HLA—DR3基因與胰島素依賴型糖尿病相關(guān)性探討

摘要：目的：探討HLA-DR3基因與胰島素依賴型糖尿病（IDDM）相關(guān)性。方法：選取在我院接受治療的胰島素依賴型糖尿病患者68例為實(shí)驗(yàn)組，再選取與患者無血緣關(guān)系的健康人68例為對照組，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后對所有PCR產(chǎn)物的DR3基因特異性寡核苷酸順序進(jìn)行檢測，對比得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行分析。然后將實(shí)驗(yàn)組人員根據(jù)年齡再分成3個組，分別為甲組，乙組和丙組，從而分析患者患病年齡與攜帶DRB10301基因的關(guān)系。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組68例IDDM患者中，DRB10301基因攜帶者達(dá)到35人；而對照組68例健康人中，DRB10301基因攜帶者的人數(shù)達(dá)到5人。甲組22例患者中，DRB10301基因陽性率為72.73%；乙組24例患者中，DRB10301基因陽性率為54.17%；丙組22例患者中，DRB10301基因陽性率為22.73%。結(jié)論：HLA-DR基因與胰島素依賴型糖尿存在相關(guān)性，HLA-DR3基因在不同年齡胰島素依賴型糖尿病患者間有差異性。

關(guān)鍵詞：HLA-DR3基因；胰島素依賴型糖尿病；年齡

中圖分類號：R587.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）11-017-02

近年來，隨著人們生活方式的變化以及人口老齡化進(jìn)程的加速，我國糖尿病的發(fā)生率在逐漸增高，且發(fā)病年齡也在逐年降低，糖尿病在漸漸的稱為了我國繼心腦血管疾病、腫瘤之后的另一種嚴(yán)重危害人們健康的重要的慢性非傳染性疾病[1]。其中，HLA-DR和DQ是與T1DM最為相關(guān)的HLA基因位點(diǎn)[2]。為了探討HLA-DR3基因與胰島素依賴性糖尿病的相關(guān)性，我們選用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）與順序列特異寡核苷酸探針雜交（Sequence Specific Oligonucleotide Probe Hybridization，SSOPH）的方法通過對DR3基因進(jìn)行DNA水平上的定型來進(jìn)一步研究DR3基因與胰島素依賴型糖尿病及發(fā)病年齡的相關(guān)性。現(xiàn)將本次實(shí)驗(yàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1資料整理

選取在我院接受治療的胰島素依賴型糖尿病患者68例為實(shí)驗(yàn)組，其中男性患者31例，女性患者37例。年齡13歲～47歲，平均年齡（33.1±14.2）歲。病程2.1年～10.3年，平均（5.9±4.2）年。再選取與患者無血緣關(guān)系的健康人68例為對照組，要求健康人的年齡、性別與實(shí)驗(yàn)組一一對應(yīng)，并用統(tǒng)計學(xué)方法檢測要求兩組數(shù)據(jù)在性別年齡上無統(tǒng)計學(xué)意義。采取每例對照組患者與每例實(shí)驗(yàn)組成員血液40ml，并保留其中20ml作為第一次樣本。

之后將實(shí)驗(yàn)組人員根據(jù)年齡再分成3個組，分別為甲組，乙組和丙組。甲組年齡小于18歲，共22人；乙組年齡在18歲至30歲之間，共24人；丙組年齡在30歲以上，共22人。將之前抽好的血液剩下的20ml按照新分的組依次排好，然后等待實(shí)驗(yàn)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取DNA：取200μl全血放入1.5μlEppendorf管中，加入2μl蛋白酶K和200μlBufferAL，渦旋15s后56℃水浴10min。加入200μl無水乙醇，渦旋15s。全移至新管，8000rpm離心一分鐘。再轉(zhuǎn)至新管加入BufferAW1 500μl，8000rpm離心1min。轉(zhuǎn)至新管加入BufferAW2 500μl，14000rpm離心3min。轉(zhuǎn)至新管加14000rpm離心1min。轉(zhuǎn)至新管加入BufferAE 200μl，室溫5min后離心8000rpm一分鐘，得到DNA備用。

1.2.2 PCR產(chǎn)物擴(kuò)增：擴(kuò)增DNA產(chǎn)物，然后用2%瓊脂糖凝膠電泳方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。

1.2.3 分析PCR產(chǎn)物：先做雜交膜準(zhǔn)備，然后參照（DiG -11 -duTP）標(biāo)記試劑盒所示的方法（Beoch -inger，Mannhamain，BIM）進(jìn)行探針標(biāo)記斑點(diǎn)雜交染色。

1.3 統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)

使用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析統(tǒng)計，采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，P<0.05，表明本次實(shí)驗(yàn)具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DRB10301基因攜帶情況比較

實(shí)驗(yàn)組68例IDDM患者中，DRB10301基因攜帶者的人數(shù)達(dá)到35人，占全部人數(shù)的51.47%；而對照組68例健康人中，DRB10301基因攜帶者的人數(shù)達(dá)到5人，占全部人數(shù)的7.35%。兩組結(jié)果相對比，差異十分明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義。具體數(shù)據(jù)見表1。