兩種運送培養(yǎng)基及無菌棉拭子維持細菌活性能力的比較

[摘要] 目的 比較兩種運送培養(yǎng)基以及無菌棉拭子三種標本運送系統(tǒng)維持細菌活性的能力。 方法 選用金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌，在0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別檢測它們在三種運送系統(tǒng)上存活的情況，每個時相點重復檢測10次。 結(jié)果 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌24 h內(nèi)在三種運送系統(tǒng)上存活，且菌量無明顯變化。但對苛養(yǎng)菌包括化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌在兩種運送培養(yǎng)基上的存活時間和菌量不同程度優(yōu)于無菌棉拭子。 結(jié)論 運送培養(yǎng)基運送臨床微生物標本效果好于無菌棉拭子，特別是對苛養(yǎng)菌的細菌培養(yǎng)意義重大。

[關(guān)鍵詞] 運送培養(yǎng)基；無菌棉拭子；細菌培養(yǎng)

[中圖分類號] R378 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0085-04

微生物標本的正確采集和及時送檢是臨床診斷、疾病預防和控制、食品衛(wèi)生管理和監(jiān)督、醫(yī)學衛(wèi)生科學研究等領(lǐng)域的基礎(chǔ)性工作，而期間的樣品運送培養(yǎng)對檢測結(jié)果的正確起著關(guān)鍵性的作用[1，2]。目前大部分醫(yī)院多使用一次性無菌棉拭子采集和運送標本，由于無菌棉拭子不能為標本中的細菌提供養(yǎng)分和水分，放置時間過長，標本易干燥，導致細菌死亡，降低檢出率，甚至造成假陰性。為此，本課題組實驗室出于運送病原菌樣品的需要，引進兩種一次性使用運送培養(yǎng)基，以期延長標本中細菌存活時間，避免或盡量減少出現(xiàn)假陰性。但運送培養(yǎng)基維持細菌活性的能力如何以及與無菌棉拭子比較有何區(qū)別少有文獻報道。本實驗主要探討兩種運送培養(yǎng)基及無菌棉拭子維持細菌活性的能力，以便選擇一個更適用于臨床的標本運送系統(tǒng)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株ATCC25923，大腸埃希菌質(zhì)控菌株ATCC25922，白色念珠菌質(zhì)控菌株ATCC64548，其他為臨床標本隨機分離菌株，包括福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。

1.2材料

兩種運送培養(yǎng)基（法國生物梅里埃公司、浙江拱東醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）；無菌棉拭子（浙江拱東醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）；哥倫比亞血平板（鄭州博賽生物技術(shù)股份公司生產(chǎn)）；巧克力平板（法國生物梅里埃公司生產(chǎn)）；淋球菌平板（鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)）；沙保羅氏平板（江門市凱林貿(mào)易有限公司生產(chǎn)）。

1.3 方法

①將待測菌培養(yǎng)18～24 h，挑取菌落溶于無菌生理鹽水，用比濁儀調(diào)至0.5麥氏單位，再稀釋10倍備用。②每種菌液用三種運送系統(tǒng)棉拭子各6支沾取。③分成6個時間段：0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h，各菌株分別接種于相適應培養(yǎng)基平板，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌接種于哥倫比亞血平板，卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌接種于巧克力平板，淋病奈瑟菌接種于淋球菌平板，白色念珠菌接種于沙保羅氏平板。四分區(qū)劃線，放入35.5℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)24～48 h觀察并記錄各菌株生長情況，按四分區(qū)劃線記錄生長情況，一區(qū)～四區(qū)生長分別記錄為：1～4對應+～++++，0表示平板未見細菌生長。每組實驗重復10次。

1.4統(tǒng)計學分析

采用SPSS19.0軟件處理，所有數(shù)據(jù)都以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較使用方差分析，兩兩比較采用t檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

三種運送系統(tǒng)對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌24 h內(nèi)維持細菌活性能力無明顯區(qū)別。但對所選苛養(yǎng)菌，兩種運送培養(yǎng)基維持細菌活性能力不同程度好于無菌棉拭子，尤其是卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。見表1～6。

3 討論

微生物標本采集后的及時運送對病原菌的培養(yǎng)和正確檢測起著關(guān)鍵性的作用[3]。按規(guī)范，從標本采集到微生物實驗室標本接種不得超過2 h[4]。目前標本采集后，多由護工（少量的由護士）運送至實驗室，由于護工要兼顧多個科室的工作，不是每次都能隨叫隨到，故標本采集到送至微生物實驗室接種培養(yǎng)經(jīng)常超過2 h，如遇夜班時間，放置時間可能會更長。有些細菌如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，特別是淋病奈瑟菌容易死亡，放置時間過長，會降低檢出率，導致細菌培養(yǎng)出現(xiàn)假陰性，影響臨床醫(yī)生的診斷和治療[5-8]。

目前，大部分醫(yī)院多使用一次性無菌棉拭子采集和運送標本，這主要是因為其價格便宜，操作簡便，基本上也能滿足標本采集的要求。無菌棉拭子的不足之處就在于它不能為標本中的細菌提供養(yǎng)分和水分，維持細菌活性的能力差，易導致細菌死亡，影響檢測的正確性。本實驗數(shù)據(jù)表明，如果使用無菌棉拭子采集細菌、培養(yǎng)標本，那么從標本采集到實驗室接種就不能超過1 h，特別是淋病奈瑟菌的采集、運送到接種培養(yǎng)，最好在0.5 h內(nèi)完成，否則難于保證檢測的正確性[9，10]。

本實驗數(shù)據(jù)表明，課題組實驗室引進的兩種一次性使用運送培養(yǎng)基，可為所選各種細菌提供良好的生存環(huán)境，有利于采集標本中細菌的存活。試驗所選的兩種運送培養(yǎng)基均是由一支無菌纖維拭子和含有能維持細菌生物活性的半固體培養(yǎng)基塑料管組成。培養(yǎng)基能為插入其中的標本提供養(yǎng)分和水分，保證細菌存活，使標本能夠較長時間保存[11]。本實驗數(shù)據(jù)表明，臨床標本采集后，使用兩種運送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)運4 h內(nèi)，完全可保證細菌存活，特別是梅里埃運送培養(yǎng)基，即使遇到夜班，標本放置過夜，仍能保持標本中的細菌存活，這為臨床標本的采集、運送和及時接種、培養(yǎng)、檢驗留出了足夠的時間和空間，為避免臨床病原菌的漏檢、提高檢測的正確性創(chuàng)造了有利條件。

本實驗所選菌種為臨床常見病原菌[12-15]，對環(huán)境不敏感的細菌，如金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌，三種運送系統(tǒng)24 h內(nèi)細菌數(shù)量未見明顯減少（P > 0.05），其中白色念珠菌24 h帶菌量還略有增加。但對苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌、淋病奈瑟菌，所選兩種運送培養(yǎng)基與無菌棉拭子維持細菌活性能力的差異比較明顯（P < 0.05）。運送培養(yǎng)基對化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內(nèi)維持細菌活性能力較好，24 h帶菌量變化不大（P > 0.05）。而無菌棉拭子對卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌8 h即無細菌生長，特別是淋病奈瑟菌，1 h帶菌量明顯減少（P < 0.05），4 h無細菌生長。

兩種運送培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內(nèi)維持細菌活性能力相似（P > 0.05），只是梅里埃運送培養(yǎng)基對肺炎鏈球菌24 h帶菌量略有減少，而拱東運送培養(yǎng)基流感嗜血桿菌24 h帶菌量有減少。兩種運送培養(yǎng)基在對維持淋病奈瑟菌活性方面區(qū)別比較明顯（P < 0.05），拱東生產(chǎn)的運送培養(yǎng)基4 h內(nèi)無變化，8 h減少，12 h無細菌生長，梅里埃生產(chǎn)運送培養(yǎng)基24 h內(nèi)帶菌量未見減少，可見對于淋病奈瑟菌，梅里埃運送培養(yǎng)基要優(yōu)于拱東運送培養(yǎng)基。

綜上所述，本課題組實驗室引進的兩種一次性使用運送培養(yǎng)基維持細菌活性的能力明顯優(yōu)于無菌棉拭子，更適合臨床、公共衛(wèi)生和科研使用。在兩種運送培養(yǎng)基中，梅里埃運送培養(yǎng)基的性能優(yōu)于拱東運送培養(yǎng)基，即使夜班采集的標本擱置過夜仍能保證細菌存活。本研究對三種運送系統(tǒng)作了較為詳細、客觀的評價，為臨床選擇和運用提供了科學依據(jù)。

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（收稿日期：2013-01-17）