溫度對(duì)球孢白僵菌生物學(xué)特性的影響

摘 要：研究了不同溫度對(duì)球孢白僵菌生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明在22～26℃溫度范圍內(nèi)球孢白僵菌落個(gè)數(shù)隨溫度的升高而逐漸增多，在26℃時(shí)達(dá)到最大。隨后隨著溫度的升高菌落個(gè)數(shù)逐漸降低。

關(guān)鍵詞：球孢白僵菌；時(shí)間；溫度

球孢白僵菌（Beauveria bassiana）屬于鏈孢霉科，寄生于家蠶幼蟲體內(nèi)（可寄生于60多種昆蟲體上），使家蠶病死。干燥后的尸體稱為僵蠶。入藥能祛風(fēng)、鎮(zhèn)驚等。由于加強(qiáng)防治。近年來(lái)白僵菌對(duì)家蠶的感染大為減少，為解決僵蠶的藥源問(wèn)題，以蠶蛹為原料，接入白僵菌，所得蠶蛹可代僵蠶用。

實(shí)驗(yàn)材料與方法：

（1）材料：高孢菌粉、0.1%吐溫-80、液體培養(yǎng)基、PDA固體培養(yǎng)基。

（2）方法：a.球孢白僵菌孢子萌發(fā)率測(cè)定：將球孢白僵菌菌株用0.1%吐溫-80無(wú)菌水分別配制成濃度為1×115個(gè)/ml的分生孢子懸浮液，然后接種于液體培養(yǎng)基SDY中，25℃振蕩培養(yǎng)（200 r/min），分別在14h、16h、18h、20h。鏡檢稀釋至每個(gè)視野有20～30個(gè)孢子，每次鏡檢5個(gè)視野，不少于200個(gè)孢子，孢子已萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)是當(dāng)可見芽管長(zhǎng)度等于或大于孢子直徑長(zhǎng)度的情況下為準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)孢子萌發(fā)率。

b.球孢白僵菌孢子產(chǎn)孢量測(cè)定：用同樣的方法和濃度配制分生孢子懸浮液，在PDA 固體平板培養(yǎng)基上接種400μL，用滅菌玻璃棒涂布均勻，在RH=90%，25℃條件下培養(yǎng)10d，用直徑為0.8cm的打孔器在菌落中央到邊緣的中點(diǎn)處取出一定面積的菌落，移于加入定量0.1%吐溫-80無(wú)菌水的小三角燒瓶中，充分振蕩使孢子均勻分散最后配成孢子懸浮液。每個(gè)培養(yǎng)皿按三角形3點(diǎn)取樣，每菌株5次重復(fù)，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定孢子數(shù)量，最后統(tǒng)計(jì)換算成每株菌株平均產(chǎn)孢量（個(gè)/cm2）。

c.球孢白僵菌菌落生長(zhǎng)速率測(cè)定：將球孢白僵菌菌株接種到PDA 斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件（25℃、RH=90%）時(shí)間10～15d后，取分生孢子以0.1%吐溫-80無(wú)菌水配制成濃度為1×115個(gè)/ml的分生孢子懸浮液，用微量移液器吸取濃度為1×115個(gè)/ml的分生孢子懸浮液5 μL接種于PDA固體培養(yǎng)基中央，最后置于RH=90%、25℃條件下培養(yǎng)，用游標(biāo)卡尺十字交叉測(cè)量培養(yǎng)第3天后3～10d的菌落生長(zhǎng)直徑，計(jì)算出平均生長(zhǎng)速率（mm/d）。

d.不同溫度下球孢白僵菌的生長(zhǎng)情況：將球孢白僵菌菌株用0.1%吐溫-80無(wú)菌水分別配制成濃度為1×115個(gè)/ml的分生孢子懸浮液，，在PDA 固體平板培養(yǎng)基上接種50μL，用滅菌玻璃棒涂布均勻，然后分別置于22℃、24℃、26℃、28℃、30℃，RH=90%條件下培養(yǎng)2d-4d，分別記錄平板上孢子數(shù)。

結(jié)果與分析：由分析可知在14h～20h這一時(shí)間段球孢白僵菌孢子萌發(fā)率在5%～29%之間變動(dòng)，孢子萌發(fā)較穩(wěn)定無(wú)較大波動(dòng)變化。培養(yǎng)條件在溫度為25℃、RH=90%的情況下使每一菌株分為5個(gè)培養(yǎng)皿，即5個(gè)重復(fù)，用游標(biāo)卡尺十字交叉測(cè)量培養(yǎng)第3天后菌落直徑34.50mm-137.50mm之間變化。經(jīng)分析可知在22℃～30℃五個(gè)溫度變化區(qū)間下球孢白僵菌生長(zhǎng)趨勢(shì)逐漸升高在26℃達(dá)到最高，26℃～30℃球孢白僵菌生長(zhǎng)降低，在30℃達(dá)到最低。

結(jié)束語(yǔ)

經(jīng)過(guò)本研究結(jié)果表明，溫度范圍在22℃～26℃是最適合球孢白僵菌的生長(zhǎng)發(fā)育的溫度范圍。孢子萌發(fā)率，產(chǎn)孢量、和菌落生長(zhǎng)速率達(dá)到最大值，當(dāng)培養(yǎng)溫度過(guò)高或過(guò)低時(shí)不利于球孢白僵菌菌落的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，當(dāng)人工培養(yǎng)該菌株時(shí)應(yīng)該時(shí)刻注意溫度的變化和影響，盡量選擇合適的季節(jié)和時(shí)間在田間種植和使用本菌。

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