三酰甘油與總膽固醇試劑對總膽汁酸測定的干擾

黃江兵 黃明珠

廣東省湛江中心人民醫院，廣東湛江 524037

目前，使用全自動生化分析儀進行總膽汁酸（TBA）測定已極為普遍，但在樣品檢測時發現，先進行三酰甘油（TG）和總膽固醇（TC）試劑檢測，再進行總膽汁酸測定時所獲結果升高，甚至出現假陽性結果[1]。為具體研究三酰甘油和總膽固醇試劑對總膽汁酸測定的干擾，以及試劑針、攪拌棒和比色杯清洗對結果的影響，本研究采用同一批血清，單獨測量或在TC、TG測量后立刻進行TBA檢測，并使用0.5%次氯酸鈉、無水乙醇和鹽酸對試劑針和比色杯進行清洗，以觀察其對總膽汁酸的干擾作用。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑

美國MD2000型全自動生化分析儀；酶法循環TBA液體雙試劑 （羅氏診斷上海有限公司生產，批號10063/901006/1）；TC、TG 單試劑（德國 Centronic公司生產，南京威特曼公司分裝，批號0609010、0609020）；生理鹽水；蒸餾水；樣品為Randox質控血清。

1.2 實驗方法

（1）對儀器全部清洗Wash All后，以TBA配套校準品定標，單獨連續測定Randox2質控血清10次，以其均值作為實驗對照；（2）先測量TC或TG后，再測量TBA，以評估TC、TG對TBA的污染；（3）設定特殊檢測和清洗程序，按生化儀設計，在菜單上選擇“干擾”，在第一、第二對話框下分別添加 TBA 和 TC、TG，測量 TC、TG 后，測量 TBA；（4）同（3）檢測和清洗之外，增加試劑針的專門清洗；（5）同（3）外，增加比色杯的專門清洗；（6）同（3）外，同時增加比色杯和試劑針的專門清洗。以上方案均連續測量10次，以其平均值為最終測量值。同時進行TC、TG試劑中TBA含量的測定。

增加測定通道，在TC、TG測量完成后，連續10次測定TBA值，觀察測定通道對干擾的消除。

測定TC、TG試劑中TBA含量，并與生理鹽水比較。

1.3 統計分析

儀器檢測全部完成后，雙擊桌面“康金實驗室管理系統”將結果存入報告軟件中。數據導入SPSS 19.0軟件，進行分析。數據以±s進行描述，兩兩比較選擇配對資料t檢驗進行。

2 結果

2.1 單獨測量質控血清的結果

單獨測量質控血清TBA為（20.34±4.66）μmol/L。

2.2 TG對TBA的影響

先測量TG后再測量TBA，其均值為（64.33±3.22）μmol/L，與對照相比差異有統計學意義。經過特殊清洗及增加比色杯和試劑針清洗后，TBA測量值與正常比較無區別 （P>0.05）（表 1）。

表1 TG測量后不同處理對TBA測量的影響

2.3 TC測量對TBA的影響

先測量TC后再測量TBA，其均值為（56.34±3.56）μmol/L，與對照相比差異有統計學意義。經過特殊清洗后，仍高于對照（P<0.05），但增加比色杯和試劑針清洗后，TBA測量值與正常比較無區別（P>0.05）（表 2）。

表2 TC測量后不同處理對TBA測量的影響

2.4 TC、TG測量后連續10次TBA含量

先進行TC、TG測量后連續10次TBA含量，可以看到前6次結果與對照之間差異有統計學意義 （P<0.05），從第7次開始，差異性消失（P>0.05），但測量值仍有輕微區別（表 3）。

2.4 TC、TG試劑中干擾物質TBA含量測定

對TC、TG試劑進行TBA檢測，并以生理鹽水為對照，結果發現，生理鹽水中TBA為0.1μmol/L，TC中TBA含量為803μmol/L，TG中TBA為732μmol/L，均高于生理鹽水（P<0.01）。

3 討論

TBA是人體肝臟分解代謝產物，其測定對肝硬化、膽汁淤積等疾病診斷治療和預后具有重要意義。由于目前生化測定儀采用第五代循環酶放大法，其靈敏度高，假陽性率也相應增加[2]。隨著儀器使用時間的延長，樣品、試劑甚至底物之間的交叉污染也日益嚴重[3]。交叉污染的來源又常以試劑針和比色杯多見。雖然生化儀自身設有清洗程序，但MD2000型全自動生化分析儀的清洗效果還有待驗證，本實驗即對此進行了探討。

表 3 TC、TG 測量后連續 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

表 3 TC、TG 測量后連續 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

注：與對照相比，*P<0.05、**P<0.01

連續測定次數 TC處理后TBA值 TG處理后TBA值對照1234567891 0 20.34±4.66 55.65±1.34**43.56±4.55**34.32±2.45**27.15±7.66**26.43±5.44*24.32±3.98*23.25±1.43 21.34±4.65 20.53±3.53 20.42±1.32 20.34±4.66 62.36±3.27**54.26±3.98**45.28±1.54**32.76±2.76**28.13±4.23**25.35±3.78*23.27±3.87 22.18±3.62 20.99±4.37 20.51±1.58

研究發現，對MD2000產品來說，TC或TG對后續的TBA存在嚴重的干擾。曾有學者報道日立公司7170型全自動生化分析儀也存在同樣問題[4]。與日立系列不同的是，MD生化分析儀經過系統自設的清洗程序就可以大大減少干擾的存在[5]。尤其是TG干擾，僅需設定自動清洗程序即可達到抗干擾效果。但對數據仔細分析仍可以看到，雖然固定清洗后TBA測量值已與對照之間無區別，但測量值仍略高于對照，即使單獨增加試劑針清洗或比色杯清洗，該趨勢仍然存在。而在固定清洗程序聯合試劑針、比色杯清洗后，其測量值接近對照，說明使用MD2000對TBA、TG測量時，如選擇聯合清洗程序，其誤差可以忽略不計。

TC測量對后續的TBA也有影響。使用固定清洗程序后，其干擾仍然存在。甚至在增加試劑針和比色杯清洗后，其顯著性仍接近0.05。但在同時增加試劑針很比色杯清洗后，顯著性消失，說明TC污染可能同時出現在這兩個部位，單純一個位置的清洗不能完全消除該影響[6]，應該進行全面處理。

對測量間隔的分析可以看到，TG、TC測量后經過6次測量，其干擾仍然存在[7]。從第7次開始，所獲結果才與對照之間沒有區別（P＞0.05），但數值上仍有輕微差異。因此若要通過TG、TC測量后增加通道來減少TBA測量誤差，至少需要增加6通道[8]。對于某些患者血清TBA在臨界值附近的可疑患者，更應該加以注意，最好在增加通道的同時加以儀器的清洗。

對TG、TC試劑的TBA測試可用看到，這兩種因素對TBA的干擾是由于試劑本身的因素造成的，在目前的技術條件下，很難從根本上預防。只能通過優先測量TBA[9]或上述的儀器清洗和增加通道來盡量減少污染，若要完全消除，只能期待技術的進一步提高。

[1]丁雙雙，汪皓，沈霞.HDL-C試劑干擾血清總膽汁酸測定結果的原因分析及對策[J].檢驗醫學，2011，26（3）：215-217

[2]王春雷，陸文英，張波.常規生化試劑對總膽汁酸測定的干擾分析[J].實用醫技雜志，2007，14（22）：2974-2975.

[3]孟令章.總膽固醇三酰甘油試劑對總膽汁酸測定的交叉污染及對策[J].西部醫學，2010，22（7）：1308-1310.

[4]鄧正輝，張華，李龍平.生化試劑對膽汁酸測定的交叉污染及防范措施[J].中國實用醫藥，2008，3（10）：55-56.

[5]崔軍.甘油三酯和總膽固醇試劑對總膽汁酸檢測結果的影響[J].華西醫學，2010，25（7）：1328-1310.

[6]馬菊芬，李建忠.總膽固醇 甘油三酯試劑對總膽汁酸測定結果的影響[J].長冶醫學院學報，2007，21（5）：383-384.

[7]梁耀榮，謝國強.生化試劑對循環酶法測定血清總膽汁酸的干擾因素分析及改進措施[J].現代醫院，2012，12（2）：64-66.

[8]向學優，王新華，湯建華，等.尿酸試劑攜帶污染對總膽汁酸測定結果的影響[J].中華醫護雜志，2006，3（2）：180-181.

[9]郁淼，張莉，秦兵.通過試驗設計提高總膽汁酸檢測試劑盒的抗干擾性[J].檢驗醫學與臨床，2012，9（6）：727-728.