Leptin水平的高低與體內脂肪組織蓄積成直接比例關系。NPY是1982年首次從豬腦中提取的一種含36個氨基酸的單鏈多肽，屬胰多肽家族。現在認為NPY參與攝食的啟動與維持，是下丘腦中最重要的食欲促進因子，在下丘腦食欲調節網絡中起著重要的作用。

本實驗采取孫志等［1］推薦的高脂飼料配方，用剛斷乳的SD雄性大鼠（約1月齡）造模，由于這些大鼠未曾接受過普通飼料喂養，故對高脂飼料較為適應。由于遺傳、個體差異等方面的影響，14周后，30只大鼠中只有15只制作單純性肥胖模型成功，造模成功率為50%。本實驗觀察到，經過1周持續規律的電針穴位電針刺激后，單純性肥胖大鼠的體質量以及攝食量即可明顯下降，而持續四周的穴位電針刺激可以使單純性肥胖大鼠的體質量持續下降，但攝食量卻無明顯變化。另外，本實驗檢測到單純性肥胖大鼠血清Leptin和NPY表達量比正常對照組明顯升高，并且體表后三里和內關穴位電針刺后針刺治療后針刺組肥胖大鼠血Leptin和NPY表達下降。實驗顯示針刺可以影響單純性肥胖大鼠體質量和攝食量同時伴隨有血液中NPY和Leptin水平的改變，并且這種變化并不是由于應激的影響［2］，提示電針刺激可能通過調整肥胖大鼠能量代謝的重要信號分子之一NPY水平，發揮減輕體質量和抑制食欲作用，而肥胖大鼠體質量下降的同時，可能是因為反饋調節，Leptin水平隨之下降。

［1］孫志，張中成，劉志誠.營養性肥胖動物模型的實驗研究［J］.中國藥理學通報，2002，18（4）：466-467.

［2］Zhang Y，Proenca R，Maffei M，et al.Positional cloning of the mouse obese gene and it shumanhomologue［J］.Nature.1994，372：425.