肝臟B超形態學變化、MMP—2及TIMP—2水平與肝纖維化分期的關系

[摘要] 目的 研究慢性乙型肝炎患者肝臟B超形態學改變、血清基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）及其組織抑制因子水平（TIMP-2）與其肝纖維化程度的關系。 方法 選擇我院收治的76例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，對所有觀察對象進行B超引導下肝活檢及肝組織纖維化分期，B超檢查測定門靜脈主干、脾靜脈寬度及脾臟厚度；使用ELISA檢測法檢測慢性乙型肝炎患者血清MMP-2和TIMP-2含量，另外選取15例健康成人作為對照，分析MMP-2、TIMP-2與患者肝纖維化程度之間的關系。 結果 慢性乙型肝炎患者的脾臟厚度、門靜脈主干及脾靜脈寬度隨患者肝纖維化分級的增加而增大；血清MMP-2、TIMP-2水平隨肝纖維化程度加重而升高，r值分別為0.805、0.771，P < 0.05。 結論 肝臟B超形態學改變及血清MMP-2、TIMP-2水平變化對慢性乙型肝炎患者早期肝纖維化的診斷具有重要意義。

[關鍵詞] 超聲檢查；金屬基質蛋白酶-2及其組織抑制因子；肝炎；乙型肝炎；肝硬化

[中圖分類號] R575.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）17-0058-03

乙肝是全球分布，對人類危害嚴重的傳染病，發展為慢性乙肝后容易發生肝臟纖維化、肝癌，判斷肝纖維化程度較可靠的方法是進行肝臟活檢[1-5]，但創傷較大，難以使用，基質金屬蛋白酶（MMPs）及組織抑制劑（TIMPS）可調節肝細胞外基質（ECM）的代謝。肝臟纖維化的發生是由于ECM合成增多，而降解相對減少導致肝內水平增多導致。其中MMPS可促進ECM的降解，TIMPS可通過抑制MMPS阻止ECM的降解而加速肝臟纖維化，肝臟MMPS活性受到抑制，TIMPS功能活性增強導致細胞外基質降解減少[6，7]，在肝臟纖維化的病理發展過程中ECM降解發揮著重要作用，而其降解過程中起主要作用的MMPS是MMP-1、MMP2、MMP3、MMP9，與肝纖維化關系最密切的是MMP2。本文選擇76例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，分析MMP-2、T1MP-2與肝纖維化程度之間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2007年5月～2009年12月入院的慢性乙型肝炎患者76例做為研究對象。其中男46例，女30例，年齡56～71歲，平均（63.5±12.4）歲；病例入選標準：所有患者均符合1995年第四屆北京全國病毒性肝炎會議制定的相關診斷標準，另外選擇15例健康體檢者作為對照，病例排除標準[8] ：排除病情惡化合并嚴重肝腎心臟疾??；肌肉骨骼疾病；合并有活動性肝病、充血性心力衰竭、惡性腫瘤、呼吸功能衰竭的嚴重疾病者。經過統計學處理，兩組患者年齡、性別等基線資料差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

肝臟活檢病理組織學檢查：在B超引導下進行經皮肝臟穿刺活組織檢查術，儀器選用美國Tru-cut16G穿刺針，每例患者檢查不同部位穿刺兩次，穿刺標本長度要求≥1.0 cm，至少在顯微鏡下包括3個以上匯管區。甲醛固定穿刺標本，石蠟包埋，連續制成3 μm石蠟切片，分別用HE染色及網狀纖維染色，診斷標準按照《病毒性肝炎方案》進行肝臟纖維化分期，每張切片由兩位病理科醫生雙盲讀片。B超檢查方法 由一位超聲醫生，于每位患者肝臟活檢術前當日清晨，使用GE超聲顯像儀，進行空腹B超監測，包括MPV、SPV寬度和脾臟肋間厚度。MPV內徑>1.4 cm為增寬，SPV內徑≥1.0 cm為增寬，脾臟肋間厚度>4.0 cm為脾臟增厚。血清MMP2、TIMP-2的測定采用ELISA方法檢測嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法

將所得患者檢測結果錄入電腦，使用SPSS15.0統計學軟件進行處理。計量資料以均數±標準差表示，計數資料采用率的形式。計量資料包括兩組肝臟的MPV、SPV寬度及脾臟肋間厚度血清MMP-2、TIMP-2水平的均數比較采用方差分析，MMP-2、TIMP2分別與肝纖維化程度作秩相關分析，計數資料脾臟增厚發生率采用χ2檢驗，可信區間α取0.05，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝組織纖維化分期結果

慢性乙肝患者肝組織纖維化分期結果為：S0期21例，S1期14例，S2期15例，S3期17例，S4期9例。

2.2 肝臟纖維化分期與MPV、SPV的寬度及脾臟肋間厚度的相關性

根據方差齊性檢驗，四組方差齊，計量資料呈正態分布，可以進行進一步統計學檢驗。慢性乙肝各纖維化分期脾臟厚度同脾靜脈間存在差異，從S2～S4期，MPV、SPV寬度及脾臟厚度增加，各個分期間的厚度、寬度差異具有統計學意義，脾臟增厚程度各期差異明顯，S4期脾臟增厚發生率較高達到51.56%，而MPV、SPV增寬發生率相對低，分別為23.7%（18/76），15.8%（12/76）。見表1。

2.3 慢性乙肝患者血清MMP-2、TIMP-2水平與肝臟纖維化程度的關系

慢性乙肝患者隨肝臟纖維化嚴重程度的增高，MMP-2、TIMP-2水平逐漸升高，S2～S4期升高幅度不斷增大，同對照組比較具有顯著統計學差異（P < 0.05），相關性分析顯示血清MMP-2、TIMP-2水平同肝臟纖維化程度具有明顯正相關，r值分別為0.805、0.771，P < 0.05。見表2。

3 討論

慢性乙型肝炎是由HBV病毒引起的慢性肝臟炎癥，病理基礎是肝臟纖維化，它可以發展成為肝硬化直至癌變，B超可以將失代償性肝硬化診斷出，且相應診斷價值也較高，但對于慢性肝炎患者肝纖維化程度以及門靜脈高壓診斷價值無明顯定論。肝臟纖維化對于門靜脈系統小分支以及肝血竇會造成不同程度的壓迫[9，10]，導致肝臟內部血管阻力的增加，門靜脈血流量增加，最終導致門靜脈高壓，臨床表現為門靜脈和脾靜脈增寬、脾臟增大。本研究中選擇無明顯失代償期肝硬化表現的慢性乙肝患者，比較不同肝臟纖維化分期中，門靜脈及脾靜脈內徑、脾臟腫大之間的關系，結果表明，門靜脈、脾靜脈內徑、脾臟厚度之間的關系為門靜脈脾靜脈內徑、脾臟肋間厚度隨肝臟纖維化程度的增加而逐漸升高，其中脾臟厚度增加在各期中差異較顯著，這也說明脾臟的增厚是肝纖維化分期較為敏感的指標，尤其對于中、重度肝臟纖維化診斷具有重要意義。

肝臟纖維化實質以Ⅰ、Ⅲ型膠原為主的ECM合成與降解失衡[11-13]，最終導致ECM肝內沉積過度。MMPS、TIMPS平衡于ECM合成降解中發揮重要作用。MMPS是一類含鋅離子的肽鏈內切酶，幾乎可以水解所有細胞外基質。TIMPS是近年被發現的能夠特異性抑制MMPS活性蛋白質，為小分子多肽，分為N端、C端兩個功能區，N端的半胱氨酸殘基同MMPS活性中心相結合，而C端與MMPS另外部位結合，以非共價鍵形式構成復合體，而阻斷MMPS同底物結合的過程。正常肝臟中MMPS、TIMPS處于平衡狀態[14，15]，二者可共同維護肝臟微環境穩態。一旦有致病因子將這種平衡打破，會促進肝臟纖維化發生。有研究表明，MMP2、MMP9以及MMP3可以對正常肝臟基質降解。其中MMPS特異性底物是Ⅳ型膠原，TIMP2可以調節MMP2活性，所以MMP2、TIMP2在肝纖維化發生發展中期重要作用，故對于MMP-2及其抑制物TIMP2于肝臟纖維化病理損害中的變化過程進行分析很有必要，我們的研究中發現，隨慢性乙型肝炎患者肝臟纖維化程度的增加，MMP2、TIMP2于血清中含量逐漸增高，幅度不斷加大，二者的相關性分析說明同肝臟纖維化程度呈正相關，說明MMP2、TIMP2血清水平可以作為肝臟纖維化的診斷指標。

綜上所述，肝臟B超形態學改變以及血清MMP-2、TIMP2水平對慢性乙型肝炎患者的肝臟纖維化程度具有良好的診斷價值及重要臨床意義，對于條件欠缺的醫院由于缺乏對MMPS-TIMP2水平的監測能力，故通過肝臟B超形態學檢查評估肝臟纖維化程度的具有重要的輔助診斷價值。

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（收稿日期：2013-03-15）