茭白中農藥殘留酶速測法假陽性消除研究

[摘 要] 酶速測方法是基于不同有機磷農藥和氨基甲酸酯農藥對膽堿酯酶活性抑制程度不同而對農藥殘留快速檢測的方法。但茭白等樣本經常出現檢測假陽性問題。本實驗針對茭白在農藥殘留酶速測中出現的假陽性問題，對樣本前處理方法進行改進，以消除實驗中出現的假陽性。研究了茭白樣本剪切長度以及在加酶前對樣本提取液進行加熱處理后的效果。實驗結果表明，該方法在一定范圍內可以消除茭白的假陽性問題。

[關鍵詞] 酶速測 假陽性 茭白

[中圖分類號] TS207.53 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2013）06-0120-01

為了快速測定蔬菜中有機磷農藥和氨基甲酸酯類農藥殘留，保障食品安全，農藥殘留的酶速測技術得到了飛快發展，但此方法在測定某些特殊種類的蔬菜樣本時，容易出現假陽性，干擾測定結果，從而導致農藥殘留數據可靠性降低，結果評價誤差增大，同時，對市場現場檢測執法帶來了很大困擾。用酶速測方法快速測定蔬菜中農藥殘留時韭菜、茭白、蘿卜等樣品經常出現假陽性結果。酶速測磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶的活性有抑制作用，其抑制率與農藥濃度呈正相關，用特制的分光光度計（農殘速測儀）測定吸光值的變化，計算出抑制率，從而判斷出蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯的殘留情況。為了消除茭白中農藥殘留測定假陽性問題，本實驗對酶速測法前處理環節進行研究和改進。

一、材料與方法

1.儀器與試劑

RP-410NM農藥殘毒快速檢測儀北京瑞利分析儀器公司；電子天平（準確度0.1g）上海精密科學儀器有限公司；恒溫水浴上海愛朗儀器有限公司；移液槍（2～50μl，1～5ml）；不銹鋼取樣器以及其他玻璃儀器。酶速測試劑（深圳兆赫實業有限公司）：pH8磷酸鹽緩沖液溶解；丁酰膽堿酯酶：用磷酸鹽緩沖液溶解，ΔA值控制在0.4～0.8之間；底物：碘代硫化丁酰膽堿（BTCI），用磷酸鹽緩沖液溶解；顯色劑：二硫代二硝基苯甲酸（DTNB），用磷酸鹽緩沖液溶解。

2.檢測過程

取2g切碎的茭白樣本，放入提取瓶內，加入20ml磷酸鹽緩沖液，2500r/min渦旋振蕩2min，倒出提取液，靜止3～5min；于小試管內分別加入50μl酶液，3ml樣本提取液，50μl顯色劑，于37～38℃下放置30min后再分別加入50μl底物，倒入比色杯中，用酶速測儀進行測定。

二、結果與分析

1.前處理條件優化研究

1.1茭白樣品切碎長度對抑制率的影響

將不含農藥殘留的茭白樣品分別切成1.0cm和2.5cm長，按1.2進行檢測，結果見表1。

從表1中可以看出，樣品長度為1.0cm時抑制率明顯的高于樣品長度為2.5cm時的抑制率。由于中華人民共和國農業行業標準NY/T 448-2001（蔬菜上有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留快速檢測方法）中樣品切碎長度要求為1～1.5cm，而且在實際測定中樣品長度太長不利于農藥殘留測定，因此選擇樣品長度1.0cm繼續進行加熱與不加熱對抑制率影響的比較。

1.2樣品提取液不同溫度處理對抑制率的影響

選用茭白剪切長度為1.0cm，按1.2在不同溫度下對樣品提取液加熱1min，測定其抑制率，結果見表2。

1.3在同一溫度下對樣品提取液加熱不同時間的抑制率在80℃對樣品提取液分別加熱1、2、3min后，測定其抑制率的變化，結果見表3。

從表2可以看出，加熱對抑制率的影響。隨著加熱溫度越高，抑制率降低，假陽性影響減小。室溫下平均抑制率為50.8%，而加熱后抑制率顯著降低，90℃時平均抑制率僅為16.1%。由于80℃和90℃處理時抑制率相差不大。考慮到溫度太高可能會造成樣品中殘留農藥的分解，因此選擇8 0℃進行下一步研究。

從表3中可以看出，加熱溫度不變時，加熱時間對抑制率的影響不是很明顯，因此選擇加熱時間較短處理比較合理。本研究選擇加熱時間為1min。

通過以上研究確定農藥殘留速測法優化條件：樣品長度1cm左右，加熱溫度80℃，加熱時間1min。

三、結論

本實驗研究了樣品剪切長度、加熱處理對茭白在酶速測檢測中假陽性消除效果。該方法表明，加熱處理可以在一定程度上消除酶速測中假陽性影響，從而提高酶速測對茭白樣品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留快速檢測的準確性。

參考文獻

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