[摘 要] 研究戊二醛和季銨鹽復合消毒劑對雞常見金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的殺滅效果。用PBS液和有機物的溶液(5%雞糞和10%小牛血清)分別將兩種細菌稀釋成5×106CFU/ml細菌懸液,分別加到不同消毒劑中作用不同時間進行計數[1]。結果:1:500稀釋的該消毒劑作用10分鐘對大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌殺滅率均為100%,有機物的存在不影響其殺菌效果。
[關鍵詞] 復方戊二醛消毒劑 細菌 消毒
[中圖分類號] S831 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 (2013)08-0186-01
一、材料與方法
1.受試細菌
金黃色葡萄球菌 (購自中監所);大腸埃希氏菌O78(山東農業大學微生物室提供)。
2.化學藥品及試劑
復方戊二醛消毒劑(含5%戊二醛和5%雙鏈季銨鹽);中和劑為1%甘氨酸和3%吐溫-80;培養基有營養瓊脂、馬丁肉湯;0.03M磷酸鹽緩沖液。
3.標準硬水
硬度為3.42×10-2(無水氯化鈣0.304g,氯化鎂0.139g,蒸餾水1000ml,121℃滅菌15分鐘)。
4. 5%雞糞水溶液
新鮮雞糞5g溶于標準硬水100ml中,棄去沉淀,滅菌備用[2]。
5. 10%血清水溶液,90ml標準硬水中加入10ml小牛血清[3]
6.受試菌傳代和稀釋
將受試菌傳至第6代,用PBS液稀釋成含菌5×106CFU/ml。
7.消毒液稀釋
消毒劑用滅菌蒸餾水按1:500、1:700、1:1000稀釋成不同濃度,分裝試管,每管4.5ml。
8.殺菌試驗
向不同濃度消毒劑中分別加入受試菌液0.5ml,混勻,于20℃水浴中作用10、30、60分鐘,各吸取0.5ml,加入4.5ml用馬丁肉湯稀釋的中和劑中,混勻。作用10分鐘后,用平板法作細菌計數。同時設PBS對照組。然后按以下公式計算殺菌率[4]。試驗重復6次。
殺菌率(pt)=[(n0-nt)/n0]×100%
式中n0為對照組活菌數,nt為消毒后試驗組活菌數。
9.有機物干擾試驗
以5%雞糞水溶液或10%小牛血清水溶液代替PBS液稀釋細菌,然后分別與不同濃度的消毒劑作用10分鐘和30分鐘,觀察消毒劑作用效果,試驗重復3次[5]。
10.結果判定方法
消毒劑對細菌的殺菌效果是否有效以殺菌率是否達到99.9%以上的消毒劑的最高有效稀釋倍數作為判定標準[6]。
二、結果
1.復方戊二醛消毒劑對雞大腸埃希氏菌或金黃色葡萄球菌兩種細菌的殺滅效果(分別見表1-3,表1-4)。
由表1-3和表1-4可見,該消毒劑1:500稀釋10分鐘能有效殺滅雞大腸埃希氏菌,1:700稀釋作用10分鐘能有效殺滅雞金黃色葡萄球菌。
在有機物存在時復方戊二醛消毒劑仍具有良好的消毒效果,1:500稀釋作用10分鐘即可完全殺滅大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌,但高稀釋度下有機物對其殺菌作用有明顯影響。
三、討論
1.本研究所采用中和劑能在消毒劑作用結束時很好地中和消毒劑,并且不影響檢測時的細菌培養計數。
2.戊二醛與季銨鹽均為常用消毒劑,二者在單獨使用時,皆易受到微生物種類、使用濃度、環境有機物等因素影響,二者復方的復合物在1:700稀釋能在10分鐘內有效殺滅雞金黃色葡萄球菌,1:500稀釋作用10分鐘能有效殺滅雞大腸埃希氏菌;從總體情況來看,有機物的存在并不影響其殺菌效果。
四、結論
復方戊二醛消毒劑殺菌作用快速、效果可靠,有推廣應用價值。
參考文獻
[1]王洪林,顧健,王小萍.CDS-型臭氧水處理塔殺菌效果觀察[J].中國消毒學雜志,1995,12:175.
[2]傅先強,劉占軍.養禽場禽病檢驗手冊[M].北京:中國農業大學出版社,1992,130-133.
[3]高東旗.季銨鹽類消毒劑復方的應用[J].中國消毒學雜志,1993,10(4):224.
[4]農業部獸藥審評委員會.獸藥試驗技術規范匯編[S].2001,30-47.
[5]李綏晶,王莉.復方戊二醛消毒劑殺菌效果的試驗觀察[J].中國消毒學雜志,2003,10(3):125.
作者簡介:郭紅霞,(1980年11月-),女,助理獸醫師,河津市畜牧獸醫局。