HSVⅡ—DNA在生殖器皰疹檢測中的應用

[摘要] 目的 探討HSVⅡ-DNA檢測對生殖器皰疹中Ⅱ型單純皰疹病毒（HSVⅡ）陽性檢出率的應用價值。 方法 選取本院2010年7月～2012年7月性病門診收治的生殖器皰疹患者135例為實驗標本，分別予以熒光定量聚合酶鏈反應法（FQ-PCR）檢測 HSVⅡ-DNA和血清酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測HSVⅡ抗體，再以病毒培養法評價以上兩種方法的檢出率。 結果 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA檢測的HSVⅡ陽性檢出率為74.1%，ELISA法HSVⅡ抗體檢測的HSVⅡ陽性檢出率為65.2%，作病毒培養標準檢測的HSVⅡ陽性率為80.7%；FQ-PCR法檢測HSVⅡ的靈敏度、陽性及陰性預測值、特異性顯著高于ELISA法。 結論 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA檢測的HSVⅡ陽性檢出率更貼近于金標準值，并且檢測上具有特異性強、靈敏度高、快速等優越性，對于臨床診斷生殖器皰疹具有重要的應用價值，值得推廣應用。

[關鍵詞] 陽性率；生殖器皰疹；病毒培養；單純皰疹病毒

[中圖分類號] R752.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）13-0092-02

生殖器皰疹（簡稱GH）是臨床常見的一種性傳播疾病，由感染單純皰疹病毒（HSV）所引起[1]。HSV又分為Ⅰ型和Ⅱ型，近年來研究發現，GH的主要感染病原體為HSVⅡ，且發病率逐年增加，已成為最主要的生殖器潰瘍疾病之一[2]。目前HSVⅡ的實驗室檢測方法頗多，本文采用FQ-PCR法檢測GH患者的HSVⅡ-DNA，并與ELISA法HSVⅡ抗體檢測進行對比，探討該方法對于GH診斷的臨床檢測意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇本院2010年7月～2012年7月性病門診收治的生殖器皰疹患者135例為實驗標本，其中男91例，女44例，年齡21～56歲，平均（35.3±7.7）歲，病程3 d～5年。入選標準： ①有非婚不潔性接觸史或者是配偶有GH病史；②生殖器、外陰或者是宮頸皮膚或黏膜有紅斑、裂隙、丘疹、水皰、糜爛、潰瘍、膿包和結痂等，局部刺痛瘙癢；③近兩周內未使用過抗病毒藥、抗生素以及免疫調節劑。

1.2 方法

1.2.1 標本的采集 采用無菌棉簽擦取患者皮損部位的液體或者是陰道分泌物，放入0.5 mL的生理鹽水中；另同時采少量標本，立即放入0.5 mL的病毒移送液中，置入-70℃的冰箱中保存備用。同時抽取2 mL的患者靜脈血，進行離心取血清備用。

1.2.2 HSVⅡ檢測 ①HSVⅡ抗體檢測：采用美國Trinity公司生產的HSVⅡ檢測ELISA試劑盒，根據試劑盒說明進行具體嚴格操作。采用酶標儀（美國Hyperion-MR生產）對血清樣本進行HSVⅡ抗體檢測。②HSVⅡ-DNA檢測：采用的試劑盒為深圳匹基生物工程公司生產，在HSV-DNA保守聚合酶基因序列的設計引物上進行FQ-PCR檢測，根據試劑盒說明嚴格予以操作。③病毒培養：取0.1 mL病毒移送液，將其接種到已經成片的Vero細胞上，在37℃溫度中吸附2 h后再注入維持液，進行37℃恒溫培養，觀察細胞的每日病變（CPE），第3天后若無CPE出現，即汲取培養液0.1 mL，將其轉種于新制單層Vero細胞上繼續進行觀察，如此盲傳3代，仍然沒有出現典型CPE，病毒分離報告即可定為陰性。

1.2.3 評價FQ-PCR和ELISA （1）以病毒培養檢測出的結果為金標準，對上述兩種方法檢測 HSVⅡ的特異度、靈敏度、陽性及陰性預測值分別予以計算，并進行評價。（2）特異性是指HSVⅡ檢測在生殖器皰疹患者以外的人群中的百分比或者是真陰性率，抽選非患該病者為對照組，然后與本組實驗對象進行“+”“-”分布頻數計算。特異性（%）=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%， 靈敏度（%）=真陽性/（假陰性+真陽性）×100%。

1.3 統計學方法

采用SPSS13.0軟件，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HSVⅡ陽性檢出率

135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA檢測檢出HSVⅡ陽性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗體檢測檢出HSVⅡ陽性88例（65.2%），135例患者作病毒培養檢出HSVⅡ陽性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ陽性檢出率明顯更貼近于標準值。

2.2 評價HSVⅡ檢測效果

FQ-PCR法檢測HSVⅡ的靈敏度、陽性及陰性預測值、特異性顯著高于ELISA法。

3 討論

生殖器皰疹（GH）較容易復發，常給患者的性心理障礙及生活質量造成巨大影響，并且HSV感染者大大提高了HIV的易感性。因此，GH患者HSVⅡ的早期檢測、及早診斷和治療對于促進病人皮損愈合、減少其危害性、降低傳染性具有重要意義[3]。

目前實驗室HSVⅡ檢測方法有以下幾種：免疫熒光檢測（簡稱IFA）、病毒分離培養、免疫印跡檢測（簡稱WB）、抗體檢測（簡稱 ELISA）及分子生物檢測（簡稱PCR），但以從皮損或水皰組織液內分離培養出HSVⅡ為檢測的“金標準”[4]。雖然病毒分離培養是作為GH臨床診斷的“金標準”，但因受成本較高、實驗條件嚴格且操作繁瑣等因素影響，只作科研用或者是流行病學調查。目前臨床診斷中仍以血清抗體檢測方式（ ELISA）為主，但當在HSV-Ⅱ感染的初期，患者血清中尚未出現病毒抗體，還有當機體對感染HSV-Ⅱ的免疫反應較低時，并不能產生易檢測抗體，其特異性和靈敏度有待提高。FQ-PCR是近幾年發展起來的新型檢測技術，為分子生物學檢測，用PCR實時熒光定量法對患者皮損中的HSV Ⅱ-DNA進行檢測，能直接檢測出患者皮損部位的HSV-Ⅱ病原體，具有檢測速度快、高靈敏度及特異性強的優勢，大大提高了GH的確診能力。同時不需要開蓋進行PCR產物檢測，避免了傳統PCR技術上易發生假陰性或假陽性污染的不足，增強了診斷的特異性和準確性，臨床上應用亦越來越廣泛[5]。

本文研究顯示，135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA檢測檢出HSVⅡ陽性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗體檢測檢出HSVⅡ陽性88例（65.2%），135例患者作病毒培養檢出HSVⅡ陽性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ陽性檢出率明顯更貼近于標準值，且表1中顯示FQ-PCR法檢測HSVⅡ的靈敏度、陽性及陰性預測值、特異性顯著高于ELISA法，充分論證了FQ-PCR方法檢測的優越性。

綜上所述，FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA檢測的HSVⅡ陽性檢出率更貼近于金標準值，并且檢測上具有特異性強、靈敏度高、快速等優越性，對于臨床診斷生殖器皰疹具有重要的應用價值，值得大力推廣應用。

[參考文獻]

[1] 付玉梅，張曉坤，楊曉儀. 單純皰疹病毒抗體檢測在生殖器皰疹診斷中的應用[J]. 廣東醫學，2011，32（22）：2970.

[2] 蔣源，黃述江，韓永智. 伐昔洛韋抑制療法治療復發性生殖器皰疹的臨床療效[J]. 實用醫學雜志，2012，28（12）：2053.

[3] 方小嫻，林賢娜，方苗. 疑似生殖器皰疹患者單純皰疹病毒抗原及抗體檢測與分析[J]. 國際醫藥衛生導報，2012，18（17）：2519.

[4] 陳志瑾，黎庶，楊杰，等. 細胞培養與PCR法檢測生殖器皰疹病毒的對比研究[J]. 醫學研究生學報，2008，21（2）：155-158.

[5] 尹興平，張海平，曹蕾. 熒光定量PCR和酶聯免疫吸附法檢測生殖器皰疹病毒的對比研究[J]. 中國實驗診斷學，2012，16（7）：1261.

（收稿日期：2013-02-25）