蓮花子房提取物的制備及表征

摘要：

近幾年，將溫和的中草藥提取物添加到化妝品中非常流行?！侗静菥V目》對蓮花的醫藥功效有詳盡的描述，蓮花有溫和無毒、固精氣、悅顏色、益血、益色等藥效，是美容駐顏的佳品。本文探討了蓮花子房提取物的主要成分，以及其對人體皮膚的作用機理和功效。

我們用GC-MC、HPLC高效液相色譜儀對蓮花子房的提取物成分進行了分析，分析其主要功能成分是黃酮類、酚類、花青素，并探究其與皮膚的作用機理，表明蓮花子房提取物具有較強的還原能力、清除自由基的能力。通過探究蓮花子房提取物對人體成纖維細胞的作用，從一個角度反映蓮花子房提取物有很好的護膚和抗衰老作用，化妝品研發工作者應該加強對蓮花子房提取物的研究。

關鍵字：蓮花子房提取物化妝品抗衰老制備表征

蓮為睡蓮科（Nymphaeaceae）蓮屬（Nelumbo）植物，具有多個通用名（Indian lotus，Chinese water lily，sacred lotus等）和學名（Nelumbium nelumbo， N.speciosa，N.speciosum，Nymphaea nelumbo等）[1]。蓮花在我國栽培歷史悠久，地域廣泛，在湖南、湖北、浙江、江蘇等地有廣泛種植，因此我國有著豐富的蓮花資源。睡蓮科植物蓮的臨床應用已有2000多年的歷史，并且多個部位可以入藥，包括蓮葉、蓮子（種胚及蓮子心）、藕、蓮房和蓮花（翼瓣及雄蕊）[2]。蓮花經千百年來不斷實踐驗證、篩選，作為天然物質，與化學合成物相比，添加在化妝品中對人體的副作用要小很多。蓮花中含有很多功能獨特和生物活性很高的化合物，這些化合物營養豐富，有一定功效。隨著現代生物技術和現代分離純化技術的發展和應用，蓮花作為天然綠色化妝品添加劑的研究也越來越受到人們的關注。

1蓮花的藥用概述

明代李時珍繼承和弘揚前人對蓮花藥用的記載，用7000字將蓮花的藥用價值編入《本草綱目》，對蓮花各部器官的藥物功能、臨床處方以及成功案例均有詳細的記載。其中與美容養顏相關的是蓮蕊須（即雄蕊），它的氣味甘、澀、溫，無毒，主治：清心通腎、固精氣、烏須發、悅顏色、益血、止血崩、吐血；蓮花（即花瓣）氣味苦、甘、溫，無毒，有“鎮心、益色、駐顏、身輕”之效[3]。在臨床應用中，蓮有多個部位入藥，包括蓮葉、蓮子（種胚及蓮子心）、藕、蓮房和蓮花（翼瓣及雄蕊），不同部位藥用價值并不完全相同[4]。

當代醫學研究表明，蓮花的藥用價值部位主要是翼瓣及雄蕊和胚珠中。主要化學成分為黃酮類物質，包括黃酮醇類和花青素類。另外還有一些其他結構的化合物，如adenine、myinositol、arbutin、β-sitosterol glucopyranoside等[4]。藥理研究表明，蓮須具有增強子宮平滑肌收縮、鎮痛的作用，對女性子宮保養有很好的作用。黃酮類化合物廣泛存在于植物體內，多數與糖結合成為黃酮甙類。過去黃酮類化合物限于用作染料。后來發現，不同的黃酮有不同的生理功能[5]。從蓮須中分離到的一些黃酮類化合物具清除自由基抗衰老的能力[6]。

蓮花子房中胚珠是雌配子的載體，是蓮子的前身，在蓮花有性生殖過程中起著重要的作用。胚珠攜帶大量的遺傳物質和營養物質為生命的孕育做充分的準備[7]。本實驗選取蓮花子房提取物，對其成分和功效進行分析。

2蓮花子房提取物的提取

本實驗所用提取物來自于蓮花的子房，提取工藝為：首先將蓮花、萃取劑和水混合后進行粉碎，得到蓮花漿狀物，然后將所述蓮花漿狀物在萃取劑中進行萃取，得到萃取液，最后將所述萃取液依次經過過濾、脫鹽、脫色和滅菌處理后，萃取清液即為本實驗材料。

3蓮花子房提取物的成分分析

本實驗主要采用快速溶劑萃取儀（APLE-1000/2000/3000）進行蓮花子房提取物的前處理。快速溶劑萃取法是一項全新的樣品前處理技術，通過升高溫度與壓力結合使用水、有機溶劑，可快速、有效地從基體中萃取待測物。僅需10min～20min即可完成，并且萃取效率高，24組萃取同時進行，對于蓮花子房提取物的營養物質可以一次完成萃取[8]。

對上述經快速溶劑萃取法萃取分離的蓮花子房提取物的營養物質進行定性分析，本實驗主要采用GC-MS和高效液相色譜法來測定。

其中之一的GC-MS的條件為：進樣口溫度240℃，柱溫采用程序升溫，初溫140℃，保持3min后以3℃/min速度升至180℃，恒溫1min，再以1.0℃/min升至220℃，保持7min。載氣為高純氦氣，流速1.0ml/min。采用分流進樣：分流比100∶1，進樣量為0.2μl。質譜條件：接口溫度280℃，EI離子源，電子能量70eV，離子源溫度230℃，四級桿溫度150℃，電子倍增器電壓1500 V，質量掃描范圍30～500u。

其中之一的高效液相色譜儀的具體色譜條件為：色譜柱選用Nova-pakC18柱（3.9mm×150mm），預柱C18（3. 9mm×15mm），流動相：甲醇-0.4% 水（1∶ 1）；檢測波：360nm，流速：1.0mL/min，進樣量：20μL，柱溫：室溫。

分離分析出的物質如下表1：

表1蓮花子房提取物中分離分析出的物質

4蓮花子房提取物的抗衰老功效實驗

目前普遍接受的皮膚衰老機理和皮膚衰老的主要表現：

1）造成皮膚衰老的因素有很多，目前主要分為自然老化和光老化[9]。自然老化由機體的內部因素引起，比如機體在代謝過程中產生自由基，自由基是一類瞬時形成的含不成對電子的原子或功能基團，普遍存在于生物系統。自由基的化學性質活潑，可攻擊生物體內的DNA、蛋白質和脂類等大分子物質，造成損傷，如DNA的斷裂、交聯、堿基羥基化等。其種類多、數量大，是活性極高的過渡態中間產物，如O2ˉ、OH 和各類活性氧中間產物（reactive oxygen metabolite ROM）[10]。大量實驗證明，體內自由基過多可使超氧化物歧化酶與抗氧化酶的活性減低，加速機體的衰老進程。因此，如何清除體內的自由基以及抗氧化能力的提高，是延緩機體的衰老的關鍵。

2）皮膚衰老最明顯的表現是皮膚松弛、產生皺紋，皺紋的產生在很大程度上由成纖維細胞的衰老造成。成纖維細胞是皮膚真皮中的主要細胞成分，其正常的增殖、分化維系著皮膚正常的結構和生理功能，真皮衰老反映在細胞水平主要表現為成纖維細胞的衰老[11]。

針對以上皮膚衰老的機理和主要表現，本文進行了蓮花子房提取物清除自由基的實驗和蓮花子房提取物對人體成纖維細胞的作用探究實驗。

從圖片中可以看出，添加蓮花子房提取物的2、3組細胞密度均大于空白對照組。且2、3組細胞排列整齊、大小均一、胞體光滑，細胞健康。

剩余的4、5、6、7、8組的細胞密度均大于空白對照組，具體濃度分布見圖3蓮花子房提取物添加量對人體成纖維細胞濃度的影響。

（2）對72h后八組細胞濃度數據進行整理得如下折線圖

從折線圖中可以看出，72h后添加蓮花子房提取物的組比空白對照組的細胞濃度都高，大約相差2000CPM。說明添加蓮花子房提取物對細胞分裂增長有明顯促進作用，且和添加濃度有依賴關系，整體呈上升趨勢。蓮花子房提取物對人體成纖維細胞的活性和健康有促進作用。

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