p57Kip2、Ki—67在鑒別孕早期葡萄胎和水腫性流產中的應用價值

[摘要] 目的 探討p57Kip2和Ki-67蛋白在妊娠早期鑒別診斷水腫性流產和完全性葡萄胎、部分性葡萄胎的應用價值。 方法 免疫組織化學染色法檢測早期妊娠的12 例水腫性流產、22例完全性葡萄胎和16例部分性葡萄胎石蠟組織切片中p57Kip2蛋白和Ki-67蛋白的表達。 結果 水腫性流產、完全性葡萄胎和部分性葡萄胎組織中，p57Kip2蛋白的陽性表達率分別為83.3%（10/12）、0（0/22）、81.3%（13/16），完全性葡萄胎組陽性表達率與部分性葡萄胎組和水腫性流產組比較，組間差異有顯著統計學意義（P<0.01），部分性葡萄胎組與水腫性流產組比較，差異無統計學意義（P>0.05）；Ki-67蛋白的陽性表達率分別為8.3%（1/12）、72.7%（16/22）、43.8%（7/16），完全性葡萄胎組陽性表達率與部分性葡萄胎組和水腫性流產組比較，組間差異有顯著統計學意義（P<0.01），部分性葡萄胎組與水腫性流產組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 聯合檢測p57Kip2和Ki-67蛋白對鑒別診斷早期妊娠中水腫性流產、完全性葡萄胎、部分性葡萄胎有重要臨床應用價值。

[關鍵詞] 葡萄胎；水腫性流產；周期素依賴激酶抑制劑p57Kip2；Ki-67；妊娠早期

[中圖分類號] R714.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）25-0140-02

The Utility of p57Kip2， Ki-67 in differential diagnosis of hydatidiform mole and hydropic abortion in early pregnancy stage

HAN Shuzhen1 GUO Ying2 HUANG Binhua1 ZHAO Yinghai2 CHEN Xiaoyi2

1.Deparment of Pathology， Affiliated Donggaun City Houjie Hospital， Guangdong Medical College，Dongguan 523808，China；2. Pathology Teaching and Research Section，Basic Medical School，Zhanjiang 524023，China

[Abstract] Objective To investigation the utility of p57Kip2 and Ki-67 proteins in differential diagnosis of hydropic abortion（HA）， complete hydatidiform mole（CHM） and partial hydatidiform mole（PHM） in early pregnancy stage. Methods Immunohistochemistry Envision method was adopted to detect the expression of p57Kip2 and Ki-67 proteins in paraffin-embedded tissue sections of 12 cases HA， 22 cases CHM and 16 cases PHM. Results Positive staining rates of p57Kip2 protein was 83.3%（10/12）， 0（0/22）， 81.3%（13/16） in 12 cases HA， 22 cases CHM and 16 cases PHM， respectively. The difference of p57Kip2 protein expression between CHM and PHM or HA was statistically significant（P<0.01）， but it was not statistically significant between PHM and HA（P>0.05）. Positive staining rates of Ki-67 protein was 8.3%（1/12）， 72.7%（16/22）， 43.8%（7/16） in 12 cases HA， 22 cases CHM and 16 cases PHM， respectively. The difference of Ki-67 protein expression between CHM and PHM or HA was statistically significant（P<0.01）. The difference of Ki-67 protein expression between PHM and HA was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Co-detecting p57Kip2 and Ki-67 proteins has significant clinical utility in differential diagnosis of CHM from PHM and HA， or PHM from HA in early pregnancy stage.

[Key words] Hydatidiforrn mole； Hydropic abortion； Cyclin-dependent kinase p57Kip2； Ki-67； Early pregnancy stage

目前，異常妊娠在世界范圍內的發生率為1∶（500～1 000）次妊娠，在中國住院患者中發病率為1∶150次妊娠。異常妊娠包括水腫性流產（hydropic abortion， HA）和葡萄胎（hydatidiform mole， HM）。HM又分為完全性葡萄胎（complete hydatidiform mole，CHM）及部分性葡萄胎（partial hydatidiform mole， PHM），>40歲或<20歲女性多見，并且繼發于CHM和PHM的滋養葉細胞腫瘤的危險度相差很大，分別為10%～30%和0.5%～5%[1]。HA不會繼發滋養葉細胞腫瘤。

近年來隨著超聲技術的高速發展，更多的異常妊娠在孕早期被發現并被摘除，而此階段HA、CHM和PHM的常規病理組織學改變往往不典型并存在相互重疊的現象，給準確進行病理診斷帶來了困難，亦給臨床治療帶來困惑。本研究旨在通過免疫組織化學方法聯合檢測p57Kip2、Ki-67蛋白在HA、CHM和PHM中的表達情況， 尋找高特異性、高敏感性的HM標志物，評價p57Kip2、Ki-67蛋白在孕早期鑒別診斷HA、CHM和PHM的應用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2012年1～12月50例早期妊娠（45～80 d）的石蠟包埋組織，其中12 例HA、22例CHM、16例PHM。所有患者均無葡萄胎病史，所有病例診斷標準參照WHO（2008）乳腺及女性生殖器官腫瘤分類，HE切片由2名高年資病理醫師讀片， 排除組織量少診斷有差異的病例。HA患者平均年齡24.5歲（18～41歲），中位年齡23歲；CHM患者平均年齡30.6歲（17～47歲），中位年齡42歲；PHM患者平均年齡27.8歲（19～45歲），中位年齡20歲。

1.2 試劑與方法

鼠抗人單克隆抗體p57Kip2、兔抗人單克隆抗體Ki-67和Envision兩步法試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。所有標本均用4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片， 常規HE和免疫組化標記。免疫組化用已知陽性片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

p57Kip2、Ki-67免疫組化陽性細胞均為胞核呈棕黃色著色。采用雙盲半定量法，用顯色強度結合陽性百分率判讀結果：每張切片在高倍鏡下（×400）隨機選擇10個視野，計算陽性細胞的平均百分數，絨毛間質細胞及絨毛表面細胞滋養葉細胞核p57Kip2蛋白陽性率<10%為陰性，≥10%為陽性[2]。絨毛滋養葉細胞核Ki-67蛋白陽性率<5%為陰性，≥5%為陽性[3]。

1.4 統計學分析

所得數據采用SPSS17.0統計軟件進行Fisher確切概率法檢驗和χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義，P<0.01為差異有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 p57Kip2蛋白的表達

p57Kip2蛋白主要表達于絨毛表面細胞滋養葉細胞及絨毛間質細胞。在CHM組，高度水腫的絨毛間質細胞、細胞滋養層細胞和絨毛合體滋養層細胞均不表達p57Kip2蛋白，而在PHM組和HA組p57Kip2蛋白陽性表達率分別為81.3%和83.3%，3組間差異有顯著統計學意義，χ2= 33.478，P=0.000<0.01。PHM組與HA組比較，組間差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 Ki-67蛋白的表達

Ki-67蛋白表達于絨毛的滋養葉細胞核。CHM組Ki-67陽性表達率明顯高于HA組和PHM組，組間差異有顯著統計學意義（χ2=12.879，P=0.002<0.01）；PHM組Ki-67陽性表達率明顯高于HA組，組間差異有統計學意義（P=0.039 <0.05），見表1。

3 討論

本組50例孕早期樣本均參照文獻[2，5]及WHO（2008） 乳腺及女性生殖器官腫瘤分類常規診斷標準進行篩選：①HA主要表現為絨毛間質水腫，細胞滋養葉細胞無明顯增生；②CHM主要表現為絨毛間質高度水腫，絨毛球形腫大，絨毛間質細胞豐富并易見到核固縮及核碎裂現象，絨毛內可見原始血管形成迷路樣細胞條索，滋養葉細胞增生；③PHM主要表現為絨毛間質水腫，絨毛腫大，絨毛間質可有中央池及滋養葉細胞包涵體形成，滋養葉細胞增生。所有樣本均采用免疫組化Envision兩步法檢測p57Kip2蛋白的表達。

有絲分裂抑制因子p57Kip2，定位于染色體11p15.5，是父系等位基因印跡表達抑制，而母系等位基因表達，編碼的蛋白是一種細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑。p57Kip2基因表達抑制可能促進細胞異常增殖[3，5，7]。本組實驗結果顯示：HA、CHM和PHM組織中，p57Kip2蛋白的陽性表達率分別為83.3%（10/12）、0（0/22）、81.3%（13/16），CHM組陽性表達率明顯低于HA組和PHM組，組間差異有顯著統計學意義（P<0.01）；HA組和PHM組比較，組間差異無統計學意義（P>0.05）。本研究結果與HM發病的分子遺傳學機制相符合：CHM來自1個空卵與1個或2個精子結合，兩套基因組均源自父系，缺少母系DNA，不表達父系印跡基因p57Kip2， CHM約90%為二倍體，約10%為四倍體，偶爾為三倍體；PHM來自1個卵子與2個精子結合，是兩組父系和一組母系染色體組成的三倍體，表達p57Kip2蛋白，少數PHM是二倍體[2]；HA為正常核型， 兩套基因組各來自父系和母系， 表達p57Kip2蛋白。Castrillon等[4]首次報道了p57Kip2蛋白在CHM及其相關病變中表達的差異，隨后多項研究亦證實了p57Kip2蛋白在CHM診斷中的重要作用[2，3，5-8]。

滋養細胞增生是HM的重要病理形態學特征，但在妊娠早期的HM病例這一特征并不明顯， 因而有必要運用細胞增殖指標進行輔助診斷。Ki-67蛋白在細胞周期S、G、M期均有表達，Go期缺如，其指數高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤、轉移及預后密切相關，被認為是一個非常有價值的增殖標記物[9，10]。本組所有樣本均采用免疫組化Envision兩步法檢測Ki-67蛋白的表達。實驗結果顯示：HA、CHM和PHM組織中，Ki-67蛋白的陽性表達率分別為8.3%（1/12）、72.7%（16/22）、43.8%（7/16），CHM組陽性表達率明顯高于HA組和PHM組，組間差異有顯著統計學意義（P<0.01）；PHM組Ki-67陽性表達率高于HA組，組間差異有統計學意義（P<0.05）。提示Ki-67對鑒別HA、CHM和PHM有重要的參考價值[1，3，9，10]。

由此可見，以常規病理形態學特征為基礎，并聯合檢測p57Kip2和Ki-67蛋白的表達情況，能在孕早期有效地鑒別診斷HA、CHM和PHM，降低HM的誤診率和漏診率。p57Kip2和Ki-67蛋白可以作為高特異性、高敏感性的HM標志物應用于孕早期鑒別診斷HA、CHM和PHM。

[參考文獻]

[1] Chen Y，Shen D，Gu Y，et al. The diagnostic value of Ki-67，P53 and P63 in distinguishing partial Hydatidiform mole from hydropic abortion[J]. Wien Klin Wochenschr，2012，124（5-6）：184-187.

[2] 董穎，張爽，王美玲，等. 水泡狀胎塊及相關異常妊娠孕早期胎盤組織的病理特點[J]. 北京大學學報（醫學版），2011，43（2）：194-198.

[3] 柯儒斌，徐潮，黃炎，等. Ki-67、P53和P57在水泡狀胎塊中的表達及其意義[J]. 實用醫學雜志，2012，28（21）：3584-3586.

[4] Castrillon DH，Sun D，Weremowicz S，et al. Discrimination of complete hydatidiform mole from its mimics by immunohistochemistry of the paternally imprinted gene product p57Kip2[J]. Am J Surg Pathol，2001，25（10）：1225-1230.

[5] 陳云新，沈丹華，顧依群，等. P57和P53蛋白在水腫性流產及葡萄胎鑒別診斷中的作用[J]. 中華病理學雜志，2011，40（l0）：694-697.

[6] Sarmadi S，Izadi-Mood N，Abbasi A，et al. p57Kip2 immunohistochemical expression： a useful diagnostic tool in discrimination between complete hydatidiform mole and its mimics[J]. Arch Gynecol Obstet， 2011， 283（4）：743-748.

[7] 蔣莉萍，袁金蘭，肖鳳，等. P57和P53在完全性與部分性葡萄胎中的表達及意義[J]. 中國實驗診斷學，2011，15（10）：1755-1757.

[8] Mc Connell TG，Murphy KM，Hafez M，et al. Diagnosis and subclassification of hydatidiform moles using p57 immunohistochemistry and molecular genotyping：validation and prospective analysis in routine and consultation practice settings with development of an algorithmic approach[J]. Am J Surg Pathol，2009，33（6）：805-817.

[9] 張賀玲，許煥芝，王素琴. Ki-67在不同葡萄胎組織中的表達及臨床意義[J]. 河北醫藥，2011，33（11）：1697-1698.

[10] 張宏，王毅. p57Kip2與Ki-67在水腫樣變絨毛中的表達及I臨床意義[J]. 山西醫藥雜志，2011，40（9）：880-881.

（收稿日期：2013-05-27）