人參仿生化提取物與水提取物安全性對比研究

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(1.長春中醫藥大學藥學院，吉林 長春 130117；2.長春中醫藥大學碩士研究生，吉林 長春 130117)

人參仿生化提取物與水提取物安全性對比研究

陳新1，嚴瓊曉2，張秀娥2

(1.長春中醫藥大學藥學院，吉林 長春 130117；2.長春中醫藥大學碩士研究生，吉林 長春 130117)

目的：考察人參仿生化提取物的安全性，并與水提取物進行對比分析。方法:采用紫外分光光度法，以溶血率為指標對比2種提取物的溶血性；以小鼠自然情況為指標對比2種提取物的急性毒性。結果:人參仿生化提取物溶血率較高；小鼠無異常情況、中毒癥狀及死亡發生。結論:2種提取物均有溶血作用，仿生提取物的溶血作用較水提取物強；2種提取物均未顯示急性毒性反應，在臨床常用劑量范圍內使用安全。

人參仿生化提取物;紫外分光光度法;溶血試驗;急性毒性試驗

人參中含有人參皂苷，人參皂苷按照苷元結構不同可分為A、B、C 3種，其中A型有抗溶血作用，而B、C型則有顯著的溶血作用。隨著對人參皂苷研究的深入，其溶血作用逐步成為關注的熱點。本實驗通過溶血試驗和小鼠急性毒性試驗來研究人參仿生化提取物的安全性。

1 材料與儀器

1.1 藥材 本品采集于吉林省撫松縣，經長春中醫藥大學中藥鑒定室鑒定為五加科植物人參Panax.GinsengC.A.Meyer的干燥根。經檢驗，藥材符合《中國藥典》(2010：8)。

1.2 試藥與試劑 正丁醇、氯化鈉、鹽酸、蒸餾水、胃蛋白酶、生理鹽水，所用試劑均為分析純。

1.3 儀器與設備 電熱恒溫水浴鍋(黃石市恒豐醫療器械有限公司)、真空干燥箱(上海一恒科技有限公司，DZF-6050型)、METTLER TOLEDO萬分之一天平、METTLER TOLEDO十萬分之一天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司,PB303-S型)、高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司，FW100型)、紫外分光光度計(美國瓦里安公司，TU-1810型)、飛鴿離心機(上海安亭科學儀器廠,TDL80-2B型)、數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，KQ-250DB型)。

1.4 超微粉的制備 取人參普通粉適量，置超微粉碎機內粉碎，經超微粉碎，得人參超微粉。

1.5 實驗動物 健康昆明種小鼠，體質量(20±2)g，合格證號：SCXK-(吉)2008-2009，家兔1只，體質量3 kg，合格證號:SCXK-(吉)2008-0009，均由長春高新醫學實驗動物研究中心提供。實驗室飼養環境：室溫(22±2)℃，相對濕度(45±10)%。

2 實驗方法

2.1 提取物制備

2.1.1 溶血試驗水提取物制備 稱取人參超微粉4.0 g，10倍量水浸泡24 h，超聲提取2次，每次20 min，提取后離心，合并上清液，備用。精密量取上清液10 mL,用水飽和正丁醇萃取3次，每次10 mL，合并正丁醇層溶液，蒸干，用2 mL生理鹽水溶解，即得。

2.1.2 溶血試驗仿生化提取物制備 稱取人參超微粉4.0 g，用仿生提取液(由氯化鈉、鹽酸、胃蛋白酶、水組成)10倍量37 ℃水浴溫浸提取60 min，離心，上清液備用。精密量取上清液10 mL，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10 mL，合并正丁醇層溶液，蒸干,用2 mL生理鹽水溶解，即得。

2.1.3 急性毒性試驗水提取物制備 按生藥量折算，提取相當于臨床日用量(1 g/kg)的90.91倍，即含量為90.91 g/kg。稱取人參超微粉適量，10倍量水浸泡24 h,超聲提取2次，每次20 min，提取后離心，合并上清液，備用。

2.1.4 急性毒性試驗仿生提取物制備 按生藥量折算,提取相當于臨床日用量(1 g/kg)的90.91倍，即含量為90.91 g/kg。稱取人參超微粉適量，用仿生提取液10倍量37 ℃水浴溫浸提取60 min，離心，上清液備用。

2.2 溶血試驗

2.2.1 2%紅細胞混懸液的配制 取10 mL新鮮兔血加1 mL肝素,離心5 min(3 000 r/min)，棄去上清液，下層用生理鹽水洗滌，離心，棄去上清液，反復洗滌至上清液無紅色為止。棄去上清液，下層取2 mL加100 mL生理鹽水制成2%紅細胞混懸液[1]。

2.2.2 最大吸收波長的測定 取紅細胞混懸液2 mL，加入10 mL蒸餾水振搖使其充分溶血[2]。取溶液適量在200～800 nm處進行全波長掃描，其在545 nm處有最大吸收，作為本實驗的檢測波長。

2.2.3 溶血陽性現象 取紅細胞混懸液2 mL，加入10 mL蒸餾水振搖，溶液呈紅色，顏色均一，澄清，無混懸。

2.2.4 溶血陰性現象 取紅細胞混懸液2 mL，加入10 mL生理鹽水振搖，溶液混懸，離心后紅細胞沉積于底部，上層溶液澄清無色。

2.2.5 實驗方法 取試管4支，按實驗方案加入各種溶液,分別搖勻。分別取2.1.1及2.1.2項下提取物適量，以生理鹽水為空白對照溶液，用紫外分光光度法在545 nm處測定各組吸光度[3]，計算各組溶血率I值。

2.3 急性毒性試驗[4]采用擬推薦臨床試驗的給藥途徑，以動物能耐受的最大濃度、最大體積的藥量一次給予動物。選用18～22 g的健康昆明種小鼠60只,隨機分成3組，雌雄各半，每組20只，即空白對照組:等量蒸餾水；人參超微粉仿生提取物劑量組(2.1.4項下)；人參超微粉水提取物劑量組(2.1.3項下)。試驗前12 h禁食不禁水，各組小鼠灌胃給藥(水)，以上小鼠均按0.4 mL/10 g(體質量)的劑量灌胃給藥,連續觀察7 d，詳細記錄動物反應情況。

3 實驗結果

3.1 溶血試驗結果 照2.2項下進行試驗，人參提取物溶血試驗結果，人參超微粉水提取物及仿生提取物均有不同程度的溶血作用，且仿生提取物的溶血作用較水提取物強[5]。

3.2 急性毒性試驗結果 參照2.3項下進行試驗，結果見表1。

表1 急性毒性試驗結果(n=20)

4 小結

本試驗中仿生化提取物的溶血率較水提取物大，證明仿生化提取物的溶血作用強于水提取物，由此可推測仿生化提取物中所含的溶血成分高于抗溶血成分，致使混合皂苷產生較強溶血作用，而水提取物中溶血成分與抗溶血成分相對平衡，混合皂苷溶血作用則相對較弱，也為進一步研究人參皂苷溶血作用提供了實驗基礎。[6-7]

[1]楊光,項崢,康廷國,等.人參皂苷溶血測定的實驗條件研究[J].遼寧中醫藥大學學報,2008,10(6):190-191.

[2]程大任,付銳,竇德強,等.人參皂苷溶血及抗溶血作用研究[J].中國現代中藥,2007,9(4):19-23,26.

[3]程大任.西洋參莖葉化學成分及人參皂甙溶血規律研究[D].遼寧中醫藥大學,2007.

[4]唐姍,孫家明,律廣富,等.通頂散及其拆方急性毒性實驗研究[J].吉林中醫藥,2012,32(8):825.

[5]唐姍,孫佳明,張輝.人參降糖活性的體外評價方法研究進展[J].吉林中醫藥,2011,31(12):1246-1248.

[6]鄭維玲,張永和.人參不同部分的提取物對心血管作用的藥理研究[J].吉林中醫藥,2009,29(4):328-329.

[7]孫聰,曾鵬濤,李天一，等.正交實驗法優選人參總皂苷提取工藝的研究[J].長春中醫藥大學學報,2012,28(6):533-534.

R284.3

A

1007-4813(2013)03-0393-02

吉林省科技發展計劃重點項目(編號:20110908)。

陳 新(1965-)，女，副教授，碩士研究生導師。研究方向：中藥及天然產物基礎研究及應用開發。

2012-12-17)