替米沙坦聯(lián)合氨氯地平對腎性高血壓大鼠左室重構的對比研究*

馬香芹 黃顯峰 盧澤愷 張 琨 唐滋貴 胡新輝 付國輝 楊紅梅

左室重構已被確認為是高血壓患者發(fā)生心力衰竭、腦血管意外、腎功能損害等嚴重并發(fā)癥的獨立危險因素[1]。在高血壓的治療過程中，除降壓外，還要盡可能延緩左室重構，防止心肌結構發(fā)生有害改變。目前，只是用單一降壓藥治療高血壓已經(jīng)不能滿足需求，尋找有效的聯(lián)合用藥降低血壓、阻止或逆轉左室肥厚成為高血壓治療的新趨勢[2-3]。研究表明替米沙坦[4]和氨氯地平[5]在降壓的同時均有阻止或逆轉左心室肥厚的作用，但有關兩者聯(lián)合應用對左心室重構的影響尚少見報道。本研究通過替米沙坦和氨氯地平聯(lián)合應用對腎性高血壓大鼠左室重構的影響，旨在為臨床應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性清潔級SD大鼠50只，體質量150～180 g，購自河南省實驗動物中心，合格證號：SCXK(豫)2010-0002。Thermo Multiskan MK3（芬蘭雷勃）；XH100型清醒大鼠血壓測量裝置（北京新航）；BL-420F生物信號采集系統(tǒng)（成都泰盟）；D-37520型高速低溫離心機；替米沙坦片（天津華津制藥有限公司提供，生產(chǎn)批號：1M6736T），以無菌蒸餾水配制成10 mg/L溶液；苯磺酸氨氯地平片（宜昌長江藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號：1112005），以蒸餾水配制成2.5 mg/L溶液。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型的建立 大鼠適應性飼養(yǎng)10 d后，測量其基礎尾動脈壓。然后隨機分成5組：假手術組、兩腎一夾高血壓模型組（2KIC組）、替米沙坦（10 mg/kg）組、氨氯地平（2.5 mg/kg）組、替米沙坦（10 mg/kg）+氨氯地平（2.5 mg/kg）組（聯(lián)合用藥組），每組10只。以6%水合氯醛腹腔注射麻醉，從腹部左側切口，分離左腎動脈，0.3 mm針灸針與腎動脈并行放置，用1號絲線將兩者一起結扎，隨后抽出針灸針，逐層縫合傷口。右腎不涉及。假手術組只分離左腎動脈不結扎。術后1周測尾動脈壓，連續(xù)3次取平均值。術后4周動脈壓≥150 mm Hg即為兩腎一夾高血壓模型制備成功。術后4周，各給藥組連續(xù)灌胃給藥16周。期間每周測1次尾動脈壓。

1.2.2 血漿腎素活性（PRA）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、心鈉素（ANP）含量的檢測 大鼠灌胃給藥第16周末，6%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主動脈取血5 mL，迅速注入放在冷水浴冷卻的酶抑制劑抗凝管中（每支抗凝管加入50 μL EDTANa2、50 μL 8-羥基喹啉，25 μL二巰基丙醇），搖勻。PRA、AngⅡ檢測管于4℃1 000 r/min，離心5 min，ANP檢測管于4℃3 000 r/min，離心10 min，分離血漿，-25℃保存。按照酶聯(lián)免疫試劑盒說明書操作，檢測血漿AngⅡ、PRA、ANP含量。

1.2.3 左室質量指數(shù)(LVMI)的測定 第16周末取血并稱取體質量(BW)后處死，迅速取出心臟，放入預冷的生理鹽水中洗凈血液，分離連接組織和脂肪，沿房室交界處去除大血管、心房及右心室游離壁，保留左心室及室間隔，濾紙吸水后用十萬分之一電子天平稱左室質量（LVM），計算LVMI=LVM/BW。

1.2.4 心肌電鏡觀察 大鼠處死后迅速取出心臟，放入預冷的生理鹽水中洗凈血液，立即在冰蠟板上切取1 mm×1 mm×1 mm的左心室組織，放入戊二醛固定液中，4℃冰箱放置4 h后，清洗、固定、包埋、超薄切片、電子染色后透射電鏡觀察。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學處理。計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示。多組間比較用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組大鼠收縮壓的變化 各組的基礎收縮壓差異無統(tǒng)計學意義，2KIC組、氨氯地平組、替米沙坦組、聯(lián)合用藥組的給藥前收縮壓均高于假手術組（P＜0.01），灌胃給藥16周末，各給藥組收縮壓比2KIC組降低（P＜0.01）；聯(lián)合用藥組與兩單用藥組相比降壓效果更顯著（Plt;0.01），見表1。

Table 1 Comparison of systolic blood pressure and left ventricular mass index(LVMI)between five groups表1 各組大鼠收縮壓及LVMI比較 （n=10，x±s）

2.2 各組大鼠LVMI比較 2KIC組的LVMI高于假手術組，各給藥組的LVMI均低于2KIC組（Plt;0.01）；氨氯地平組和替米沙坦組的LVMI差異無統(tǒng)計學意義，但聯(lián)合用藥組的LVMI低于兩單用藥組（Plt;0.01），見表1。

Figure 1 Electron micrographs of myocardium in five groups(×10 000)圖1 各組心肌超微結構電鏡圖(×10 000)

2.3 心肌電鏡超微結構的改變 見圖1。假手術組心肌肌絲排列整齊、連續(xù)，線粒體等細胞器間距適當，結構完整，細胞核染色質分布較均勻。2KIC組大量肌絲排列紊亂、斷裂嚴重，線粒體腫脹、空泡樣變，細胞核固縮成鋸齒狀，異染色質邊集，核周隙增寬。其余3個用藥組較2KIC組好轉，聯(lián)合用藥組病變改善程度明顯優(yōu)于2個單用藥組，大部分肌纖維排列緊密，線粒體嵴突增多，排列相對適當，細胞核無邊聚。

2.4 血漿PRA、AngⅡ、ANP水平的變化 2KIC組的血漿PRA、AngⅡ、ANP含量均高于假手術組（P＜0.01），各給藥組的血漿PRA、ANP水平均低于2KIC組（Plt;0.01），氨氯地平組和替米沙坦組的血漿AngⅡ水平高于2KIC組，但聯(lián)合用藥組的血漿AngⅡ水平低于2KIC組（P＜0.01）；聯(lián)合用藥組的血漿AngⅡ、ANP含量低于兩單用藥組（P＜0.01），但血漿PRA水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

Table 2 Changes of plasma PRA,AngⅡand ANP levels in five groups表2 各組大鼠血漿PRA、AngⅡ、ANP水平的變化（n=10，ng/L，x±s）

3 討論

在高血壓治療中，聯(lián)合降壓藥物治療的最終目的不只是降低血壓，更為了降低各種心血管事件發(fā)生的危險性。氨氯地平屬于鈣離子拮抗劑，不僅能抑制血管平滑肌細胞和心肌細胞鈣離子跨膜內(nèi)流，而且可以直接作用于血管平滑肌細胞，從而降低周圍血管的阻力以及血壓。替米沙坦是新型非肽類AngⅡ受體拮抗劑，可以競爭性阻斷AngⅡ與其受體結合，從而拮抗AngⅡ引起的血管收縮，交感神經(jīng)興奮，醛固酮分泌增多等作用，降壓效果明顯平穩(wěn)。兩者聯(lián)用通過不同的作用機制降壓效果起協(xié)同作用[3，6-7]。本研究結果也表明氨氯地平和替米沙坦聯(lián)合用藥比單一用藥相的降壓效果顯著。

左室質量指數(shù)高低反映左室重構的嚴重程度，本研究結果顯示2KIC組與假手術組相比，LVMI顯著增加，且2KIC組心肌電鏡超微結構顯示大量肌絲排列紊亂，線粒體腫脹，細胞核固縮成鋸齒狀。表明2KIC組大鼠已經(jīng)出現(xiàn)左室重構。各給藥組的LVMI顯著下降，聯(lián)合用藥組與兩單用藥組相比LVMI降低更明顯；且聯(lián)合用藥組病變改善程度明顯優(yōu)于兩單用藥組。表明這兩種藥物聯(lián)用不僅降壓效果良好且能更顯著地改善高血壓左室重構。

血液腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的激活對高血壓左室重構的發(fā)生起重要作用，本研究2KIC組血漿PRA、AngⅡ含量均明顯升高，說明血壓升高使大鼠RAAS處于激活狀態(tài)。氨氯地平和替米沙坦單用藥組治療16周后，大鼠AngⅡ水平不僅未下降反而上升，可能原因為替米沙坦通過阻斷AngⅡ與其受體的結合發(fā)揮降壓作用，導致血漿AngⅡ由于結合減少而游離濃度增加。鈣離子拮抗劑中的不同藥物及其不同劑量對RAAS的影響,結果都不盡相同[8-9]。本研究氨氯地平降低血漿PRA水平，升高AngⅡ含量，但替米沙坦聯(lián)合氨氯地平給藥組血漿AngⅡ水平顯著下降，提示聯(lián)合用藥療效優(yōu)于任何單一用藥，能更加徹底抑制RAAS，進一步降低血壓和逆轉左室重構，其作用機制尚需進一步研究。

[1]Dolinsky VW,Morton JS,Oka T,et al.Calorie restriction prevents hypertension and cardiac hypertrophy in the spontaneously hyper?tensive rat[J].Hypertension，2010，56(3)：412-421.

[2]Bakris GL,Sarafidis PA,Weir MR,et al.Renal outcomes with differ?ent fixed-dose combination therapies in patients with hypertension at high risk for cardiovascular events(ACCOMPLISH):a prespeci?fied secondary analysis of a randomised controlled trial[J].Lancet，2010,375(9721):1173-1181.

[3]Lu F,Zhao Y,Liu Z,et al.A 48-week study of amlodipine plus amiloride/hydrochlorothiazide vs amlodipine plus telmisartan in the treatment of hypertension[J].Int J Clin Pract，2012,66(8):792-799.

[4]Goyal BR,Mehta AA.Beneficial role of spironolactone,telmisartan and their combination on isoproterenol-induced cardiac hypertrophy[J].Acta Cardiol,2012,67(2):203-211.

[5]Shang W,Han P,Yang CB,et al.Synergism of irbesartan and amlo?dipine on hemodynamic amelioration and organ protection in sponta?neously hypertensive rats[J].Acta Pharmacol Sin,2011,32(9):1109-1115.

[6]Liu W,Wang W,Song SW,et al.Synergism of telmisartan and amlo?dipine on blood pressure reduction and cardiorenal protection in hy?pertensive rats[J].J Cardiovasc Pharmacol,2011,57(3):308-316

[7]Ley L,Schumacher H.Telmisartan plus amlodipine single-pill com?bination for the management of hypertensive patients with a meta?bolic risk profile(added-risk patients)[J].Curr Med Res Opin,2013,29(1):41-53.

[8]L’Allier PL,Ducharme A,Keller PF,et al.Angiotensin-converting enzyme inhibition in hypertensive patients is associated with a re?duction in the occurrence of atrial f ibrillation[J].J Am Coll Cardiol,2004，44（1）:159-164.

[9]Tardif JC,Ducharme A,Yu H,et al.Retrospective longitud inalcohort study comparing the effects of angiotensin-converting enzyme inhib?itors and long-acting calcium channel blockers on total and cardio?vascular mortality in patients with hypertension[J].Clin Ther,2004，26（7）:1073-1083.