不同炮制時間對何首烏中蒽醌成分含量的影響

摘要：目的 通過不同炮制時段來研究何首烏中蒽醌的含量變化情況。方法 何首烏分別采用黑豆汁拌蒸不同時段， 醋酸鎂比色法分別測定炮制飲片中游離蒽醌和總蒽醌的含量。結(jié)果 用黑豆汁拌蒸的何首烏飲片10h內(nèi)游離蒽醌含量逐漸升高， 總蒽醌含量沒有顯著性變化。結(jié)論 何首烏飲片的炮制時間對其藥性成分有影響，應(yīng)統(tǒng)一規(guī)范其炮制時間。

關(guān)鍵詞： 何首烏； 高效液相色譜法； 醋酸鎂比色法

中圖分類號：R94 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）8-122-02

何首烏為蓼科植物何首烏（P olygonum multif lorum Thunb）。 的干燥塊根， 為常用中藥。生品具有解毒、消癰、潤腸通便之功效。制首烏具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、增強(qiáng)免疫力、改善記憶障礙及抗衰老等功效[1]。何首烏中主要有效成分為蒽醌類和二苯乙烯化合物。結(jié)合蒽醌具有瀉下作用， 何首烏經(jīng)炮制后結(jié)合蒽醌逐漸轉(zhuǎn)為無瀉下作用的游離蒽醌[2] 。現(xiàn)有的炮制方法有多種， 但各種方法均未規(guī)范其炮制時間。炮制時間的長短對其各個成分的含量影響較大，探明其在炮制前后主要成分變化是很有必要的。本實驗選擇5中國藥典6中規(guī)定的黑豆汁拌蒸法， 考察不同時間的黑豆汁拌蒸工藝對何首烏中蒽醌主要化學(xué)成分的影響。

1 器材

日本島津高效液相色譜儀， SPD-10VAP 型紫外檢測器；FA2004電子天平；UV-2201型紫外- 可見分光光度計（日本Sh-im adzu）， AS3120型超聲波清洗器（奧特賽思儀器有限公司）。何首烏藥材由吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供， 經(jīng)鑒定均為蓼科植物何首烏的干燥塊根。實驗樣品為實驗室自制的何首烏生飲片， 經(jīng)黑豆汁拌蒸0， 2， 4， 6， 8， 10 h的飲片。黑豆汁拌蒸法： 取黑豆適量（ 1 /10何首烏的量）， 加適量的水煎煮2次，用200目篩絹濾出， 合并濾液， 濃縮至約黑豆的2.5 倍。將黑豆汁加入何首烏飲片中，拌勻，浸潤24 h，取出浸潤后的何首烏適量作為0 h飲片單放， 其余的按2，4，6，8，10 h進(jìn)行蒸制。乙腈為色譜純（美國F isher公司）； 水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)105e干燥至恒重的1，8- 二羥基蒽醌對照品5.1mg， 置25ml容量瓶中， 甲醇溶解并定容， 作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取各何首烏飲片粉末（ 過80目篩）0. 5 g， 精密稱定， 置50 m l容量瓶中， 加入氯仿40ml 超聲處理40min， 放冷， 用氯仿稀釋至刻度， 搖勻， 過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液[1]。另取各何首烏飲片粉末（過80目篩）0.5g， 精密稱定，置150ml錐形瓶中， 加30ml氯仿和30ml硫酸（ 2.5 mol# L- 1 ），水浴回流水解2 h， 放冷， 水解液置分液漏斗中， 分取氯仿層于50ml容量瓶中， 水層用氯仿洗滌（5m l@3）， 洗液并入容量瓶中， 并用氯仿稀釋至刻度， 搖勻， 過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液[2] 。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取/2.1.10 項下的對照品溶液0.2， 0.4， 0.6， 0.8，1.0 ml置l0ml容量瓶中，置水浴上蒸干， 放冷，將殘渣用0.035 mol#L-1醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容， 以0.035 mol#L- 1醋酸鎂-甲醇溶液為空白，在510nm測定吸光度，以吸光度（ Y）為縱坐標(biāo)，濃度（ X，Lg# ml-1）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為；Y= 0.049 9X+0.0036（ r= 0.9999 ），表明1， 8- 二羥基蒽醌在4.08～ 20. 40 Lg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實驗

精密吸取/ 2. 1. 10項下的對照品溶液0.5ml 按醋酸鎂比色法測定5次， 測得吸光度的RSD為0.34%。

2.5 回收率實驗

精密稱取已知含量的樣品5份， 每份0.5g， 置50ml容量瓶中， 加入1ml對照品溶液， 再加入氯仿40ml超聲處理40m in。放冷， 氯仿定容，搖勻，過濾。精密吸取續(xù)濾液8 ml置l0ml容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得殘渣。按醋酸鎂比色法測定， 計算1， 8一二羥基蒽醌的回收率。結(jié)果其平均回收率為98.06% + 1.98%（n=5）。

2.6 測定方法與結(jié)果

精密吸取/ 2. 1. 20項下的供試品溶液[ 1] 8ml置10ml容量瓶中， 水浴蒸干， 放冷， 得殘渣。按醋酸鎂比色法在510nm 測定吸光度， 計算游離蒽醌的含量， 結(jié)果見表1。精密吸取/ 2. 1. 20項下的供試品溶液[ 2] 4 m l置10ml容量瓶中， 蒸干， 放冷， 得殘渣。按醋酸鎂比色法在510nm 測定吸光度，計算樣品中總蒽醌的含量。由此， 總蒽醌含量減去游離蒽醌含量， 即得結(jié)合蒽醌含量。結(jié)果見表1。

3 討論

關(guān)于炮制后何首烏中有效成分含量變化已有報道[4]，但均是以制后結(jié)合蒽醌幾乎轉(zhuǎn)變成游離蒽醌為炮制目的， 所以選定的炮制時間長（一般大于12 h）， 且時間間隔也很大。本文首次已2 h為間隔時間探討了黑豆汁拌蒸10 h之內(nèi)的有效成分含量的變化。本實驗結(jié)果顯示，用黑豆汁拌蒸不同時間蒽醌含量有差異，蒸制2～ 10 h，游離蒽醌的含量隨炮制時間的延長逐漸升高，但總蒽醌含量只略有下降，無顯著性差異，說明結(jié)合蒽醌在炮制過程中逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌。經(jīng)多次（ n = 6）實驗測得黑豆汁拌蒸10h時已有46.5%的結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌。實驗中發(fā)現(xiàn)蒸制時間的長短與其顏色也有著重要的關(guān)系，蒸制時間短，顏色暗淡無光澤；蒸制時間越長，其顏色逐漸烏黑發(fā)亮。實驗中也意外地發(fā)現(xiàn)，黑豆汁浸潤24 h的何首烏（即0 h 樣品）中游離蒽醌的含量特別高，其原因有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄭虎占. 中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用， 第3 卷[M ] . 北京： 學(xué)苑出版社， 1998.

[2] 王孝濤， 曹 暉， 劉玉萍. 中藥采制與炮制技術(shù)[M ] . 北京： 華夏出版社， 2000： 23.

[3] 國家藥典委員會. 中國藥典， ? 部[ S ] . 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社，2005： 123.

[4] 劉振麗， 宋志前， 張 玲. 不同炮制工藝對何首烏中成分含量的影響[ J] . 中國中藥雜志， 2005， 30（ 5 ） ： 336.