HPLC法測定厄洛替尼片的含量

胡劍鋒（江蘇省盛澤醫院，江蘇吳江 215228）

肺癌已成為嚴重威脅人們生命和健康的疾病，其中非小細胞肺癌占肺癌總數的75%～80%，約1/3的患者一經確診即為晚期肺癌[1]。厄洛替尼（Erlotinib）是近年上市的治療晚期非小細胞肺癌的藥物，在國際及國內肺癌指南中厄洛替尼均被列為晚期非小細胞肺癌的二線治療藥物之一[2]。藥品的質量直接決定了藥物的治療效果，并且與藥品的毒副反應密切相關，因此對藥品質量進行檢測和控制是十分必要的，其中制劑含量測定是藥品質量控制的重要組成部分之一。筆者查閱相關文獻和報道，未見關于厄洛替尼制劑含量測定方法的報道及研究，所以本文以厄洛替尼為指標成分，建立了厄洛替尼片中厄洛替尼含量測定的高效液相色譜（HPLC）法，采用紫外檢測器在342 nm波長處進行檢測，以期為該制劑的質量控制提供有效的含量考察方法。結果表明，本方法操作簡便、結果準確，可用于該制劑中厄洛替尼的定量分析。

1 材料

1200型HPLC儀（美國Agilent公司）；5210DT超聲處理器（上海金力超聲波儀器廠，功率：250 W，頻率：33 kHz）；AUW-220D電子天平（日本島津公司）；pH計（瑞士Mettler Toledo公司）。

厄洛替尼對照品（美國Selleck公司，批號：PEA1023674，純度：99%）；厄洛替尼片（南京醫藥有限公司，批號：110510、110515、110520，規格：每片150 mg）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomexex Luna-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-pH 3.5磷酸鹽緩沖液（25∶75，V/V），流速：1.0 ml/min；檢測波長：342 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。厄洛替尼與相鄰雜質峰的分離度應不小于1.2，厄洛替尼峰的拖尾因子應不大于1.5，理論板數按厄洛替尼峰計應不低于5000。

2.2 對照品及樣品溶液的制備

2.2.1 對照品貯備溶液的制備。精密稱取厄洛替尼對照品10 mg，置于100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備。精密吸取對照品貯備液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液。取厄洛替尼片2片，置于研缽中研細，精密稱取適量（約含厄洛替尼10 mg），置于100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，0.22 μm的微孔濾膜濾過；精密吸取續濾液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 空白溶液的制備。取處方量輔料，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，0.22 μm的微孔濾膜濾過；精密吸取續濾液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法專屬性考察

分別取空白溶液和厄洛替尼對照品溶液各20 μl，注入色譜儀，記錄色譜。結果，空白溶液在與厄洛替尼對照品溶液主峰相同的保留時間處未見色譜峰出現，表明輔料對樣品的測定無干擾，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關系考察

精密吸取厄洛替尼對照品貯備液適量，定量稀釋成10、20、40、60、80、100 μg/ml的溶液，分別進樣20 μl。以厄洛替尼質量濃度（c）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：A＝28221.6c+50443.1（r＝0.9999）。表明厄洛替尼檢測質量濃度線性范圍為10～100 μg/ml。

2.5 精密度試驗

精密吸取20 μg/ml的厄洛替尼對照品溶液，連續進樣5次，結果峰面積的RSD＝0.50%（n＝5），表明精密度良好，符合要求。

2.6 溶液穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h進樣，記錄色譜圖。結果，RSD＝0.66%（n＝7），表明供試品溶液在12 h內比較穩定。

2.7 加樣回收率試驗

按照處方比例，取高（120%）、中（100%）、低（80%）3種不同量的厄洛替尼對照品，分別加入處方量的輔料，過120目篩混合均勻，精密稱取粉末適量（約相當于頭孢地尼8、10、12 mg），按“2.2.3”項下方法制備處理后（每個濃度2份樣品），進樣20 μl，記錄色譜；另取對照品溶液，同法測定。按外標法計算3種樣品中厄洛替尼的回收率。結果分別為100.26%、100.27%、100.56%，平均值為100.36%，RSD＝0.62%（n＝6），詳見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.8 重復性試驗

取同一供試品溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定。按外標法計算樣品的含量，測得的含量平均值為99.11%，RSD＝0.72%，表明本方法的重復性良好。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品按“2.2.3”項下方法制備處理后進樣分析，供試品色譜見圖1C（批號：110510）。含量測定結果分別為99.67%、99.92%、100.13%。

3 討論

3.1 檢測波長選擇

厄洛替尼在水中的溶解性較差，所以采用甲醇為溶劑來溶解厄洛替尼。以甲醇配制的厄洛替尼對照品貯備液再用水稀釋為對照品溶液，取此溶液于200～800 nm波長范圍內進行紫外掃描。結果發現厄洛替尼在波長為342、261 nm處有最大吸收，但是在342 nm處的吸收干擾更小。故選擇厄洛替尼的檢測波長為342 nm。

3.2 流動相選擇

目前在國內鮮有關于厄洛替尼含量檢測方面的研究報道。筆者查閱了國內外的相關文獻，對流動相進行了篩選[1，3-4]，并且進行了優化。試驗結果表明，以甲醇-pH 3.5磷酸鹽緩沖液（25∶75，V/V）為流動相，效果最佳。

綜上所述，本方法操作簡便、專屬性較強、回收率好，為厄洛替尼原料藥及片劑的含量測定提供了有效的質量控制依據。

[1]黃逸生，周志凌，雷麗嬋，等.高效液相色譜質譜串聯法檢測厄洛替尼濃度[J].中南藥學，2011，11（9）：801.

[2]吳一龍，陸舜，周清華，等.2010中國肺癌臨床指南[M].北京：人民衛生出版社，2010：78.

[3]Bouchet S，Chauzit E，Ducint D，et al.Simultaneous determination of nine tyrosine kinase inhibitors by 96-well solid-phase extraction and ultra performance LC/MS-MS[J].Clin Chim Acta，2011，412（11/12）：1060.

[4]Chahbouni A，den Burger JC，Vos RM，et al.Simultaneous quantification of erlotinib，gefitinib，and imatinib in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Ther Drug Monit，2009，31（6）：683.