FHIT和P16蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義

[摘要] 目的 研究FHIT和P16基因蛋白在非小細胞肺癌（NSCLC）中的表達及其意義。 方法 使用組織芯片和免疫組織化學SP法檢測FHIT和P16基因蛋白在60例非小細胞肺癌組織中的表達情況。 結(jié)果 非小細胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。FHIT的表達陽性率在肺鱗癌中為37.93%（11/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）；P16的表達陽性率在肺鱗癌中為31.03%（9/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。FHIT蛋白表達與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關（P < 0.05）。 結(jié)論 尚不能認為非小細胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達相互關聯(lián)。FHIT和P16在肺鱗癌發(fā)生中起了重大作用，F(xiàn)HIT可作為預測非小細胞肺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；FHIT；P16；免疫組織化學；組織芯片

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）36-0147-02

Expression and significance of FHIT and P16 proteins in non-small cell lung cancer

ZHANG Yanzi1 ZENG Xiangyi1 ZOU Xihong1 LI Qiulian1 PENG Qian1 WANG Xiaoping1 DU Richang2

1.The Second Respiratory Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province， Shaoguan 512000， China； 2.The Pathology Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province，Shaoguan 512000， China

[Abstract] Objective To discuss the expression and significance of FHIT and P16 in non-small cell lung cancer. Methods The expressions of FHIT and P16 proteins were studied by tissue chip technique and immunohistochemical SP methods in 60 cases of non-small cell lung cancer tissues. Results The positive expression rate of FHIT and P16 protein in NSCLC was no statistically significant difference（P > 0.05）. The positive expression rate of FHIT protein was 37.93%（11/29） in squamous carcinoma tissues while 70.96%（22/31）（P < 0.05）. This study also showed that the positive expression rate of p16 protein was 31.03%（9/29） in squamous carcinoma tissues of lung and 70.96%（22/31） in lung adenocarcinoma tissues（P < 0.05） . The expression of FHIT in NSCLC was closely related to lymph nodes metastasis（P < 0.05）. Conclusion It can not be considered that the expression of P16 and FHIT protein in NSCLC were correlated with each other. FHIT and P16 play important role in the the development of squamous carcinoma of lung. FHIT may be considered as an indicator to predict the presence of lymph node metastasis in non-small cell lung cancer.

[Key words] Non-small cell lung cancer； FHIT； P16； Immunohistochemistry； Tissue chip

惡性腫瘤是常見的一類疾病，人們談“癌”色變。近年來，在腫瘤分子生物學研究領域中，許多人在研究腫瘤基因的異常表達與腫瘤的關系。本實驗在2009年通過組織芯片和免疫組化觀察FHIT和P16基因蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達情況，進而探討FHIT和P16基因與非小細胞肺癌發(fā)病關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

標本為存檔石蠟標本60例（為胸外科手術(shù)后經(jīng)病理科確診為非小細胞肺癌），其中鱗癌29例，腺癌31例；33例為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，27例為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。實驗試劑：SP試劑盒、FHIT兔抗人多克隆抗體（工作液）、P16鼠抗人單克隆抗體（工作液）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 制片

先制成組織芯片石蠟塊后，然后切片，采用免疫組化SP法，詳細步驟嚴格按照說明書進行。用已知陽性的腎組織切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學

FHIT和P16蛋白的表達免疫組化以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，F(xiàn)HIT和P16蛋白陽性主要定位在胞漿，少數(shù)定位在細胞核。0～10%腫瘤細胞內(nèi)可見棕黃色顆粒為陰性；>10%腫瘤細胞見棕黃色顆粒為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用軟件SPSS13.0進行χ2檢驗或四格表確切概率法，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 FHIT和P16蛋白在非小細胞肺癌中的表達

見表1。

表1 FHIT和P16蛋白在非小細胞肺癌中的表達

注：χ2=0.1667，P > 0.05

2.2 非小細胞肺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中FHIT和P16蛋白表達

見表2。

2.3 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌與腺癌中的陽性表達

見表3。

2.4 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌中的表達

見表4。

表4 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌中的表達

注：χ2=0.3333，P > 0.05

3 討論

肺癌的發(fā)病率和病死率呈逐年增加趨勢。基因改變在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起決定性的作用，基因調(diào)節(jié)細胞生長和分裂。兩類基因即致癌基因和抑癌基因均參與了腫瘤的發(fā)生。脆性組氨酸三聯(lián)體基因（fragile histidine triad，F(xiàn)HIT）被認為是抑癌基因，定位于染色體3p14.2上，它是將脆性位點與腫瘤相聯(lián)系起來[1]。3p14.2區(qū)域有500 kb，可以包含許多其他基因。p16基因又稱為多種腫瘤抑制物基因，被認為是重要的抑癌基因，p16基因編碼的蛋白產(chǎn)物具有生長抑制作用。p16基因的滅活與腫瘤發(fā)生密切相關。文獻[2]認為p16基因的表達缺失是非小細胞肺癌中的常見事件。王國付等[3]認為FHIT蛋白和P16蛋白表達缺失與非小細胞肺癌的發(fā)生有關。Chen P等[4]實驗示：p16及FHIT基因轉(zhuǎn)錄本缺失檢出率在肺癌患者中顯著高于良性肺部疾病的患者。表1示本實驗60例非小細胞肺癌標本中20例肺癌FHIT、P16同時表達陽性，13例肺癌FHIT陽性、P16陰性，11例肺癌FHIT陰性、P16陽性，而16例肺癌FHIT、P16同時表達缺失，表明肺癌的致癌因素不僅僅是FHIT、P16表達缺失，本實驗所選標本至少有三種因素參與了肺癌的發(fā)生。說明多種基因功能異常和多種因素作用形成肺癌。單純恢復某一個抑癌基因的功能可能不能完全抑制腫瘤的生長。文獻[5]認為非小細胞肺癌中FHIT與P16蛋白表達呈正相關。但從表1可以看出非小細胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），尚不能認為非小細胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達相互關聯(lián)。

FHIT蛋白陽性表達率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺癌組為37.03%（10/27），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為69.69%（23/33）（P < 0.05）。P16的表達陽性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為40.74%（11/27），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為60.60%（20/33）（P>0.05）。文獻[6]認為P16缺失與肺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。表明FHIT蛋白表達與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，可作為預測腫瘤有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標，而P16則不然。本實驗FHIT的表達陽性率在肺鱗癌中為37.93%（11/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。P16的表達陽性率在肺鱗癌中為31.03%（9/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。王萍等[7]認為肺鱗癌中FHIT基因和P16基因表達缺失均低于肺腺癌。王國琴等[8，9]實驗示FHIT蛋白在肺鱗癌中失表達陽性率高于腺癌，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。楊文君等[10]認為P16表達與肺癌病理組織分型無關。本實驗證明FHIT基因、P16基因表達缺失與非小細胞肺癌病理組織類型有關，參與肺鱗癌的發(fā)生、發(fā)展。檢測FHIT基因、p16基因表達缺失可以作為鑒別肺癌的組織類型的一個參考指標。從表4可以看出FHIT、P16蛋白在肺鱗癌中的表達差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），尚不能認為兩者在肺鱗癌表達有關系。兩者在肺鱗癌的發(fā)生過程中可能存在關聯(lián)，也有可能為獨立因素。有待進一步研究。

肺鱗癌中FHlT基因、P16基因失表達都是頻發(fā)事件，但應用該兩基因蛋白診斷肺鱗癌時，目前尚無優(yōu)劣之分。而FHlT基因、P16基因可能在肺腺癌的發(fā)病過程中并非起關鍵作用，有待進一步研究肺腺癌的發(fā)病機制。FHIT和P16在肺鱗癌發(fā)生中起重大作用。聯(lián)合檢測FHIT和P16蛋白有利于判斷非小細胞肺癌的病理組織類型。FHIT可作為預測非小細胞肺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標。

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（收稿日期：2013-11-08）