Survivin、MMP—9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌中的表達與臨床意義

[摘要] 目的 探討Survivin、MMP-9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌中的表達情況，并探討其臨床意義。 方法 運用免疫組化SP法，檢測10例慢性宮頸炎、20例宮頸上皮內瘤變和50例宮頸鱗癌組織中Survivin、MMP-9的表達水平，并加于分析。 結果 Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌的表達率分別是10%、35%、68%，MMP-9在上述各組中陽性表達率分別為10%、20%、78%。 結論 宮頸鱗癌中Survivin、MMP-9呈過度表達，Survivin、MMP-9參與了宮頸鱗癌的發生發展，對預后判斷有一定的意義。

[關鍵詞] Survivin；MMP-9；宮頸鱗癌；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0026-02

宮頸癌是女性生殖系統發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其在我國的患病率和死亡率均占世界的1/3。近年來發現發病有年輕化趨向[1]，且有報道證明[2]已發現有未成年病例，但由于不夠重視，易發生誤診、漏診造成嚴重后果。宮頸癌有一個間隔較長并可逆轉的癌前病變時間，從良性病變發展為上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN），癌是一個多階段、多步驟的連續過程，與多種癌基因和抑癌基因的表達、調控、細胞凋亡及血管的生長有關。Survivin基因是調亡抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族的新成員，具有細胞凋亡抑制和細胞周期調控的雙重功能，在腫瘤的發生、發展中發揮了重要作用[3，4]。MMP-9作為基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）中分子量最大的蛋白酶參與破壞基底膜的完整性，導致癌細胞向其他部位轉移，在體內參與炎癥、血管形成、腫瘤轉移等生物學行為，其表達增加與腫瘤侵襲、轉移有關[5-8]。本實驗旨在探討Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變、宮頸鱗癌的表達特點，以期在今后對宮頸鱗癌的發生、發展及轉移研究中拓寬思路。

1資料與方法

1.1 臨床資料

收集2009年4月～2012年1月經保山市人民醫院確診的患者，隨機選取慢性宮頸炎（n = 10）、宮頸上皮內瘤變（n = 20）、宮頸鱗癌（n = 50）。其中上皮內瘤變（CIN）均屬CINⅢ，宮頸鱗癌患者50例中年齡28～66歲，平均47歲，> 45歲31例，<45歲19例；病理分級：G1級30例，G2級12例，G3級8例；臨床分期：Ⅰa10例，Ⅰb 25例，Ⅱa 9例，Ⅱb 6例；淋巴轉移12例，無淋巴轉移38例。所有患者均未接受過放療、化療或激素治療。

1.2 免疫組織化學法

一抗Survivin為AR0270單克隆抗體，工作液；MMP-9為AP0341多克隆抗體，工作液；二抗為DD13；DAB溶液KS002加強型，陽性對照片均購自廣州深達生物制品技術有限公司。采用免疫組化SP法進行染色，標本經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，每個蠟塊連續4 μm 切片3張，其中1張做HE染色，所有切片采用同批次試劑檢測。

1.3 評價標準

Survivin和MMP-9以細胞胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，均設陰性和陽性對照片，用PBS代替一抗為陰性對照，陽性對照由公司提供。采用雙盲法，評分方法參考文獻[9]。第一項，按細胞顯色有無及深淺對強度評分：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；第二項，每張切片隨機觀察10個視野，按每高倍鏡視野（×200）陽性細胞數百分比計分：陰性0分，<10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項評分相乘即為陽性強度，0分為（-），1～4分為（+），5～8分為（++），9～12分為（+++），以上結果均由至少兩位病理科醫生以盲法觀察確定。

1.4 統計學分析

采用SPSS 17.0統計處理軟件進行數據處理，統計方法采用χ2檢驗（根據樣本量的大小采用χ2檢驗專用公式、校正公式和確切概率法進行計算）。

2 結果

2.1 Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌的表達

Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌的表達呈上升趨勢，見表1、2。將Survivin 在慢性宮頸炎、CIN和宮頸癌的陽性率進行兩兩χ2檢驗，結果如下：三者陽性率比較χ2=17.253，P = 0.000 < 0.05，差異有統計學意義。CIN表達率和慢性宮頸炎比較，χ2=1.044，P =0.307 > 0.05，統計學意義不明顯，綜合文獻考慮，不排除病例量較少的因素。宮頸癌和慢性宮頸炎比較χ2=11.055，P =0.001，差異有高度統計學意義。宮頸癌和CIN比較χ2=8.254，P = 0.004，差異有統計學意義。同時將MMP-9在慢性宮頸炎、CIN和宮頸癌的陽性率進行兩兩χ2檢驗，結果如下：三者陽性率比較χ2=30.894，P = 0.000 < 0.05，差異有統計學意義。CIN表達率和慢性宮頸炎比較，χ2=0.030，P =0.862 > 0.05，統計學意義不明顯，綜合文獻考慮，不排除病例量較少的因素。宮頸癌和慢性宮頸炎比較χ2=14.415，P =0.00，差異有明顯統計學意義。宮頸癌和CIN比較χ2=20.283，P = 0.000，差異有統計學意義。

2.2 Survivin、MMP-9表達與臨床病理特征的關系

由表3可見，Survivin的陽性表達與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級之間差異有統計學意義，而年齡和有無淋巴結轉移方面比較差異無統計學意義。MMP-9的陽性表達與臨床分期、病理分級及淋巴結轉移方面差異有統計學意義，與年齡無關。

3 討論

Survivin基因定位于17q25，相對分子量16 500，是目前發現的凋亡抑制作用最強的基因。Survivin蛋白具有明顯的組織特異性，其主要分布于胚胎及分化未成熟的組織，在婦科腫瘤尤其是卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌的癌組織中高度表達，且與癌組織的浸潤、轉移、臨床分期及預后關系密切[10]，本實驗中Survivin在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內瘤變及子宮頸鱗癌組織中的陽性表達率依次上升，差異有統計學意義（P < 0.05），臨床分期、組織的分化程度與陽性率有關系，提示Survivin在宮頸鱗癌的發生、發展中起作用，其表達程度可作為一項預后判斷的標志。

在腫瘤的發展過程中細胞外基質是癌轉移必須突破的屏障，MMP是參與降解細胞外基質的主要直接作用者，其中Ⅱ型膠原酶（包括MMP-2和MMP-9）與腫瘤侵襲轉移的關系最為密切，可以用于對腫瘤侵襲性的監測[11]。MMP-9高表達的腫瘤細胞在侵襲、轉移過程中突破各種屏障能力較高，此外具有轉移傾向的癌細胞可自身分泌或誘導其他細胞分泌大量的MMP-9，可以說MMP-9參與破壞基底膜的完整性，導致癌細胞向其他部位轉移，在體內參與炎癥、血管形成、腫瘤轉移等生物學行為，其表達增加與腫瘤侵襲、轉移有關[5]。本實驗表明與慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤變相比，宮頸鱗癌的陽性率明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.05），而在慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤變陽性差異不明顯，不排除案例較少的因素。實驗還提示MMP-9表達與宮頸鱗癌臨床分期、組織的分化程度和淋巴結轉移有密切的關系。

本實驗表明Survivin和MMP-9在宮頸鱗癌的發生發展中有相互促進作用，可對預后進行一定的判斷，同時可以為今后的宮頸鱗癌的研究提供一個思路。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-03-13）