高效液相色譜法測定枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑在大鼠組織內的分布

朱 玲，邵彥江，李 敏，崔文琪，阿有梅，高珊珊，張振中

鄭州大學藥學院鄭州450001

#通訊作者，男，1964年11月生，博士，教授，研究方向:腫瘤納米給藥系統研究，E－mail:zhangzhenzhong@zzu.edu.cn

他莫昔芬屬于三苯乙烯非甾體抗雌激素類抗腫瘤藥物，用于治療乳癌［1－2］。他莫昔芬脂溶性強，口服后易在體內蓄積，不良反應較多，特別是對子宮和卵巢影響最大［3－4］。作者旨在研究枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經大鼠乳腺周圍組織皮膚局部給藥后在大鼠體內組織分布的特征，為枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑的進一步研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、材料及儀器 雌性SD 大鼠50 只，體質量(250±30)g，購自河南省實驗動物中心，動物合格證編號SCXK(豫)2005－0001。枸櫞酸他莫昔芬對照品(阿利斯康中國公司，純度99.8%);枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑(自制，質量分數1%);1100型高效液相色譜系統(Agilent 公司，美國)。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent ODS C18(5 μm，4.6 mm× 250 mm);柱溫:25℃;流動相:甲醇和體積分數為1%三乙胺水溶液(體積比89 ︰11)，冰乙酸調節pH 至8.5;流速1.0 mL/min;檢測波長280 nm，參比波長376 nm;進樣量30 μL。

1.2.2 樣品處理組織樣品與Tris－HCl 溶液(Tris 6 g/L)混合勻漿，乳腺及卵巢組織每0.1 g 加入Tris－HCl溶液1 mL，子宮及肝臟組織每0.1 g 加入Tris－HCl 溶液0.5 mL。取漿液0.5 mL，加入甲醇1.5 mL，渦旋振蕩3 min，離心(6 000 g)15 min，棄上清，56℃下氮氣流吹干。殘渣用100 μL 甲醇溶解，渦旋振蕩1 min，離心(8 000 g)15 min，取上清液進行分析。

1.2.3 方法學驗證 精密稱取枸櫞酸他莫昔芬對照品12.81 mg(約相當于“他莫昔芬”8.43 mg)，配制對照品貯備液，精密量取貯備液，以適量甲醇進行稀釋，得系列濃度的對照品溶液;參照1.2.2 樣品處理方法，以對照品溶液和空白組織勻漿液制備標準曲線樣品及質控樣品，考察標準曲線、準確度、精密度及樣品的穩定性。

1.3 實驗分組與他莫昔芬大鼠體內分布考察 SD大鼠50 只，隨機分成實驗組和對照組各25 只。給藥前3 d 備皮，給藥前禁食12 h，自由飲水。對照組灌胃給予濃度為0.8 g/L 枸櫞酸他莫昔芬丙二醇溶液，給藥劑量為10 mg/kg。實驗組按50 mg/kg 的劑量給藥(該劑量與口服10 mg/kg 枸櫞酸他莫昔芬丙二醇溶液后血漿的達峰濃度水平接近［5］)，將枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑均勻涂布于大鼠乳腺組織周圍(藥物涂布總面積為12～16 cm2)。2組均每24 h給藥1 次，連續給藥3 d，并于末次給藥后0、4、8、12、24 h 腹腔注射濃度為0.05 g/mL 的水合氯醛溶液處死大鼠，每個時間點處死5 只，剖取乳腺、肝臟、子宮及卵巢等組織。生理鹽水沖洗組織表面浮血，用濾紙吸干水分后精密稱取質量并記錄，置于－70℃冰箱避光保存。按1.2.3 處理樣品，進行分析。

1.4 統計學處理 采用SPSS 15.0 處理數據，對2組各時間點藥物濃度的比較采用兩獨立樣本的t 檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 方法學考察

2.1.1 方法專屬性 色譜圖見圖1。他莫昔芬的保留時間為11.8 min 左右，峰形良好，基線平穩，與內源性物質分離良好(R≥2)。

2.1.2 標準曲線 各組織標準曲線在考察范圍內線性關系良好，系數r 均＞0.999。各組織定量限的RSD 均＜15%(n=3)。

2.1.3 精密度及準確度 各組織勻漿液中他莫西芬的回收率82%～113%，批內差2.3%～13.4%(n=3)，批間差4.4%～10.4%(n=9)。

2.1.4 穩定性 各組織模擬生物樣品高、中、低濃度樣品回收率的RSD 均小于15%(n =3);回收率92%～113%，與新配制模擬生物樣品的測定結果相比回收率沒有顯著變化(n=3)。

2.2 2組大鼠不同組織他莫昔芬濃度比較 各時間點實驗組大鼠乳腺組織中他莫昔芬的濃度均高于對照組，2組達峰時間均為4 h。2組其他組織中他莫昔芬濃度差異無統計學意義。見表1～4。

圖1 各組織樣品色譜圖

表1 各組織中他莫昔芬的回歸方程

表1 2組大鼠不同時間點乳腺組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表2 2組大鼠不同時間點子宮組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表3 2組大鼠不同時間點卵巢組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表4 2組大鼠不同時間點肝臟組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

3 討論

他莫昔芬口服給藥后體內組織分布較廣，口服后非靶組織中的藥物濃度相對較高，肝臟中的峰濃度甚至達到了乳腺組織的2 倍以上。

枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經皮給藥后，血漿中的達峰時間晚于口服給藥(經皮約7.3 h，口服約2.5 h)［5］，而乳腺組織中藥物的達峰濃度相同，且實驗組各時間點大鼠乳腺組織中的濃度顯著高于對照組，表明經皮給藥后他莫昔芬可被迅速吸收進入乳腺組織，而進入全身循環的速度相對緩慢，表現出顯著的趨向乳腺組織的分布特征。

該研究結果顯示，與口服給藥相比，枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經乳腺周圍皮膚組織給藥，乳腺組織中的他莫昔芬濃度顯著提高，而其他組織如子宮、卵巢、肝臟中藥物濃度水平則相當，這可能是由于他莫昔芬凝膠劑在給藥部位的皮膚及組織蓄積，形成暫時的藥物儲庫，使乳腺組織內的藥物濃度顯著高于其他組織。這對于降低他莫昔芬對非靶組織的毒副作用、提高治療效果十分有利。

總之，與口服給藥途徑相比，枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經皮局部給藥可增加乳腺組織對藥物的吸收。

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［4］李宏，姜繼勇.他莫昔芬與子宮內膜癌［J］.國外醫學:婦產科學分冊，2005，32(3):189

［5］朱玲，王彩芳，阿有梅，等.枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑在大鼠體內的藥動學研究［J］.中國醫藥工業雜志，2009，40(7):510